基础医学病理学新技术

病理学的发展离不开病理技术的进步，纵观病理病理学的发展离不开病理技术的进步，纵观病理学的发展史，从器官病理学、细胞病理学、超微学的发展史，从器官病理学、细胞病理学、超微病理学、免疫病理学、分子病理学、远程病理学病理学、免疫病理学、分子病理学、远程病理学及当今的计算机网络信息病理学。每一个发展阶及当今的计算机网络信息病理学。每一个发展阶段都有新技术的革命。新技术使我们对疾病认识段都有新技术的革命。新技术使我们对疾病认识更加深入切实。从大体、细胞、超微结构、分子更加深入切实。从大体、细胞、超微结构、分子基因水平逐步深入，正如病理学前辈们所说：技基因水平逐步深入，正如病理学前辈们所说：技术是病理学之母。术是病理学之母。病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术。有人病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术。有人体病理学技术和实验病理学技术，二者相互渗透，互体病理学技术和实验病理学技术，二者相互渗透，互为促进，传统的福尔马林固定、石蜡切片、为促进，传统的福尔马林固定、石蜡切片、HE染色是染色是病理学的基本技术，已广泛应用于基础和临床病理学病理学的基本技术，已广泛应用于基础和临床病理学工作。根据科研的发展，临床病理学的需要，又不断工作。根据科研的发展，临床病理学的需要，又不断产生新的技术。作为当代的医学生，要适应技术的发产生新的技术。作为当代的医学生，要适应技术的发展进步、了解病理学研究和临床实践中的一些新技术展进步、了解病理学研究和临床实践中的一些新技术是必不可少的。现介绍一些新技术方法，供同学们在是必不可少的。现介绍一些新技术方法，供同学们在以后的学习工作中参考。以后的学习工作中参考。组织与细胞化学检查（组织与细胞化学检查（Histochemistry and cytochemistry examination）是研究组织与细胞显微结构和超微结构的化）是研究组织与细胞显微结构和超微结构的化学组成及其定位的科学。主要研究对象是生物大分子（如学组成及其定位的科学。主要研究对象是生物大分子（如核酸、蛋白质、酶、多糖和脂类等）在细胞内的结构和功核酸、蛋白质、酶、多糖和脂类等）在细胞内的结构和功能活动中的分布与变化以及亚细胞组分和细胞器在整个生能活动中的分布与变化以及亚细胞组分和细胞器在整个生命活动中的作用等。命活动中的作用等。细胞化学方法能够对细胞内的各种成分进行定性、定细胞化学方法能够对细胞内的各种成分进行定性、定位、定量研究，包括悬浮胸腹水细胞、血液细胞以及位、定量研究，包括悬浮胸腹水细胞、血液细胞以及体外培养细胞均能产生同样良好的效果。目前，用细体外培养细胞均能产生同样良好的效果。目前，用细胞化学技术所能显示的化学成分有蛋白质（显示某些胞化学技术所能显示的化学成分有蛋白质（显示某些特定蛋白、某些氨基酸或功能基）、核糖核酸（特定蛋白、某些氨基酸或功能基）、核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（和脱氧核糖核酸（DNA）、糖类（如糖原、粘多糖和）、糖类（如糖原、粘多糖和糖脂等）、脂类（如中性脂肪、磷脂和固醇等）、酶糖脂等）、脂类（如中性脂肪、磷脂和固醇等）、酶（包括水解酶如磷酸酶）、特异抗原（其化学本质可（包括水解酶如磷酸酶）、特异抗原（其化学本质可能是多肽、蛋白、糖蛋白等）、无机盐和微量元素能是多肽、蛋白、糖蛋白等）、无机盐和微量元素（如铁、铜、锌、钻、镁等）。（如铁、铜、锌、钻、镁等）。1孚尔根反应法（孚尔根反应法（Feulgen reaction）显示）显示DNA呈现紫红色。呈现紫红色。2甲绿甲绿-派郎宁法（派郎宁法（Methyl Green-Pyronin method）显示核酸（）显示核酸（甲绿染甲绿染DNA呈现绿色，派郎宁染呈现绿色，派郎宁染RNA呈现红色）呈现红色）3苏丹苏丹冰冻切片染色显示中性脂肪呈现橘红色。冰冻切片染色显示中性脂肪呈现橘红色。4普鲁士蓝反应显示组织中含铁血黄素。普鲁士蓝反应显示组织中含铁血黄素。5过碘酸雪夫反应（过碘酸雪夫反应（Periodic acid schiffreaction,PAS）显示糖原）显示糖原和其它多糖物质为紫红色。和其它多糖物质为紫红色。免疫组织与细胞化学检查（免疫组织与细胞化学检查（Immunohistochemistry and immunocytochemistry examination）是从组织与细胞化学方）是从组织与细胞化学方法衍生出来的。是在单克隆抗体技术产生后，利用免疫学原法衍生出来的。是在单克隆抗体技术产生后，利用免疫学原理，将抗原抗体反应应用与组织细胞化学而进一步通过级连理，将抗原抗体反应应用与组织细胞化学而进一步通过级连放大，增加敏感性。最后用辣根过氧化物酶显色。从而定位放大，增加敏感性。最后用辣根过氧化物酶显色。从而定位组织细胞中抗原（蛋白组织细胞中抗原（蛋白 多肽、酶）等多种基因产物的特异方多肽、酶）等多种基因产物的特异方法。在病理学外检工作中可用于对不同来源，法。在病理学外检工作中可用于对不同来源，HE难以诊断的难以诊断的的肿瘤进行确诊和鉴别诊断。的肿瘤进行确诊和鉴别诊断。其基本原理是应用抗原与抗体接触后可形成其基本原理是应用抗原与抗体接触后可形成“抗原抗体复合抗原抗体复合物物”的化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技的化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技术。术。图 GFAP阳性神经胶质细胞 图 体外神经胶质细胞培养免疫组化GFAP阳性（一）主要步骤（一）主要步骤1提取抗原提取抗原(免疫原免疫原Immuno-gen);2用免疫原免疫动物用免疫原免疫动物(兔兔)制备抗血清制备抗血清(多克隆抗体多克隆抗体)或免疫动或免疫动物物(鼠鼠)后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体；后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体；3纯化抗体；纯化抗体；4抗体标记组织切片；抗体标记组织切片；5染色反应；染色反应；6观察结果。