间充质干细胞功能及应用课件

MSC简介MSC安全性评价MSC功能与应用中国的政策间充质间充质干细胞干细胞简介简介1#间充质间充质干细胞干细胞 间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC），来源于发育早期的中胚层，1968年MSC在骨髓中发现，后发现其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。BM-MSC接种在珊瑚状羟基磷灰石微载体（3小时后的扫描电镜500X）Tissue Eng 2002;8(6):911-920间 充 质 干 细 胞没满 4X长满 4X间间 充充 质质 干干 细细 胞胞 贴壁生长贴壁生长 特定表面标志特定表面标志 阳性阳性 (95(95%)%)阴性阴性 (2(2%)%)CD105 CD45 CD105 CD45 CD73 CD34 CD73 CD34 CD90 CD14 or CD11b CD90 CD14 or CD11b CD79 or CD19 CD79 or CD19 HLA-DR HLA-DR 多向分化潜能多向分化潜能 体外分化能力体外分化能力:软骨，成骨，脂肪软骨，成骨，脂肪The International Society For Cell Therapy Cytotherapy,8:315-317,2006鉴定标准（鉴定标准（最低最低标准）：标准）：Annu Rev Pathol 2011;6457-478MSC脂肪脂肪骨髓骨髓脐带脐带脐带血脐带血牙髓牙髓外周血外周血胸腺胸腺羊膜羊膜富含富含MSC的人体组织的人体组织图片来自网络年龄与骨髓MSC含量的变化研究的里程碑研究的里程碑1，1995年间充质干细胞首次应用于临床治疗，评价血液肿瘤患者使用后的安全性和有效性。研究的里程碑研究的里程碑2，1999年science发表文章，首次证明MSC的多向分化能力！研究的里程碑研究的里程碑3，2002年Exp Hematol和blood 发表文章，首次证明MSC具有免疫抑制能力！研究的里程碑研究的里程碑4，2006年国际细胞治疗协会（ISCT）颁布了间充质干细胞的定义（最低鉴定标准）。研究的里程碑研究的里程碑5，2012年Osiris公司申报MSC作为药品上市得到加拿大FDA的批准，MSC的临床应用达到一个历史性高度！1，活性差、功能低的间充质干细胞（自体骨髓间充质干细胞）2，脐血单个核细胞（mononuclear cell，不是monocytes）冒充间充质干细胞（部分医院和企业）3，干细胞制剂里添加各种药物（激素）4，治疗方案没有经过优化5，各种忽悠的干细胞类型，比如：外周血干细胞（外周血含有少量的间充质干细胞，但目前无法扩增到临床所需的细胞数）、母乳干细胞（退一步说，即使母乳里含有干细胞，但经过胃酸和肠道消化，早就死翘翘了）、植物干细胞、心脏干细胞（专业上有心肌干细胞）等负面消息（包括无效）的特点负面消息（包括无效）的特点MSC的新理解Cell Immunol 2012;272(2):112-116MSC是机体免疫系统安全信号的来源！血液病血液病1994年Matzinger提出“danger model”核心：免疫系统只关心其是否受到损坏来启动免疫反应或诱导免疫耐受受到损坏（dangerous）活化APC活化T-cell未受到损坏（not dangerous）诱导免疫耐受signals遗憾遗憾：当时没有明确涉及dangerous signals和safe signals的定义和内涵。Danger Model应用受限应用受限2001年Matzinger提出具体的“dangerous signals”SignalsDangerous siganlsSafe signalsendogenous:Hsp,DNA,RNA,TNF,CD40L exogenous:unmethylated CpG sequences in microbial（2001年）?意义意义：能够解释更多免疫学现象，成功地解释了坏死细胞为何能诱导免疫应答反应。：能够解释更多免疫学现象，成功地解释了坏死细胞为何能诱导免疫应答反应。Danger Model应用受限应用受限MSCs是免疫系统是免疫系统“安全信号安全信号”的来源的来源acute phasechronic phasesafe signalsself-MSCsCell Immunol.2012;272(2):112-6MSC在在免疫中的作用免疫中的作用思思 考考人体含丰富的MSCMSC具有很强的免疫调节功能为何还会出现自身免疫性疾病？