Agilent1260液相色谱系统操作规程

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资源描述
1 目的规范Agilent 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养,保证仪器的正常运转,确保检测工作的顺利进行。2 适用范围适用于Agilent 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。3 职责实验室分析人员负责Agilent 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。4 系统组成4.1 Agilent 1260系列四元泵(G1311C)和脱气机;4.2可变波长紫外检测器(VWD G1314F);4.3 Chemstation A.01.04 色谱工作站4.4国产柱温箱(AT-550)色谱柱;4.5 电脑、打印机等辅助设备。5 定义无6 操作程序6.1开机前的准备 6.1.1检查仪器校验标识,确认仪器处于校验周期内。6.1.2检查上次实验室仪器设备使用记录表和仪器状态,确认仪器处于正常状态;6.1.3流动相的制备:6.1.3.1按高效液相色谱法流动相配制标准操作规程配制需要的流动相。6.1.3.2用前超声脱气(一般1020min)。6.1.4更换流动相:6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出,用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中,并盖好瓶盖;6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中,并盖好瓶盖。6.1.5供试溶液的配制:6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。6.1.5.2定量测定时,对照品溶液和供试品溶液均应分别配制2份。6.1.5.2如有必要,样品需预处理,如过滤等,以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。 6.1.6选择色谱柱:6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱;6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同,若不同则需进行更换。6.1.7更换色谱柱6.1.7.1拆卸原色谱柱:l 先握住色谱柱,再松动色谱柱出口端螺帽,取下出口端的管线;l 松动色谱柱入口端螺帽,取下入口端的管线;l 用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后,将色谱柱放回原专用包装盒内。6.1.7.2安装新色谱柱:l 从专用包装盒内取出色谱柱,松动并取下色谱柱出入口的止动塞;l 将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端,拧紧螺帽; (注意:安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流动相流向一致。)l 将与检测器相连的管线一端插入色谱柱出口端,拧紧螺帽。6.2开机6.2.1通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。6.2.2接通电源,打开计算机和打印机开关。6.2.3等待计算机自检完毕后,进入Windows桌面,依次打开泵、进样器、检测器各模块电源。打开柱温箱开关。6.2.4待各模块自检完成后,点击Windows桌面“”图标进入化学工作站画面。6.2.5确定仪器与工作站已连接,若未连接,需关闭工作站,重新连接。注意必须先打开检测器,再连接工作站。6.2.6从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项,进入方法和运行控制窗口。6.3 操作6.3.1 泵的开启和设置6.3.1.1打开Purge阀(逆时针),右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法”选项,进入泵编辑画面。6.3.1.2设流速:0ml/min,点击“确定”。 右键点击四元泵下面的空白处,选择“控制”选项,选中“启动”,点击“确定”,泵开始启动。6.3.1.3待泵启动完毕,泵的图标变绿色后,右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法”选项,进入泵编辑画面。设“流量”逐步增大流速至5ml/min ,A通道设到100%,单击“确定”。则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止(一般需要5min左右)。6.3.1.3注意:为保护泵,不宜直接设置过高流速或直接将高流速降为低流速,宜缓慢梯度提高或降低流速;6.3.1.4看柱前压力,若大于10Bar,则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。6.3.1.5右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法”选项,进入泵编辑画面,将流速设为0ml/min,点击“确定”,关闭Purge阀(顺时针)。6.3.1.6右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法”选项,进入泵编辑画面,设置使用的流动相比例和流速或选择已有方法开始系统平衡。6.3.1.7 点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积,点击“确定”。6.3.2 方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。若无,需按下面步骤建立:6.3.2.1 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;6.3.2.2 出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;6.3.2.3 泵参数设定在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂 B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入 ”一行“时间表”,编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。点击“确定”进入下一参数设定。6.3.2.4 柱温箱参数设定在柱温箱上手动输入规定的温度即可。 6.3.2.5紫外检测器(VWD G1314F)参数设定在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在“峰宽 (响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如0.1min (2s)。 在“时间表” 中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min ,波长=300nm。点击“确定”,进入下一参数设定。