观察结果。1 为最常用的标记物。作为标记的酶应具有以下条件：为最常用的标记物。作为标记的酶应具有以下条件：底物是特异性的，且易于显示；酶反应产物稳定，不易底物是特异性的，且易于显示；酶反应产物稳定，不易扩散；容易获得纯酶分子且较稳定；酶标记抗体后，扩散；容易获得纯酶分子且较稳定；酶标记抗体后，不影响两者的活性；被检组织中不应存在内源性相同的不影响两者的活性；被检组织中不应存在内源性相同的酶或其底物。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（酶或其底物。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）、）、硷性磷酸酶（硷性磷酸酶（AKP）、葡萄糖氧化酶（）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。）等。2 指在高能量光波的激发下能产生荧光的物质。常用指在高能量光波的激发下能产生荧光的物质。常用的有异硫氰酸荧光素（的有异硫氰酸荧光素（FITC）、四甲基异硫氰酸罗达明）、四甲基异硫氰酸罗达明（TRITC）。）。3 其与卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。其与卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。4 如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。将荧光素将荧光素(免疫荧光法免疫荧光法)或酶直接标记在第或酶直接标记在第一抗体上，以检查相应的抗原。直接法一抗体上，以检查相应的抗原。直接法具有特异性强的优点，但敏感性差，耗具有特异性强的优点，但敏感性差，耗费抗体多。费抗体多。先用荧光素或酶标记第二抗体，一抗为特异先用荧光素或酶标记第二抗体，一抗为特异性抗体，性抗体，二抗仅有种族特异性。二抗仅有种族特异性。特点特点:预先标好二抗，较方便；预先标好二抗，较方便；比直接法敏感，但仍差。比直接法敏感，但仍差。既过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法既过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法(Perixidase Antiperoxidase Complex Method,PAP)先将过氧化物酶（先将过氧化物酶（HRP）免疫兔）免疫兔/羊羊/鼠，制成兔鼠，制成兔/羊羊/鼠抗鼠抗；然后再与结合，形成一个稳定的多角形结构；然后再与结合，形成一个稳定的多角形结构（PAP）。）。特点：特点：敏感性较高；敏感性较高；背景染色低（相对）；背景染色低（相对）；双双PAP敏感性更高，但背景相对较重。敏感性更高，但背景相对较重。既卵白素生物素过氧化物酶复合物法既卵白素生物素过氧化物酶复合物法(Avidin Biotin-peroxidase Complex,ABC)利用卵白素与生物素特有的高度亲和力，先将生物素与酶结合形成生物素利用卵白素与生物素特有的高度亲和力，先将生物素与酶结合形成生物素化化HRP，再以生物素化，再以生物素化HRP与卵白素按一定比例混合，形成一个复合物；与卵白素按一定比例混合，形成一个复合物；同时先将二抗生物素化。同时先将二抗生物素化。如将卵白素换成链霉亲和素，则为：如将卵白素换成链霉亲和素，则为：法：法：(StreptAvidin Biotin-peroxidase Complex)将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：法：法：labelled StreptAvidin-Biotin用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：法：法：(StreptAvidin Peroxidase conjugataed method)若用碱性磷酸酶标记链霉卵白素则称法。若用碱性磷酸酶标记链霉卵白素则称法。若分别用碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，则称法若分别用碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，则称法特点特点:敏感性高，（比高倍）；敏感性高，（比高倍）；背景淡，链霉亲和素更好；背景淡，链霉亲和素更好；方法较简便，时间较短；方法较简便，时间较短；应用范围广，也可用于原位杂交和免疫电镜。应用范围广，也可用于原位杂交和免疫电镜。对照原则：首先对照第一抗体；替代对照要注意相同的原对照原则：首先对照第一抗体；替代对照要注意相同的原则；阳性结果阴性对照，阴性结果阳性对照；染色清晰，则；阳性结果阴性对照，阴性结果阳性对照；染色清晰，定位准确。定位准确。阴性对照：阴性对照：（）空白对照：用置换第一抗体；（）空白对照：用置换第一抗体；（）血清替代对照：用同种动物的正常血清代替第一抗体；（）血清替代对照：用同种动物的正常血清代替第一抗体；（）抑制对照：用未标记的抗体先和相应的抗原结合；（）抑制对照：用未标记的抗体先和相应的抗原结合；（）吸收对照：用纯化的抗原对抗体先行吸收；（）吸收对照：用纯化的抗原对抗体先行吸收；阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织；阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织；自身对照：利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照。自身对照：利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照。