间充质间充质干细胞干细胞安全性评价安全性评价2#“成瘤性/致癌”的担忧和恐惧是干细胞临床应用的最大障碍！担忧和恐惧的最早来源是胚胎干细胞的强致癌性，包括后来的iPS。What about mesenchymal stem cell(间充质干细胞)？Think about hemopoietic stem cell(造血干细胞)！不是所有的干细胞都具有成瘤性/癌变！1，间充质干细胞广泛存在于人体中，包括外周血、骨髓、脂肪、所有组织器官的基质（Ann Med 2005;37(7):469-479）。如果间充质干细胞具有成瘤性，那么肿瘤一定伴随着每个人的完整人生！2，每次患者输血或造血干细胞移植（骨髓移植），都伴随着输入少量的间充质干细胞。但从来没有证据证明输血和造血干细胞移植能导致肿瘤的出现！3，间充质干细胞作为药品，已经在国外上市，那是否意味着安全性已经得到国外的认可？能否得到中国专家、医生、民众的认可？值得反思的三点值得反思的三点安全性评价安全性评价临床使用安全性报道：-J Gastroenterol Hepatol 2012;27 Suppl 2112-120-Stem Cells Transl Med 2012;1(10):725-731安全性评价安全性评价临床使用安全性报道：-Stem Cells Dev 2013;22(24):3192-3202-J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150安全性评价安全性评价临床使用安全性报道：8个随机随机对照对照临床试验（RCTs）发现MSC治疗组和对照组的感染率没有差异，明确提出MSC治疗不会增加感染的风险，MSC治疗组和对照组在恶液质和成瘤方面没有差异。J Invasive Cardiol 18:552556；Chin Med J(Engl)117:14431448；J Am Coll Cardiol 54:22772286；Stem Cells 28:10991106；Clin Pharmacol Ther 83:723730；Leukemia 22:593599；Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi 34:107110(Chinese)；Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research 11:12771279(Chinese)安全性评价安全性评价临床使用安全性报道：对目前大量的临床试验的文献进行分析（Meta-Analysis），发现MSC输入治疗与发烧发烧存在一定的关联性，而与其他文献所报道的不良反应没有必要的联系，认为MSC治疗是安全的。PLoS One 2012;7(10):e47559 MSC治疗软骨损伤，41个病人的45个关节软骨，最长观察11年5 个月，没发现患者得肿瘤等副作用，证明了MSC的长期安全性！J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150.安全性评价安全性评价风险控制风险控制基因组稳定性 体外扩增导致的基因突变微生物 病毒 细菌 支原体辅料素 内毒素 胎牛血清残留稳定性评价生产工艺 Array-CGH and cytogenetic analyses showed that BM-MSCs expanded in vitro did not show chromosomal abnormalities.Telomerase activity and hTERT transcripts were not expressed in any of the examined cultures and telomeres shortened during the culture period.(Cancer Res 2007;67(19):9142-9149)P14P18稳定性评价稳定性评价稳定性评价稳定性评价P30Although hUC-MSCs with genomic alterations do not undergo malignant transformation,periodic genomic monitoring and donor management focusing on genomic stability are recommended before these cells are used for clinical applications.