6.3.2.6 在“ 运行时选项表 ”中选中“ 数据采集”,点击“确定”。6.3.2.7 完整方法编辑完毕。点击“方法”菜单,选中“方法另存为”,输入一方法名称,点击“确定”。 6.3.3 运行样品6.3.3.1 从菜单 “视图”中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后点击“改变” 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。6.3.3.2从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项,输入操作者名称;在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。(区别:手动-每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Pr在前缀/计数器-“前缀”框中输入前缀,在“计数器”框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd数据0001,vwd数据0002。)6.3.3.3 点击“确定”,从“仪器”菜单选择“系统开启”。6.3.3.4 手动进样6.3.4 数据处理双击电脑桌面的“”图标,进入脱机工作站,从“视图”菜单中选择“数据分析”,或点击屏幕左下方的“数据分析”,进行数据处理。6.3.4.1 调用需要处理的数据:从“文件”菜单中选择“调用信号”,或者点击屏幕左上方的图标“”,跳出一个对话框,选择相应文件夹里的数据文件名称,单击“确定”即可。6.3.4.2 调用方法:从“方法”菜单里选择“调用方法”,或者点击屏幕左上方的图标“”,跳出一个对话框,选择相应的方法名称,单击“确定”即可。6.3.4.3 积分:6.3.4.3.1从“积分”菜单中选择“积分”,当前数据被积分。若积分不是很理想,则从“积分”菜单中选择“积分事件”,选择合适的“斜率灵敏度”、“最小峰面积”、“最小峰高”等。6.3.4.3.2从“积分”菜单中选择“积分”,则当前数据被重新积分。6.3.4.3.3 如积分不理想,则重复6.3.4.3.1和6.3.4.3.2,直到满意为止,此时点击图标“”进行积分参数的保存并退出积分参数设定界面。6.3.4.3.4 如果部分谱峰自动积分不是很理想,也可选择手动积分。点击图标“”,绘制峰基线并积分;点击图标“”,切线撇去一个峰并积分(适合拖尾峰的处理);点击图标“”,手动分裂已积分的峰(适合未基线分离的峰的处理);点击“”,删除已积分的峰;点击图标“”,将当前手动积分事件保存到数据文件中。其他数据处理方式详见工作站说明书。6.3.5 打印报告6.3.5.1 打开打印机电源开关,从“报告”菜单中选择“设定报告”,或点击屏幕中间的图标“”,跳出一对话框,选择相应的定量方法和报告格式,单击确定后退出。6.3.5.2 从“报告”菜单中选择“打印报告”,或点击屏幕中间的图标“”,则可预览到报告。若报告中显示的时间范围及响应范围不合适,则可点击“关闭”退出预览。进入“报告版面设计”界面,选择相应的报告格式,双击图谱,点“自定义量程”,输入合适的时间范围和响应范围,并选择“全部使用相同量程”,点击“确定”并保存当前模版后退出,再重新进入“数据分析”界面,重新预览报告,若时间范围和响应范围均合适,单击“打印报告”,即可。6.4 宏命令的使用6.4.1 在“视图”下拉单中调出“化学工作站工作日程表”;6.4.2 输入日期时间、命令并选好执行命令的模式,点击保存图标;6.4.3 各宏命令代表意思及输入方法: 开泵:pumpall on 关泵:pumpall off开灯:lampall on 关灯:lampall off载入一个方法:loadmethod xxx.M开始一个方法:startmethod xxx.M停止一个方法:stopmethod xxx.M关闭整个系统:standby。6.5.4 注意事项:日程表编辑完毕后,一定要保存,并且不能关闭;宏命令不区分大小写。6.6 关机6.6.1 样品测试完毕后,关机前,先关灯,用相应的溶剂充分冲洗系统。l 5%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min;(若使用了无机盐流动体系,则冲洗约30-60min.)l 50%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min;l 80%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min。6.6.2退出化学工作站,依次提示关泵及其它窗口,关闭计算机。关闭Agilent 1260各模块电源开关。6.6.3 做好仪器使用登记,并填写实验室仪器设备使用记录表。6.7 系统日常维护和保养6.7.1色谱柱 使用前仔细阅读色谱柱的说明书,注意适用范围,如pH值范围、压力范围、温度范围、流动相类型等。6.7.2流动相:5%乙腈/甲醇-水应用棕色玻璃瓶存放,避免光照,防止长菌。6.7.3试样配制l 尽量用流动相配制试样。l 必要时使用超声波处理试样,确保试样完全溶解并混合均匀。l 若试样中有肉眼可见的机械杂质,则必须用针头过滤器对试样进行过滤(根据试样的性质选择有机相或水相针头过滤器)。l 对含有颗粒的固体样品,经研磨均匀后方可取样。l 手动进样针:取样前应用试样润洗3次以上,使用后应用甲醇/乙腈清洗3次以上。l 废液处理:及时清理废液瓶,以防废液溢出。6.8仪器安全保障6.8.1 每天使用仪器之前,要打开Purge阀将各个通道冲洗45min左右;6.8.2及时更换Purge Valve内的过滤芯(当打开Purge Valve,流速为5ml/min压力高于10bar时)。Purge阀在关闭状态时,不宜过紧。6.8.3 当仪器使用缓冲溶液作业时,要用水进行过渡并将柱塞杆清洗开关打开。6.8.4仪器暂停两天以上不使用(包括两天),过滤板最好选用甲醇浸泡。6.8.5避免使用不相溶的溶剂作流动相,避免水和缓冲液、酸、碱和含氯溶液在泵内长时间的停留。 6.8.6每次使用前后,应检查泵头、并清洗除去污染物或析出的固体盐。 6.8.7 避免在泵压过高的状态下长时间工作,如果流速较大且压力较高,关闭泵以前需将流速逐渐降低以避免压力波动过大,损坏色谱柱。 6.8.8 无压力显示或压力波动较大时,不能进行分析,应检查排气阀是否关闭,泵中气泡是否已排除,排除故障后方能进行操作。如压力升高,甚至自动停泵,应检查柱端有无污染、堵塞。 6.8.9每次使用、维护完毕后,应当详细填写使用记录,包括柱子类型,遇到的问题、维护方法等。对实验中仪器的出错,应当详细填写具体的发生情况以及处理方法。未能处理的,应向他人求证,并对下位使用者提出问题所在。每次使用仪器之前,应当查看使用记录,确定有没有尚未解决的仪器故障。6.8.10仪器的移动,安装,更新或升级应当由仪器负责人或供应商完成,操作者不得随意移动,拆装仪器。6.8.11仪器出现故障,请立即告知仪器负责人,由负责人集中处理,解决问题。打雷闪电天气最好不开机测样, 防止损坏仪器。7 相关文件7.1 Agilent1260系列四元泵参考手册(英文)。7.2 Agilent1260系列课件紫外检测器用户手册。7.3中国药典附录 高效液相色谱法。7.4AT-550色谱柱恒温恒湿箱使用说明书。7.5高效液相色谱法流动相配制标准操作规程 8 相关记录8.1实验室仪器设备使用记录 8.2HPLC流动相配制记录
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