非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等；非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等；内源性过氧化物酶：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞和内源性过氧化物酶：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞和某些腺上皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，某些腺上皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，如脑、肝等；如脑、肝等；抗体的交叉反应：抗体本身含有与人体组织发生交叉反抗体的交叉反应：抗体本身含有与人体组织发生交叉反应的成分；应的成分；试剂浓度过高或失效。试剂浓度过高或失效。组织固定不当或固定时间过长；组织固定不当或固定时间过长；抗体效价过低或久置失效；抗体效价过低或久置失效；组织中抗原被粘稠基质或分泌物阻隔；组织中抗原被粘稠基质或分泌物阻隔；DAB或或H2O2的浓度不当。的浓度不当。在常规病理活检中在常规病理活检中,通常有的疑难病例不能明通常有的疑难病例不能明确诊断。确诊断。形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和恶性淋巴瘤）因而难于识别，给治疗带来困难。恶性淋巴瘤）因而难于识别，给治疗带来困难。一些转移性肿瘤常常缺乏特有的组织学特征，因而无法确一些转移性肿瘤常常缺乏特有的组织学特征，因而无法确定其原发病灶（如甲状腺癌和前列腺癌）。定其原发病灶（如甲状腺癌和前列腺癌）。通过一些反映细胞增殖和与肿瘤恶性程度有关的标记物协通过一些反映细胞增殖和与肿瘤恶性程度有关的标记物协助识别肿瘤的良恶性。助识别肿瘤的良恶性。桥粒蛋白（桥粒蛋白（desmoplakin）细胞角蛋白（细胞角蛋白（Cytokeratin,）：一种中间丝蛋白）：一种中间丝蛋白 角蛋白多肽（如）；角蛋白多肽（如）；组织多肽抗原（组织多肽抗原（tissue polypeptide antigen,）；）；上皮细胞膜抗原（上皮细胞膜抗原（epithelial membrane antigen,）。）。角蛋白多肽（），癌胚抗原（）；角蛋白多肽（），癌胚抗原（）；甲胎蛋白（），乳铁蛋白（甲胎蛋白（），乳铁蛋白（lecroferrin）；）；前列腺特异性抗原（）及激素类等。前列腺特异性抗原（）及激素类等。（）间叶源性肿瘤：波形蛋白（）间叶源性肿瘤：波形蛋白（Vimentin）；）；（）纤维组织源性肿瘤：纤维瘤、肉瘤，恶纤组。（）纤维组织源性肿瘤：纤维瘤、肉瘤，恶纤组。抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（1，）；，）；抗胰糜蛋白酶（抗胰糜蛋白酶（，）；，）；溶菌酶（溶菌酶（Lysozyme）。）。肌瘤、肌肉瘤、肌瘤、肌肉瘤、肌上皮瘤。肌上皮瘤。，最常用，肌细胞分化最早的标记；，最常用，肌细胞分化最早的标记；，属肌丝蛋白，种亚型分别存在于不同的，属肌丝蛋白，种亚型分别存在于不同的肌细胞、肌上皮细胞肌细胞、肌上皮细胞 ，属肌丝蛋白，分，属肌丝蛋白，分型（慢）和型（慢）和型（快）型（快）收缩纤维，存在于心肌、横纹肌及平滑肌中，肌动蛋白和肌球收缩纤维，存在于心肌、横纹肌及平滑肌中，肌动蛋白和肌球蛋白均出现在肌细胞发育分化中期。蛋白均出现在肌细胞发育分化中期。，是心肌和横纹肌结合氧的肌红蛋白，是心肌和横纹肌结合氧的肌红蛋白，存在于分化成熟的横纹肌中。存在于分化成熟的横纹肌中。血管内皮肉瘤血管内皮肉瘤 第第因子相关抗原（因子相关抗原（Factor-related Antigen,）荆豆凝集素（荆豆凝集素（Ulex Europaeus1 Lectin,）；）；、等。、等。，Vimentin阳性；阳性；Lysozyme少数阳性。少数阳性。双向分化，无特异性标记物。Keratin,EMA;Vimentin,FN,AAT,ACT,Lysozyme等均有可能阳性。S-100：神经纤维肿瘤，神经鞘肿瘤。：神经纤维肿瘤，神经鞘肿瘤。髓性缄性蛋白（髓性缄性蛋白（Myelin basic protein,MBA）；）；髓鞘相关蛋白（髓鞘相关蛋白（MAG）；）；层粘连蛋白（层粘连蛋白（Laminin）。）。()LCA（Leucocyte Common Antigen，白细胞共同抗原）；，白细胞共同抗原）；()、标记淋巴细胞；、标记淋巴细胞；()、标记淋巴细胞；、标记淋巴细胞；()、标记组织细胞；、标记组织细胞；()、（、（Ki-antigen）标记细胞；）标记细胞；()标记单核细胞、粒细胞。标记单核细胞、粒细胞。（）胶质纤维酸性蛋白（）胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,）：胶质细胞、室管膜细胞；）：胶质细胞、室管膜细胞；（）髓鞘碱性蛋白（）：少枝细胞；（）髓鞘碱性蛋白（）：少枝细胞；（）神经细胞烯醇化酶（）神经细胞烯醇化酶（Neurun specific enolosa,）：）：神经细胞；神经细胞；（）神经微丝（）神经微丝（Neurofilaments,）神经细胞、嗜铬细胞、）神经细胞、嗜铬细胞、副节细胞、瘤；副节细胞、瘤；（）嗜铬素（）嗜铬素（Chromogranin）：神经内分泌肿瘤。）：神经内分泌肿瘤。（）其它：、（）其它：、Calcitotin、Gastrin、Glucagon、hGH、Insulin、Serotonin等。等。免疫组织化学最突出的优点是能在微观世界原免疫组织化学最突出的优点是能在微观世界原位地确定组织及细胞结构的化学成分，由于其位地确定组织及细胞结构的化学成分，由于其方法简便且可重复性强，目前已得到广泛的应方法简便且可重复性强，目前已得到广泛的应用，并正继续向着更微细、更精确的原位分子用，并正继续向着更微细、更精确的原位分子杂交和免疫电镜方向发展，向着分子病理学的杂交和免疫电镜方向发展，向着分子病理学的领域推进。领域推进。电子显微镜（电子显微镜（electron microsocope）简称电镜，）简称电镜，是以电子束为照明源，通过电子流对生物样品是以电子束为照明源，通过电子流对生物样品的透射以及电磁透镜的多级放大后的荧光屏上的透射以及电磁透镜的多级放大后的荧光屏上成像的大型精密仪器。按工作原理和用途的不成像的大型精密仪器。