(Cell Death Dis 2013;4e950)生产工艺管理要求干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）干细胞制剂的质量控制明确提出要求：“应制定干细胞采集、分离和干细胞（系）建立的标准操作及管理程序，并在符合符合GMPGMP要求要求基础上严格执行。”GMP级车间级车间欧盟GMP关键点（Cytotherapy 2015;17(2):128-139）间充质间充质干细胞干细胞功能及应用功能及应用3#多向多向分化分化免疫调节能力免疫调节能力消炎消炎能力能力促进促进器官特异性干细胞增殖器官特异性干细胞增殖修复修复组织组织器官器官软骨损伤软骨损伤/缺损、血管新生缺损、血管新生GVHD、自免肝、自免肝、RA、SLE、移植、移植排斥排斥各种炎症、脑水肿、溃疡性结肠炎各种炎症、脑水肿、溃疡性结肠炎肝病、神经系统疾病、再障肝病、神经系统疾病、再障心梗、中风心梗、中风间充质干细胞间充质干细胞功能应用多重治疗机制，但有偏重！多重治疗机制，但有偏重！MSC研究的差异性Cell Cycle;9(15):2923-2924MSC分泌的趋化受体（绿色）和趋化因子（蓝色）Stem Cells 2008;26(9):2287-2299MSC具有很强的趋化性Cell Stem Cell 2009;5(1):54-63MSC在肺部滞留，激活TSG-6的高表达。MSC在肺部的清除和激活在肺部的清除和激活Control Nude NOD/SCID Nude Balb/c Balb/c MSCMSCFibroblastFibroblastMSC体内代谢体内代谢Zangi L,et al.Stem Cells 2009;27:2865-2874天数天数 Circulation 2005;112(10):1451-1461Cytotherapy 2015;肺部没有损伤肺部有损伤 Circulation 2005;112(10):1451-1461脐带脐带MSC和和骨髓骨髓MSC（细胞因子表达）（细胞因子表达）Biology of Blood and Marrow Transplantation 13:1477-1486,2007我们的结果我们的结果:Haematologica.2006;91:1017-26CytokineUC-MSCBM-MSCIL-6+LIF+IL-3-GM-CSF+-G-CSF+-SDF-1+M-CSF+VEGF+FLt-3+SCF+2MG+评价MSC的质量克隆形成能力细胞大小免疫调节能力分泌细胞因子的量MSC免疫调节因子趋化因子营养因子血管再生因子抑制疤痕因子抗凋亡因子HGF、TGF-1、PGE2、IDORANTES、SDF-1、MIP-1、MCP-1HGF、NGF、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGFVEGF165、FGF-2、EGF、PDGF-AA、PDGF-BB、HGF、FGF-2VEGF165、FGF-2、HGFStem Cells 2015;33(6):1878-1891空气洁净度脐带脂肪骨髓影响MSC的质量的因素MSC功效来源病理生理细胞活率体外培养健康患者培养营养年青年老活率越高越好概念的差异临床研究：clinical study 是以人体疾病的诊断、治疗、预后、病因和预防为主要研究内容。临床试验：clinical trial 指任何在人体（病人或健康志愿者）进行药物的系统性研究，以证实或揭示试验药物的作用、不良反应及/或试验药物的吸收、分布、代谢和排泄，目的是确定试验药物的疗效与安全性。临床试验一般分为I、II、III、IV期临床试验和EAP（expanded access program）临床试验。间充质干细胞间充质干细胞临床试验：全球（临床试验：全球（554+115项）项）2015-11-1搜索词搜索词结果结果间充质干细胞间充质干细胞临床临床试验试验：中国（：中国（109+9项）项）2015-11-1搜索词搜索词结果结果全球分布（区域）全球分布（区域）Up to 2015-11-01MSC的全球的全球clinicaltrials项目项目完成临床试验发表文章的病种MSC免疫系统心血管造血系统神经系统运动医学呼吸系统GVHD、肾移植Crohns病、RA急性心梗、心肌缺血、心衰难治性心绞痛、扩张型心肌病下肢缺血再障、GVHD帕-罗二氏综合征脊髓损伤、MS膝骨关节炎软骨缺损骨发育不全支气管肺发育不全COPDMSC质量最佳治疗方案最佳治疗效果间充质干细胞间充质干细胞美国FDA对间充质干细胞治疗的支持！间充质干细胞间充质干细胞国家国家年份年份公司公司细胞来源细胞来源适应症适应症加拿大FDA2012美国Osiris公司骨髓GVHD韩国FDA2011FCB-Pharmicell公司自体骨髓急性心梗韩国FDA2012Medi-post公司脐带血退行性关节炎和膝关节软骨损伤韩国FDA2012Cuepistem公司自体脂肪复杂性Crohn病并发肛瘘新西兰FDA2012美国Osiris公司骨髓GVHD瑞士FDA2012美国Osiris公司骨髓GVHD作为药品上市：作为药品上市：慎用症：严重的精神病史，目前病情仍未稳定者；肿瘤或癌症患者（取决于使用目的）；高度过敏体质或有严重过敏史（产品的辅料）；极个别期望值过高，或者不切合实际的要求者；间充质干细胞间充质干细胞间充质干细胞间充质干细胞World J Stem Cells 2014;6(5):526-539World J Stem Cells 2014;6(5):526-539The balance between these opposing pathways may serve to promote host defense on one hand and at the same time create a loop that prevents excessive tissue damage and promotes repair.(Cell Stem Cell 2013;13(4):392-402.)不同来源的MSC的免疫功能比较脐带MSC的免疫抑制功能优于健康人和SLE患者骨髓MSC，而且MHC-I类抗原表达量最低。J Immunol 2014;193(9):4381-4390思思 考考现在的免疫学认识是否足以解释MSC临床现象？MSC免疫调节能力免疫调节能力Days05101520253035Score0246810GVHD GroupGVHD+UC-MSC GroupaGVHD组MSC治疗组小鼠小鼠GVHD临床表现：临床表现：倦怠倦怠、纳差、消瘦、体重下降、纳差、消瘦、体重下降、弓背弓背、脱毛、腹泻脱毛、腹泻等等免疫重建免疫重建胸腺胸腺组织具有可塑性，可通过治疗阻止或恢复胸腺功能。组织具有可塑性，可通过治疗阻止或恢复胸腺功能。我们证明间充质干细胞能促进胸腺的发育和免疫系统的重建！Cell Mol Immunol 2014;11(3):275-284骨髓骨髓MSC治疗治疗GVHDa phase II study.Lancet 2008;371(9624):1579-1586中国第一例 2006-9-26造血干细胞移植治疗后，出现移植物抗宿主病（GVHD），表现为腹泻、皮疹瘙痒、肝脏损伤等，外周静脉输入间充质干细胞后，腹泻及皮疹消失、肝功能正常，血象显示造血干细胞正常造血。脐带脐带MSC治疗治疗GVHD病例病例1 肝功能改善 12/12（100%）腹泻次数减少 5/6（83.3%）皮疹消退 12/12（100%）口干眼干 1/1（100%）血象改善 3/3（100%）道培医院治疗道培医院治疗12例患者的情况例患者的情况GVHD的表现：生存率100%类风湿性关节炎（类风湿性关节炎（RA）T 细胞介导的全身性自身免疫性疾病，由于病人免疫耐受机制的缺失，造成关节滑膜炎和关节损伤。患者，女性，患者，女性，26岁，类风湿病史岁，类风湿病史10年。年。症状：头昏症状：头昏,疲劳乏力、颈椎僵硬疲劳乏力、颈椎僵硬,双手双手指骨关节变形、肿胀，活动受限，胃指骨关节变形、肿胀，活动受限，胃肠功能也减退，食欲不振，精神萎靡。肠功能也减退，食欲不振，精神萎靡。08年年8月月5日，进行日，进行UC-MSC移植治疗。移植治疗。第二天，手指明显消肿，其它关节肿第二天，手指明显消肿，其它关节肿胀也消退，全身症状明显减轻胀也消退，全身症状明显减轻，胃肠，胃肠功能逐渐恢复，精神状态良好，现在功能逐渐恢复，精神状态良好，现在可正常工作。可正常工作。MSC治疗类风湿性关节炎治疗类风湿性关节炎悲喜孕事MSC治疗类风湿性关节炎治疗类风湿性关节炎Stem Cells Dev 2013;22(24):3192-3202治疗方案：前三个月，每个月一次，再隔2-3个月，第4次治疗。