按工作原理和用途的不同可分为透射式电镜（同可分为透射式电镜（transmission electron microscope,TEM）和扫描式电镜（）和扫描式电镜（scanning electron microscope,SEM）二种基本类型。）二种基本类型。图 食管癌细胞系肿瘤细胞超微结构 主要用于观察细胞内部的微细结构，由于电子主要用于观察细胞内部的微细结构，由于电子的穿透力较弱，故用于透射电镜观察的标本必的穿透力较弱，故用于透射电镜观察的标本必须切成须切成50100nm的超薄切片。换句话说，一的超薄切片。换句话说，一个细胞要被切成个细胞要被切成100200个薄片才适于在透射个薄片才适于在透射电镜下观察。样品在被超薄切片之前，一般要电镜下观察。样品在被超薄切片之前，一般要经过固定、脱水和包埋等处理，在切片之后还经过固定、脱水和包埋等处理，在切片之后还要经过染色等处理才能进行观察。要经过染色等处理才能进行观察。超薄切片术（超薄切片术（techniques of ultrathin section）是）是最基本的电镜样品制备技术，其基本过程同石蜡最基本的电镜样品制备技术，其基本过程同石蜡切片大体相似，包括取材、固定、漂洗、脱水、切片大体相似，包括取材、固定、漂洗、脱水、渗透与聚合、切片和染色等多个环节，但操作过渗透与聚合、切片和染色等多个环节，但操作过程比石蜡切片更为细致与复杂。为了获得理想的程比石蜡切片更为细致与复杂。为了获得理想的超薄切片，操作者必须认真对待每一步骤，任何超薄切片，操作者必须认真对待每一步骤，任何环节的疏忽都可能导致制样的失败。环节的疏忽都可能导致制样的失败。合格的超薄切片样品应该达到以下基本要求：合格的超薄切片样品应该达到以下基本要求：（1）切片的厚度应在）切片的厚度应在50nm左右，不能超过左右，不能超过100nm，以获得较高的分辨率和较高的反差；，以获得较高的分辨率和较高的反差；（2）切片应能耐受电子束的强烈照射而不发）切片应能耐受电子束的强烈照射而不发生破裂、变形；（生破裂、变形；（3）细胞超微结构保持良好，）细胞超微结构保持良好，没有明显的物质凝聚和丢失。没有明显的物质凝聚和丢失。电子显微镜技术使病理学对疾病的认识，从组织细胞的光镜电子显微镜技术使病理学对疾病的认识，从组织细胞的光镜水平深入到细胞内的超微结构水平，它可观察细胞内的细胞水平深入到细胞内的超微结构水平，它可观察细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化，在疾病的病理诊断中，器、细胞骨架或大分子水平的变化，在疾病的病理诊断中，电镜主要用于肾脏的细针穿刺活检标本，来进行肾小球肾炎电镜主要用于肾脏的细针穿刺活检标本，来进行肾小球肾炎的分型。在肿瘤诊断中，电镜在确定肿瘤细胞的组织发生、的分型。在肿瘤诊断中，电镜在确定肿瘤细胞的组织发生、类型和分化程度上起着重要作用。可根据各种肿瘤细胞的超类型和分化程度上起着重要作用。可根据各种肿瘤细胞的超微结构特点来协助区别分化差的癌和肉瘤、各种梭形细胞恶微结构特点来协助区别分化差的癌和肉瘤、各种梭形细胞恶性肿瘤、各种恶性小圆细胞肿瘤、各种神经内分泌肿瘤及恶性肿瘤、各种恶性小圆细胞肿瘤、各种神经内分泌肿瘤及恶性黑色素瘤等。其方法包括负染色技术、冷冻蚀刻技术、电性黑色素瘤等。其方法包括负染色技术、冷冻蚀刻技术、电镜细胞化学技术、电镜镜细胞化学技术、电镜X射线显微分析技术、电镜放射自显射线显微分析技术、电镜放射自显影技术等在疾病的研究中已得到广泛的应用。影技术等在疾病的研究中已得到广泛的应用。扫描电子显微镜就是用聚得很细的电子束流照射要检测的样品表面。扫描电子显微镜就是用聚得很细的电子束流照射要检测的样品表面。由于电子束与样品的相互作用产生各种信息然后通过不同的检测器接收由于电子束与样品的相互作用产生各种信息然后通过不同的检测器接收相应的信息，经过处理后显示出样品的各种特征。相应的信息，经过处理后显示出样品的各种特征。能够直接观察样品的表面的结构；样品制备能够直接观察样品的表面的结构；样品制备过程简单，不用切成超薄切片；可以从各种角度对样品进行观察；景深过程简单，不用切成超薄切片；可以从各种角度对样品进行观察；景深大，图像富有立体感；图像的放大范围广，分辨率也比较高；电子束对大，图像富有立体感；图像的放大范围广，分辨率也比较高；电子束对样品的损伤与污染程度较小；在观察形貌的同时，还可利用从样品发出样品的损伤与污染程度较小；在观察形貌的同时，还可利用从样品发出的其他信号作微区成分分析。的其他信号作微区成分分析。采用冷冻树脂割断法将细胞打开，可以观察到细胞的内部结构。用采用冷冻树脂割断法将细胞打开，可以观察到细胞的内部结构。用铸型技术研究空腔脏器，尤其是血管系统复杂的立体分布。还可用盐酸铸型技术研究空腔脏器，尤其是血管系统复杂的立体分布。还可用盐酸化学消化法观察细胞的基底面及深层细胞表面结构。化学消化法观察细胞的基底面及深层细胞表面结构。共聚焦激光扫描显微镜（共聚焦激光扫描显微镜（confocal laser scanning microscopy）可以从组织细胞水平直接进入亚细胞水平观察，且可利用计可以从组织细胞水平直接进入亚细胞水平观察，且可利用计算机及图像处理系统对组织，细胞及亚细胞结构进行断层扫算机及图像处理系统对组织，细胞及亚细胞结构进行断层扫描，三维立体空间结构再现，将形态学研究从平面图像水平描，三维立体空间结构再现，将形态学研究从平面图像水平提高到三维立体水平，图像清晰鲜艳；还可在观察培养细胞提高到三维立体水平，图像清晰鲜艳；还可在观察培养细胞形态结构的同时，直接显示培养活体细胞内的代谢变化，可形态结构的同时，直接显示培养活体细胞内的代谢变化，可以说病理学及其它形态学研究将出现一个全新的时代。以说病理学及其它形态学研究将出现一个全新的时代。生物芯片技术（生物芯片技术（biochip technology）是将大量具有生物识）是将大量具有生物识别功能的分子或生物样品有序地点阵排列在支持物上并与别功能的分子或生物样品有序地点阵排列在支持物上并与标记的检体分子同时反应或杂交，通过放射自显影、荧光标记的检体分子同时反应或杂交，通过放射自显影、荧光扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的新技术。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞新技术。