异体骨髓MSC治疗Crohns病多中心、II临床研究Clin Gastroenterol Hepatol 2014;12(1):64-71脐带MSC治疗SLE40名活动期SLE患者（死亡3例），1x106/kg，在第0天和第7天各静脉注射一次。没有对症组。a multicenter clinical study.Arthritis Res Ther 2014;16(2):R79MSC在肾移植中的应用A Randomized Controlled Trial.JAMA 2012;307(11):1169-1177肾移植2周后，外周静脉输入自体骨髓MSC(12)x106/kg间充质干细胞间充质干细胞异体骨髓MSC治疗COPD（慢阻肺）Quality of Life？每个月一次，连续4次，1x108MSC/次。Chest 2013;143(6):1590-1598自体骨髓MSC治疗多发性硬化症（MS）an open-label pre-test:post-test study with blinded outcome assessments10名患者，8名健康者，治疗一次，(1-2)x106/kg，观察1年。Trials 2011;1262自体脂肪MSC治疗膝骨关节炎1x108AD-MSC关节腔注射能有效改善膝盖关节功能，减少疼痛。Stem Cells 2014;32(5):1254-1266异体骨髓MSC治疗心肌梗塞随机、双盲临床研究：心肺功能明显改善，左心室射血分数明显提高。没有统计再次心脏血管堵塞情况。急性心梗再通后，外周静脉输入(0.5-5)x106/kg的MSC，一次治疗。J Am Coll Cardiol 2009;54(24):2277-2286脐带MSC治疗心肌梗塞多中心II期研究：心肌活力明显增强，左心室射血分数明显提高。没有统计再次心脏血管堵塞情况。急性心梗再通后，冠脉介入注射6x106MSC，一次治疗。BMC Med 2015;13162自体骨髓MSC治疗慢性脊髓损伤损伤局部介入注射5x106MSC，一次治疗。Stem Cell Res Ther 2014;5(6):126异体骨髓MSC治疗儿童骨发育不全MSC治疗后，促进骨骼生长和骨密度增加。三个病人，没有对照组，没提及治疗方案。Nat Med 1999;5(3):309-313骨髓MSC治疗心肌缺血12个月后，6-minute walk test31个病人MSC细胞数为(2-20)x107/人治疗一次经心内膜干细胞注射（TESI）短期效果：提高生活质量，改善心脏功能。JAMA 2012;308(22):2369-2379模型鼠治疗组正常鼠MSC治疗脑中风治疗脑中风脐带MSC治疗，缺血区的血管密度增加，提高缺血区的血供！MCAO(中脑动脉闭塞)rat model患者，男性，患者，男性，26岁，突发大面积岁，突发大面积脑梗塞，全身瘫痪，知名专家诊脑梗塞，全身瘫痪，知名专家诊断，断，“他们可能不能再坐起来了他们可能不能再坐起来了”。07年年12月，月，08年年7月月5日两次输入日两次输入患者儿子的脐带间充质干细胞，患者儿子的脐带间充质干细胞，目前患者恢复了四肢的知觉，谈目前患者恢复了四肢的知觉，谈笑自若，笑自若，与正常人没有区别。与正常人没有区别。患患者自行行走到医院进行第二次干者自行行走到医院进行第二次干细胞治疗。细胞治疗。MSC治疗脑梗塞治疗脑梗塞MSC治疗糖尿病足治疗糖尿病足 田某某，女，田某某，女，2222岁，因面部红斑，在当地医院诊断：系统性红斑狼岁，因面部红斑，在当地医院诊断：系统性红斑狼疮，经激素冲击治疗无效，出现双侧股骨头坏死，此后患者出现头晕、疮，经激素冲击治疗无效，出现双侧股骨头坏死，此后患者出现头晕、疲乏，经第四军医大学附属医院诊断为再生障碍性贫血。疲乏，经第四军医大学附属医院诊断为再生障碍性贫血。患者于患者于20102010年元月份入院检查，年元月份入院检查，血常规提示：血常规提示：WBC 2.8 WBC 2.810109 9/L/L，Hb Hb：76g/L76g/L，PLT 31 PLT 3110109 9/L/L，血沉血沉80mm/h80mm/h，MR MR提示双侧股骨头无菌性坏死。提示双侧股骨头无菌性坏死。MSCMSC治疗再障治疗再障诊断：1.1.系统性红斑狼疮；系统性红斑狼疮；2.2.慢性再生障碍性贫血慢性再生障碍性贫血 中度贫血；中度贫血；3.3.双侧股骨头无菌性坏死。双侧股骨头无菌性坏死。处理及效果：经用间充质干细胞经用间充质干细胞8 810107 7静脉输注，静脉输注，六周后六周后再次输注，复查血常再次输注，复查血常规提示：规提示：WBC 3.7WBC 3.710109 9/L/L，HbHb：90g/L90g/L，PLT 45PLT 4510109 9/L/L，血沉下降至，血沉下降至40mm/h40mm/h，腹部，腹部B B超提示肝胆肾胰未见明显异常。超提示肝胆肾胰未见明显异常。MRMR提示双侧股骨头无提示双侧股骨头无菌性坏死，与原片对照无进展。菌性坏死，与原片对照无进展。十二周后十二周后第三次输注，全身静脉间充第三次输注，全身静脉间充质干细胞质干细胞4 410107 7静脉输注，静脉输注，双侧股骨头插管双侧股骨头插管（髂外动脉内旋支），分（髂外动脉内旋支），分别给予别给予1 110107 7干细胞，局部酸困不适减轻，面部红斑消退，面色红润，干细胞，局部酸困不适减轻，面部红斑消退，面色红润，半半年后生化及血常规正常。年后生化及血常规正常。任任xxxx，男，男7676岁，因患银屑病，经各方治疗效果不佳，长期岁，因患银屑病，经各方治疗效果不佳，长期服用甲氨蝶呤，服用甲氨蝶呤，3 3年前出现腹胀，下肢水肿，于年前出现腹胀，下肢水肿，于20102010年入院诊断年入院诊断为银屑病（红皮病型），肝硬化失代偿期为银屑病（红皮病型），肝硬化失代偿期 大量腹水，低蛋白血大量腹水，低蛋白血症，下 肢 水 肿 重 度，经 肝 动 脉 插 管 注 入 间 充 质 干 细 胞症，下 肢 水 肿 重 度，经 肝 动 脉 插 管 注 入 间 充 质 干 细 胞1 110108 8/80ml/80ml，术中无不良反应，术中无不良反应，次日全身皮肤瘙痒停止，脱屑次日全身皮肤瘙痒停止，脱屑大幅减少，两月后患者皮肤呈局灶恢复大幅减少，两月后患者皮肤呈局灶恢复。MSCMSC治疗银屑病并发肝硬化治疗银屑病并发肝硬化患者治疗前后体征改变记录患者治疗前后体征改变记录前前后后 朱：女，27岁，2008年开始身体不适，2010年3月确诊为卵巢早衰。去过多家三甲医院诊治，医生建议服用雌激素治疗，直至50岁。2010年5月开始服用雌激素。2010年9月，经朋友介绍，来医院进行间充质干细胞治疗。两周后潮热症状明显减轻，1个月后停用雌激素。到目前为止，应用干细胞治疗3次（1次/月）。建议治疗6次以上。目前月经周期基本正常，各项指标恢复良好。间充质干细胞治疗卵巢早衰间充质干细胞治疗卵巢早衰治治疗疗后骨密度增加大后骨密度增加大约约5.7%治治疗疗后骨密度增加大后骨密度增加大约约2%BMD 0.5217g/cm2 BMD 0.5309g/cm2 BMD 0.5601g/cm2 BMD 0.5918g/cm2松质骨松质骨Mrs.Na (Female/78)密质骨密质骨MSC治疗放射性肺损伤治疗放射性肺损伤MSC尾静脉注射，治疗放射性肺损伤大鼠模型。28天后，组化染色提示MSC治疗减少肺部炎症渗出、减少肺纤维化的形成。Cytotherapy 2015;17(5):560-570MSC治疗放射性肺损伤治疗放射性肺损伤MSC治疗放射性肺损伤，在于减少肺部炎症、减少肺上皮细胞的凋亡；减少促纤维化因子的表达，从而预防肺纤维化的形成。Cytotherapy 2015;17(5):560-570MSC治疗放射性肠损伤治疗放射性肠损伤Cell Death Dis 2013;4e685MSC治疗肝病在在clinicaltrials登记注册的项目数登记注册的项目数（2015-11-1）应用受限应用受限MSCs及其向肝细胞分化后的肝细胞样细胞（肝细胞样细胞（HLCs）的功能比较：MSCsHLCs免疫调节能力 减弱分泌HGF 减少趋化能力 减弱急性肝衰竭的疗效 减弱MSCs及其向肝细胞分化后的肝细胞样细胞（肝细胞样细胞（HLCs）的功能比较：结论：直接用MSCs治疗急性肝衰竭的疗效优于分化后的HLCs。Cytotherapy 2014;16(3):309-318.我国肝衰竭患者2年死亡率1，我国报道肝衰竭的病死率为73.9%，其中急性肝衰竭为87.8%、亚急性肝衰竭为69.3%、慢性肝衰竭为66.5%，凝血功能越差，病死率越高（临床肝胆病杂志2009,25(5):352-354）；2，中山大学传染病医院（3附院）肝衰竭2年的死亡率到50%（和MSCs治疗组没差异）（Peng,L.,D.Y.Xie,et al.(2011).Hepatology 54(3):820-828.）。3，北京302医院肝衰竭2年的死亡率到60%，间充质干细胞（MSCs）治疗后降低到30%（Shi,M.,Z.Zhang,et al.(2012).Stem Cells Transl Med 1(10):725-731）。