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。可对芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。可对DNA、RNA、多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快捷的测试和分析。捷的测试和分析。基因芯片基因芯片(gene chip)是指采用原位合成或显是指采用原位合成或显微打印方法，将大量微打印方法，将大量DNA探针固化于支持物表面探针固化于支持物表面上，产生二维上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测。可自动、快速地检测快速、并行、高效地检测。可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况，为基因诊断、药出成千上万个基因的表达情况，为基因诊断、药物筛选以及新基因发现提供了有力的手段。物筛选以及新基因发现提供了有力的手段。图图 基因芯片基因芯片 蛋白芯片技术的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、蛋白芯片技术的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后，用标记滤膜和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后，用标记了特定荧光素的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂将未能与了特定荧光素的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂将未能与芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫可描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光光共聚焦扫可描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系，由此达到检测强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系，由此达到检测多种蛋白质及其功能的目的。如抗体芯片可排列数百种单克隆多种蛋白质及其功能的目的。如抗体芯片可排列数百种单克隆抗体，通过这张芯片，人们在一次实验中就能够比较几百种蛋抗体，通过这张芯片，人们在一次实验中就能够比较几百种蛋白的表达变化。对于诊断疾病：如传染病、肿瘤、遗传病等临白的表达变化。对于诊断疾病：如传染病、肿瘤、遗传病等临床工作以及信号传导、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡和床工作以及信号传导、细胞周期调控、细胞结构、细胞凋亡和神经生物学等基础研究都具有广泛的应用前景神经生物学等基础研究都具有广泛的应用前景 织芯片又称组织微列阵（织芯片又称组织微列阵（tissue microarray）是将数十个是将数十个 数百个乃至上千个小的数百个乃至上千个小的组织片整齐的排列在一起到载玻片组织片整齐的排列在一起到载玻片,形成微缩的组织切片。形成微缩的组织切片。1.体积小信息含量高体积小信息含量高.可根据不同需要进行组合和设计可根据不同需要进行组合和设计;2.即可用于即可用于形态学观察也可用于免役组织化学染色形态学观察也可用于免役组织化学染色.原位杂交原位杂交,FISH 等原位组织细胞学观等原位组织细胞学观察和研究察和研究.3.高效高效 快速快速,低消耗低消耗,自身内对照和可比性强自身内对照和可比性强,节时、省力、少材、高节时、省力、少材、高效利用库存蜡块肿瘤标本的新方法。一个蜡块可连续切片效利用库存蜡块肿瘤标本的新方法。一个蜡块可连续切片200张，以供原位分张，以供原位分析肿瘤相关基因析肿瘤相关基因DNA及其表达的及其表达的mRNA和蛋白质，荧光原位分子杂交和蛋白质，荧光原位分子杂交（FISH），），mRNA原位杂交、免疫组化三种方法可同时在一个芯片蜡块的连原位杂交、免疫组化三种方法可同时在一个芯片蜡块的连续组织芯片中应用。因而可提高实验效率，一张组织芯片上可列阵数十至数续组织芯片中应用。因而可提高实验效率，一张组织芯片上可列阵数十至数百个样本。实验条件最大程度上保持一致，有助于减少实验误差，一个组织百个样本。实验条件最大程度上保持一致，有助于减少实验误差，一个组织芯片蜡块可连续切芯片蜡块可连续切200张片，进行许多分子标记检测。最大限度地利用有限的张片，进行许多分子标记检测。最大限度地利用有限的标本资源，尤其是少见的病例标本，最小破损原有蜡块。可同时检测一种肿标本资源，尤其是少见的病例标本，最小破损原有蜡块。可同时检测一种肿瘤不同阶段的基因表达状况。能在一张片上同时看到一个肿瘤组织在原位、瘤不同阶段的基因表达状况。能在一张片上同时看到一个肿瘤组织在原位、转移转移、复发中的基因扩增情况。、复发中的基因扩增情况。第六节第六节 激光显微切割术激光显微切割术 显微切割（显微切割（Laser micro-desection）就是在显微镜）就是在显微镜下用手工或仪器采样的方法从组织切片或细胞涂片下用手工或仪器采样的方法从组织切片或细胞涂片上将所要研究的形态或表型相同的细胞从组织三维上将所要研究的形态或表型相同的细胞从组织三维构造中分离出来，获得纯的细胞群（构造中分离出来，获得纯的细胞群（pure cell population），以备进一步作分子水平的研究。微），以备进一步作分子水平的研究。微切割技术的贡献就是克服了组织的细胞成分非常繁切割技术的贡献就是克服了组织的细胞成分非常繁杂这一重大的缺点。杂这一重大的缺点。图图 激光显微切割仪激光显微切割仪 微切割可用于福尔马林固定石蜡包埋的组织切片、微切割可用于福尔马林固定石蜡包埋的组织切片、冰冻切片、培养细胞和细胞涂片。但所用载玻片冰冻切片、培养细胞和细胞涂片。但所用载玻片不准涂抹任何粘附剂，常用的组织切片是不准涂抹任何粘附剂，常用的组织切片是HE染色染色的常规石蜡切片（厚的常规石蜡切片（厚5m）。除此，可用甲基绿）。除此，可用甲基绿固定剂，以固定剂，以70%和和95%的乙醇或丙酮为首选。的乙醇或丙酮为首选。微切割及细胞采集方法大体上可分为手工操作和仪器操作两大类。微切割及细胞采集方法大体上可分为手工操作和仪器操作两大类。两者各有长短。从两个方面评价这些方法，一是准确性，即有无两者各有长短。从两个方面评价这些方法，一是准确性，即有无杂细胞污染；二是它的效率，能否在较短时间内采集到足够的细杂细胞污染；二是它的效率，能否在较短时间内采集到足够的细胞；当然也要考虑方法所需费用。胞；当然也要考虑方法所需费用。（1）手工操作）手工操作 就是用消毒的细针或刀片搔刮组织切片（厚就是用消毒的细针或刀片搔刮组织切片（厚515m）上的细胞，并将其移至）上的细胞，并将其移至Eppendorf管中。管中。（2）仪器操作）仪器操作 利用激光进行微切割和细胞采集，其特点是微切利用激光进行微切割和细胞采集，其特点是微切割的精度高，可进行单个或几个至数十个细胞的切割，可获得很割的精度高，可进行单个或几个至数十个细胞的切割，可获得很纯的细胞群体，并适用于各种组织材料；再就是效率极高，整个纯的细胞群体，并适用于各种组织材料；再就是效率极高，整个过程仅需过程仅需23min或数或数sec，但仪器价格昂贵。具体又有，但仪器价格昂贵。具体又有4种不同的种不同的方法：激光微光束微切割方法：激光微光束微切割 激光加压弹射激光加压弹射 贴于膜上的原组织贴于膜上的原组织微切割微切割 激光俘获微切割。激光俘获微切割。如果所获细胞数量在如果所获细胞数量在105以上，则可用常规的方法以上，则可用常规的方法提取提取DNA。微切割材料微切割材料RNA的提取一般可采用市售的提取的提取一般可采用市售的提取RNA的试剂盒。必须切底清除不需要的细胞，以的试剂盒。必须切底清除不需要的细胞，以防止污染细胞中高丰度防止污染细胞中高丰度mRNA影响分析结果。另影响分析结果。另外，尽可能使用沉淀性固定剂（乙醇、丙酮）而外，尽可能使用沉淀性固定剂（乙醇、丙酮）而不用交联性固定剂（福尔马林、副醛）。不用交联性固定剂（福尔马林、副醛）。1细胞基因突变及微卫星变异的研究细胞基因突变及微卫星变异的研究 2细胞基因拷贝数的变化和甲基化水平的检测细胞基因拷贝数的变化和甲基化水平的检测3定量定量RT-PCR4比较基因组杂交比较基因组杂交5cDNA微阵列（芯片）微阵列（芯片）原位核酸分子杂交（原位核酸分子杂交（in situ hybridization,ISH）是应用特定标记的已知核酸探针与组织或细胞中是应用特定标记的已知核酸探针与组织或细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，杂交后的信号可以在光镜或电镜下形成杂交体，杂交后的信号可以在光镜或电镜下进行观察。由于核酸分子杂交的特异性强、敏感进行观察。由于核酸分子杂交的特异性强、敏感性高、定位精确、定量可能，因此该技术已广泛性高、定位精确、定量可能，因此该技术已广泛应用于生物学、医学等各个领域的研究之中。应用于生物学、医学等各个领域的研究之中。图图 食管癌肿瘤细胞食管癌肿瘤细胞c-fos mRNAc-fos mRNA原位杂交图片原位杂交图片 染色体原位分子杂交技术（染色体原位分子杂交技术（Chromsome Analysis by Fluorescence in situ Hybridization）的发展为研究染色体上）的发展为研究染色体上DNA的序列提供了一个最直接的方法。具有经济、安全、的序列提供了一个最直接的方法。具有经济、安全、快速、稳定，灵敏度高，多彩快速、稳定，灵敏度高，多彩FISH可在同一核内显示两种可在同一核内显示两种或多种序列，还可对间期核染色体进行研究；应用不同的或多种序列，还可对间期核染色体进行研究；应用不同的探针可显示某一物种的全部基因，某一染色体染色片段及探针可显示某一物种的全部基因，某一染色体染色片段及单拷贝序列；结合共焦激光显微镜可对间期核及染色体进单拷贝序列；结合共焦激光显微镜可对间期核及染色体进行三维结构研究，行三维结构研究，精确检测杂交信号优点。精确检测杂交信号优点。图图 组织切片间期染色体荧光原位杂交组织切片间期染色体荧光原位杂交 人类基因组内一些高频率的重复序列，在进化上人类基因组内一些高频率的重复序列，在进化上很少具有保守性。若很少具有保守性。若 以基因组以基因组DNA作为探针，这作为探针，这些存在于探针和靶细胞顺序中的高度重复序列之些存在于探针和靶细胞顺序中的高度重复序列之间会首先退火结合，越过那些保守的饿和单一的间会首先退火结合，越过那些保守的饿和单一的序列，故杂交会呈现出种特异性。利用这类探针序列，故杂交会呈现出种特异性。利用这类探针在人鼠杂交细胞中可特异显示人的遗传物质。在人鼠杂交细胞中可特异显示人的遗传物质。目前在人几乎所有染色体中已经克隆出一些重复目前在人几乎所有染色体中已经克隆出一些重复序列，重复一百到五千次不等，各具染色体特异序列，重复一百到五千次不等，各具染色体特异性。大多在某一染色体的着丝粒区或异染色质区性。大多在某一染色体的着丝粒区或异染色质区产生致密的杂交带。从而可特异性地识别某一染产生致密的杂交带。从而可特异性地识别某一染色体。色体。染色体文库收集人类单条染色体的染色体文库收集人类单条染色体的DNA作为作为探针，又称整体染色体探针或染色体染探针。探针，又称整体染色体探针或染色体染探针。单条染色体的获得一般有两种方法：来自仅单条染色体的获得一般有两种方法：来自仅携有某一条人类染色体的体细胞杂交株，或携有某一条人类染色体的体细胞杂交株，或经流式细胞分类仪从染色体悬液中分离经流式细胞分类仪从染色体悬液中分离 FISH有一弱点，就是要求探针足够大，探针越小，有一弱点，就是要求探针足够大，探针越小，杂交位点检出率就越低。欲利用杂交位点检出率就越低。欲利用FISH检测存在基因检测存在基因组内的单一序列基因，最有效的方法是应用含大插组内的单一序列基因，最有效的方法是应用含大插入片段的克隆载体，如全入片段的克隆载体，如全Cosmids（载约（载约40kb的插的插入片段），更大的入片段），更大的YAC载体（载载体（载100-800kb插入片插入片段）。若掌握好，小到段）。若掌握好，小到2kb的质粒探针亦可用的质粒探针亦可用FISH方法定位，但效率较低。方法定位，但效率较低。