肝衰竭患者的选择肝衰竭肝移植间充质干细胞失败成功优先MSC治疗肝病的多重机制Stem Cell Res 2013;11(3):1348-1364 1#文献题目:Autologous bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in liver failure patients caused by hepatitis B:short-term and long-term outcomes(Hepatology 2011;54(3):820-828)结论:短期内能改善肝功能，但长期没有效果。治疗方案:骨髓来源的MSC，治疗1次，肝动脉介入，但没有细胞数。间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析P=0.715临床大样本数据直接证明自体骨髓自体骨髓MSC治疗肝衰竭无效无效！2#文献题目:Human mesenchymal stem cell transfusion is safe and improves liver function in acute-on-chronic liver failure patients(Stem Cells Transl Med 2012;1(10):725-731.)结论:间充质干细胞能改善肝功能，提高肝衰竭患者的生存率，减低MELD评分。治疗方案:脐带来源的MSC,治疗3次，每个月一次，外周静脉，0.5x106/kg间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析 3#文献题目:Clinical therapeutic effects of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells transplantation in the treatment of end-stage liver disease(Transplant Proc 2015;47(2):412-418)结论:在24周的观察期内，肝功能改善明显，但凝血功能没有改善。治疗方案:脐帯来源的MSC，治疗一次，肝动脉介入，3x107/每人MELD Score:from 8.49 to 7.57但是，本文没有提及肝衰竭患者的生存率！间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析文献文献MSC来源来源细胞数细胞数治疗次数治疗次数输入途径输入途径生存率生存率MELD 评分评分1#骨髓-1次肝动脉介入50%没变化2#脐带0.5x106/kg3次外周静脉70%下降3#脐带3x107/每人1次肝动脉介入-没对照组总结表：体会:疗效与三方面密切相关：治疗方案，MSC的来源，适应症的选择注:第二个文献所用的MSC是我公司提供的干细胞产品。间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析间充质干细胞治疗肝衰竭的文献分析2013年以来的4名肝衰竭患者2013年以来的4名肝衰竭患者经过6-8次的UC-MSC治疗，全部摆脱肝衰竭的病理状态，凝血功能达不到诊断肝衰竭的标准！MSC治疗肝衰竭治疗肝衰竭1#2013-12-3 北京302医院肝硬化诊疗中心治疗时间：2013-8至2014-11。治疗方案：每个月一次，每次6x107脐带MSC诊断：乙肝肝硬化（失代偿期）肝衰竭（慢加急）肝性脑病 食管胃底静脉曲张破裂大出血 脾切除术后肝硬化&肝衰竭1#时间时间ALT/AST（U/L）白蛋白白蛋白（g/L）总胆红素总胆红素（umol/L）凝血酶原凝血酶原时间（时间（S）凝血酶原凝血酶原活动度活动度INRB超超2013-7-306/2935.660.226.730%2.52肝硬化（肝门静脉主干和左右支内栓子形成）2013-8-1112/3936.540.719.847%1.962014-1-1235/774319.415.562.7%1.342014-6-1723/3732.735.214.978%1.17肝硬化（肝门静脉主干和左右支内栓子形成）2014-9-2550/8036.43911.782%1.06肝脏弥漫性病变，无血栓 2014-11-229/4637.926.311.593%1.04肝脏弥漫性病变，无血栓正常值0-40/0-5040-553.4-20.511-1580-120%肝病专业评分1#时间时间Child-PughMELD2013-7-3012分（C级）20分2014-6-179分（B级）11分2014-11-25分（A级）4分MSC治疗肝衰竭治疗肝衰竭2#诊断：1，肝衰竭，慢加急2，肝硬化 失代偿期3，肝性脑病4，肺炎5，胆囊结石MSC治疗肝衰竭治疗肝衰竭2#检查项目检查项目治疗前治疗前2次治疗后次治疗后4次治疗后次治疗后6次治疗后次治疗后谷丙ALT158661.741.342.5谷草AST2753104.265.166.9总胆红素44.432.714.724.1白蛋白27.43628.531.6凝血酶原时间PT21.116.216.415.9国际标准化比值INR1.861.391.411.36MSC治愈治愈肝硬化的第一例肝硬化的第一例国内首次从人脐带中分离培养出间充质干细胞！1，影像学未发现肝硬化迹象；2，HBV病毒拷贝数阴性；3，HBsAg阴性；阴性；4，从2009年开始停止服用抗病毒药物MSC正规治疗2年（2007-2009年）：而后每年约1-3次的频率2007年2月1日第一次输入MSC脐带MSC治疗肝衰竭的方案1，连续8次，每个月1次，每次6（2）袋（1x107/袋）；2，外周静脉输入；3，常规治疗：抗病毒、输白蛋白、保肝利肝、利尿、抗生素（感染）4，凝血功能指标INR2.5，治疗效果不佳。5，肝癌慎用。肝衰竭：0.5-1年肝硬化：2-4年肝硬化：治疗方案：接上述肝衰竭的治疗，以后每季度治疗1次；治疗方案：前2年，每两个月治疗一次；后2年，每个季度治疗1次。为何不主张自体骨髓为何不主张自体骨髓MSC治疗？治疗？衰老的MSC细胞质量分化能力再生能力迁移能力Ann N Y Acad Sci 2006;1067235-242为何不主张自体骨髓为何不主张自体骨髓MSC治疗？治疗？疾病疾病自体骨髓自体骨髓MSC的功能异常的功能异常参考文献参考文献系统性红斑狼疮生长缓慢，免疫调节能力下降，治疗无效Lupus 2010;19(7):850-859类风湿性关节炎克隆形成能力减低和增殖速度减慢，增殖能力、迁移能力、免疫抑制能力和表达分泌VEGF的量均有所下降Ann Rheum Dis 2008;67(6):741-749；J Immunol Res 2015;2015284215高剂量化疗克隆形成能力减低和增殖速度减慢Ann Hematol 2010;89(7):701-713免疫性血小板减少症细胞形态改变，胞体扁宽，免疫调节能力下降Cytotherapy 2009:1-8再障免疫调节能力下降Exp Hematol 2005;33(7):819-827多发性骨髓瘤免疫调节能力下降Leukemia 2007;21(1):158-163急性髓系白血病细胞因子分泌量下降（MCP-1、GM-CSF、IL-6）Blood Cancer J 2015;5e302更重要的是：自体骨髓MSC只够治疗1次！思思 考考我们该如何分析“MSC治疗无效”的文献报道及临床实际案例？间充质间充质干细胞干细胞中国的政策中国的政策4#间充质干细胞间充质干细胞临床试验：临床试验：中国食品药品监督管理总局（中国食品药品监督管理总局（CFDA）批准）批准1，“骨髓原始间充质干细胞”在2004年获得SFDA批准进入期临床试验，于2006年4月21日获得SFDA的期临床试验批件。2，“自体骨髓间充质干细胞注射液”在2005年获得SFDA的临床试验批件进入期临床试验。至今未见有完成II期临床试验的结果报道！3，“间充质干细胞心梗注射液”在2006年获得SFDA的临床试验批件进入期临床试验，在2013年12月完成I期临床试验，有效性评估达到60%以上。至今未见上述有完成II期临床试验的结果报道！WHY？No.1中国干细胞政策始于第三类医疗技术No.2卫计委和CDFA在收紧，科技部在大力开展。国家十二五规划重点项目，干细胞医疗研究跃居生物医药首位。“863”、“973”和国家自然科学基金全部设有干细胞专项科研基金No.32015年3月，卫生部和国家食品药品监督管理局联合组织制定了征求意见稿干细胞临床研究管理办法（试行）和干细胞制剂质量控制和临床前研究指导原则（试行）来进一步规范干细胞临床试验研究活动。预示着：我国我国的干细胞产业将步入高速规范发展期的干细胞产业将步入高速规范发展期间充质干细胞间充质干细胞干细胞临床研究管理方法 干细胞临床研究指应用人自体或异体来源的干细胞经体外操作后输入（或植入）人体，用于疾病预防或治疗的临床研究。体外操作包括干细胞在体外的分离、纯化、培养、扩增、诱导分化、冻存及复苏等，不包括基因水平的操作。第二条：