124色色mFISH核型分析技术核型分析技术 图 食管癌细胞系24色染色体m FISH核型分析 为了准确定位原位杂交部位所处染色体及其区带，染色体必须为了准确定位原位杂交部位所处染色体及其区带，染色体必须显带。但无论是先杂交后显带，还是显带后杂交，杂交与显带显带。但无论是先杂交后显带，还是显带后杂交，杂交与显带过程回互相影响效果。后来人们注意到，人类短间隔插入重复过程回互相影响效果。后来人们注意到，人类短间隔插入重复序列中的一种序列中的一种Alu家族，家族，Alu片段约片段约300bp长，在基因组中重复长，在基因组中重复约九十万次，平均间隔约九十万次，平均间隔3-4kb就插入一个。有人利用部分就插入一个。有人利用部分Alu序序列作为引物，用列作为引物，用PCR方法扩增方法扩增Alu之间的之间的DNA，称，称Alu-PCR法。法。但但Alu序列在基因组内分布不是随机的，有些区域比较密集，有序列在基因组内分布不是随机的，有些区域比较密集，有些区域较稀疏。只有前者才有些区域较稀疏。只有前者才有PCR产物。人们用产物。人们用Alu-PCR产物产物作为探针与人类染色体标本杂交，结果得到类似作为探针与人类染色体标本杂交，结果得到类似R带的荧光带带的荧光带型。故人们在进行基因定位时，只需将目的探针与型。故人们在进行基因定位时，只需将目的探针与Alu-PCR探探针同时应用，用不同颜色的荧光标记，就可同时显示杂交信号针同时应用，用不同颜色的荧光标记，就可同时显示杂交信号和染色体带型。和染色体带型。基因定位时，不但需要确定某段靶序列在染色体上的位置，尚基因定位时，不但需要确定某段靶序列在染色体上的位置，尚需确定两个或两个以上靶序列在线性需确定两个或两个以上靶序列在线性DNA分子的排列次序和距分子的排列次序和距离，才能绘出基因图。一般用同位素杂交：先确定每一靶序列离，才能绘出基因图。一般用同位素杂交：先确定每一靶序列在中期染色体上的位置，然后根据它们到端粒的距离确定出线在中期染色体上的位置，然后根据它们到端粒的距离确定出线形排列次序。而用形排列次序。而用FISH方法，两种或两种以上的探针能同时与方法，两种或两种以上的探针能同时与中期染色体杂交，只要根据两种颜色杂交位点的相互位置，就中期染色体杂交，只要根据两种颜色杂交位点的相互位置，就能直接确定次序。但中期染色体是线形能直接确定次序。但中期染色体是线形DNA分子经过折叠和包分子经过折叠和包装后形成的，若两个靶序列相距很近，例如间距小于装后形成的，若两个靶序列相距很近，例如间距小于1Mbp，受，受包装过程的影响，它们在线形包装过程的影响，它们在线形DNA分子上的排列与在中期染色分子上的排列与在中期染色体上的排列不一定相同，甚至可能完全相反。学者们发现，靶体上的排列不一定相同，甚至可能完全相反。学者们发现，靶序列之间在间期核的平均相对距离与它们在线形序列之间在间期核的平均相对距离与它们在线形DNA分子上的分子上的距离呈正相关。利用间期核距离呈正相关。利用间期核FISH分析不但能排除染色体包装的分析不但能排除染色体包装的影响，还能提高测距的分辨率。影响，还能提高测距的分辨率。图 食管癌细胞单条染色体涂染荧光原位分子杂交，用BAC位点探针特异位点定位BAC FISH 当采用染色体文库探针，或当采用染色体文库探针，或cosmid,YAC进行进行FISH时，那些时，那些无处不有的重复序列家族如无处不有的重复序列家族如Alu、Kpn1家族等会不时穿插出家族等会不时穿插出现在探针的序列中，它们干扰了探针识别靶序列的特异性。现在探针的序列中，它们干扰了探针识别靶序列的特异性。所谓所谓CISS指的是用人类基因组总指的是用人类基因组总DNA(THDNA)，经过超声，经过超声处理打碎成处理打碎成500bp左右的片段后，与探针混合，变性后在左右的片段后，与探针混合，变性后在37孵育一段时间，这时探针中的重复序列与孵育一段时间，这时探针中的重复序列与THDNA中的中的重复序列之间首先退火，此后再与染色体杂交，就会实现与重复序列之间首先退火，此后再与染色体杂交，就会实现与靶序列之间的特异性结合。靶序列之间的特异性结合。一种用单一染色体文库探针在中期分裂相或间期核内使某一一种用单一染色体文库探针在中期分裂相或间期核内使某一染色体物质从染色体物质从Pter至至qter整个显色的方法称染色体涂染。人整个显色的方法称染色体涂染。人们已获得了一系列单一染色体文库探针。但在实际操作过程们已获得了一系列单一染色体文库探针。但在实际操作过程中，所有染色体均毫无区别的显示了荧光。当加入一定量竞中，所有染色体均毫无区别的显示了荧光。当加入一定量竞争性争性DNA后（后（100-200g/ml），只有目的染色体着色，其它），只有目的染色体着色，其它染色体的荧光全部被抑制。但若继续增加竞争性染色体的荧光全部被抑制。但若继续增加竞争性DNA量，则量，则目的染色体本身的荧光亦被抑制。目的染色体本身的荧光亦被抑制。染色体涂染法特别适用于检出染色体多体和易位。染色体涂染法特别适用于检出染色体多体和易位。在进行人类单一序列基因片段的在进行人类单一序列基因片段的FISH时，时，为了提高杂交检出的效率，需用含大插入为了提高杂交检出的效率，需用含大插入片段的克隆载体。如用整个片段的克隆载体。如用整个cosmid克隆的克隆的基因组片段或用基因组片段或用YAC克隆的基因片段作为克隆的基因片段作为探针进行探针进行CISS杂交。杂交。在细胞遗传学研究中经常遇到的问题之一是：很难辨认一在细胞遗传学研究中经常遇到的问题之一是：很难辨认一条新生的染色体或染色体上的一段额外来源。上述各种技条新生的染色体或染色体上的一段额外来源。上述各种技术常对此束手无策。因为带型不具染色体特异性；而着丝术常对此束手无策。因为带型不具染色体特异性；而着丝粒特异性探针与单一染色体文库探针虽具染色体特异性，粒特异性探针与单一染色体文库探针虽具染色体特异性，但无法确定选用哪一条。但无法确定选用哪一条。新的新的FISH方法如下：首先利用流式细胞分类方法分离出异方法如下：首先利用流式细胞分类方法分离出异常的染色体常的染色体利用染色体显微解剖技术分离出异常的染色利用染色体显微解剖技术分离出异常的染色体区带体区带用用PCR法扩增异常的单一染色体或染色体区带法扩增异常的单一染色体或染色体区带DNA用用PCR产物作为探针库与正常中期染色体进行产物作为探针库与正常中期染色体进行CISS杂交杂交显示出在正常染色体作为异常染色体起源的部分。显示出在正常染色体作为异常染色体起源的部分。故所谓反向染色体涂染是指用异常染色体的故所谓反向染色体涂染是指用异常染色体的DNA作为探针，作为探针，在正常染色体中寻查其起源部分的方法。在正常染色体中寻查其起源部分的方法。原理前面已叙述。原理前面已叙述。FISH已经极大地加速了人类基因定位和已经极大地加速了人类基因定位和基因制图的进程。基因制图的进程。精确、直观、明了精确、直观、明了（1）肿瘤细胞遗传学（）肿瘤细胞遗传学（Onco-cytogenetics）（2）基因定位：）基因定位：FISH可用于分离出的癌基因与抑癌基因初步可用于分离出的癌基因与抑癌基因初步定位定位（3）病毒基因插入基因组部分的检测：）病毒基因插入基因组部分的检测：虽然逆转录病毒以激活原癌基因为主，也有象腺病毒、虽然逆转录病毒以激活原癌基因为主，也有象腺病毒、HPV、SV40等病毒以蛋白产物与抑癌基因蛋白产物相互作等病毒以蛋白产物与抑癌基因蛋白产物相互作用而诱导细胞转化。但病毒基因特别是用而诱导细胞转化。但病毒基因特别是DNA病毒多有病毒病毒多有病毒基因成分插入到人基因组。利用基因成分插入到人基因组。利用FISH可以检测到病毒整合可以检测到病毒整合到人基因组中的情况，对深入研究病毒致癌机理，以及检到人基因组中的情况，对深入研究病毒致癌机理，以及检测、防治均具有重要意义。测、防治均具有重要意义。原癌基因的激活与抑癌基因的失活是目前肿瘤研原癌基因的激活与抑癌基因的失活是目前肿瘤研究的热点。究的热点。已知原癌基因的激活方式有：突变、基因扩增、已知原癌基因的激活方式有：突变、基因扩增、易位、病毒序列插入。易位、病毒序列插入。抑癌基因的激活方式有：点突变、基因缺失。抑癌基因的激活方式有：点突变、基因缺失。FISH为研究基因的扩增和缺失提供了新的方法，为研究基因的扩增和缺失提供了新的方法，能将基因扩增和染色体重复分开。能将基因扩增和染色体重复分开。比较基因组杂交技术比较基因组杂交技术(comparative genome hybridization,CGH)。其基本原理是用不同的荧光染料分别标记正常人基因组其基本原理是用不同的荧光染料分别标记正常人基因组DNA与与肿瘤细胞肿瘤细胞DNA，然后与正常人中期染色体杂交，通过检测染色，然后与正常人中期染色体杂交，通过检测染色体上两种荧光（红、绿）的相对强度比率，两组体上两种荧光（红、绿）的相对强度比率，两组DNA相异部分相异部分会显出颜色偏移，从而可计算出会显出颜色偏移，从而可计算出DNA的缺失与放大，从而了解的缺失与放大，从而了解肿瘤组织肿瘤组织DNA拷贝数的改变，并能同时在染色体上定位。这样拷贝数的改变，并能同时在染色体上定位。这样的方法使我们只要从新鲜组织或石蜡包埋肿瘤组织中提取少量的方法使我们只要从新鲜组织或石蜡包埋肿瘤组织中提取少量DNA，就可进行全基因组检测。应用，就可进行全基因组检测。应用CGH技术检测癌变过程技术检测癌变过程中的不同阶段，肿瘤进展的不同时期及不同类型肿瘤的非随机中的不同阶段，肿瘤进展的不同时期及不同类型肿瘤的非随机性染色体改变，有助于从分子细胞遗传学角度了解肿瘤的发生性染色体改变，有助于从分子细胞遗传学角度了解肿瘤的发生发展，对发现肿瘤遗传学标记，初步查寻肿瘤相关基因的位置发展，对发现肿瘤遗传学标记，初步查寻肿瘤相关基因的位置均具有重要意义。其对检测原癌基因扩增较为灵敏，但对基因均具有重要意义。其对检测原癌基因扩增较为灵敏，但对基因缺失敏感性则相对较弱。缺失敏感性则相对较弱。n=401 1n=422 2n=373 3n=424 4n=425 5n=406 6n=407 7n=448 8n=449 9n=431010n=411111n=441212n=441313n=461414n=451515n=421616n=411717n=451818n=441919n=462020n=452121n=452222n=23X Xn=23Y Y937A summary gains 1.20 loss 0.81 12 23 34 45 56 67 78 89 91010111112121313141415151616171718181919202021212222X XY Y图图 食管癌细胞系食管癌细胞系CGH图图 细胞培养（细胞培养（Tissue and cell culture）是将活体内部分组织细胞）是将活体内部分组织细胞取出后在人工条件下使其生长，繁殖和传代。在体外对细胞取出后在人工条件下使其生长，繁殖和传代。在体外对细胞进行生命活动，细胞癌变等问题研究。还可施加实验因子进进行生命活动，细胞癌变等问题研究。还可施加实验因子进行形态、生化、免疫、分子生物学观察，已广泛应用与病理行形态、生化、免疫、分子生物学观察，已广泛应用与病理学的各个研究领域。学的各个研究领域。由体内直接取出组织或细胞进行培养。优点：离由体内直接取出组织或细胞进行培养。优点：离体时间短遗传性和体内组织相似。宜作细胞形态，机能，分体时间短遗传性和体内组织相似。宜作细胞形态，机能，分化研究。化研究。把细胞自原代培养的培养瓶中分离、稀释而移至把细胞自原代培养的培养瓶中分离、稀释而移至另一新的培养瓶中的操作程序即为传代或再培养。以便持续另一新的培养瓶中的操作程序即为传代或再培养。以便持续培养，得到大量同种细胞，细胞株，维持细胞种延续。培养，得到大量同种细胞，细胞株，维持细胞种延续。图 食管癌细胞系肿瘤细胞培养图片 图 体外神经干细胞培养 易混概念并解释易混概念并解释 前者的原理是细胞中的化学成分和其相应的底物呈一系列前者的原理是细胞中的化学成分和其相应的底物呈一系列的化学反应，形成于显微镜下可见到的反应产物如苏丹的化学反应，形成于显微镜下可见到的反应产物如苏丹法（使中性脂肪着色）、普鲁氏蓝反应法（显示含铁血黄法（使中性脂肪着色）、普鲁氏蓝反应法（显示含铁血黄素）、素）、Feulgen法（显示法（显示DNA）；而后者是应用抗原与抗体）；而后者是应用抗原与抗体接触后可形成接触后可形成“抗原抗体复合物抗原抗体复合物”的化学反应，以检测的化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技术，如组织或细胞内抗原（或抗体）的技术，如PAP、ABC、SA