Agilent1260液相色谱系统操作规程

1 目的规范Agilent 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。2 适用范围适用于Agilent 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。3 职责实验室分析人员负责Agilent 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。4 系统组成4.1 Agilent 1260系列四元泵(G1311C)和脱气机；4.2可变波长紫外检测器（VWD G1314F）；4.3 Chemstation A.01.04 色谱工作站4.4国产柱温箱（AT-550）色谱柱；4.5 电脑、打印机等辅助设备。5 定义无6 操作程序6.1开机前的准备 6.1.1检查仪器校验标识，确认仪器处于校验周期内。6.1.2检查上次实验室仪器设备使用记录表和仪器状态，确认仪器处于正常状态；6.1.3流动相的制备：6.1.3.1按高效液相色谱法流动相配制标准操作规程配制需要的流动相。6.1.3.2用前超声脱气（一般1020min）。6.1.4更换流动相：6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出，用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中，并盖好瓶盖；6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中，并盖好瓶盖。6.1.5供试溶液的配制：6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。6.1.5.2定量测定时，对照品溶液和供试品溶液均应分别配制2份。6.1.5.2如有必要，样品需预处理，如过滤等，以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。 6.1.6选择色谱柱：6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱；6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同，若不同则需进行更换。6.1.7更换色谱柱6.1.7.1拆卸原色谱柱：l 先握住色谱柱，再松动色谱柱出口端螺帽，取下出口端的管线；l 松动色谱柱入口端螺帽，取下入口端的管线；l 用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后，将色谱柱放回原专用包装盒内。6.1.7.2安装新色谱柱：l 从专用包装盒内取出色谱柱，松动并取下色谱柱出入口的止动塞；l 将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端，拧紧螺帽； (注意:安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流动相流向一致。)l 将与检测器相连的管线一端插入色谱柱出口端，拧紧螺帽。6.2开机6.2.1通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。6.2.2接通电源，打开计算机和打印机开关。6.2.3等待计算机自检完毕后，进入Windows桌面，依次打开泵、进样器、检测器各模块电源。打开柱温箱开关。6.2.4待各模块自检完成后，点击Windows桌面“”图标进入化学工作站画面。6.2.5确定仪器与工作站已连接，若未连接，需关闭工作站，重新连接。注意必须先打开检测器，再连接工作站。6.2.6从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。6.3 操作6.3.1 泵的开启和设置6.3.1.1打开Purge阀（逆时针），右键点击四元泵下面的空白处，选择“方法”选项，进入泵编辑画面。6.3.1.2设流速：0ml/min，点击“确定”。 右键点击四元泵下面的空白处，选择“控制”选项，选中“启动”，点击“确定”，泵开始启动。6.3.1.3待泵启动完毕，泵的图标变绿色后，右键点击四元泵下面的空白处，选择“方法”选项，进入泵编辑画面。设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止（一般需要5min左右）。6.3.1.3注意：为保护泵，不宜直接设置过高流速或直接将高流速降为低流速，宜缓慢梯度提高或降低流速；6.3.1.4看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。6.3.1.5右键点击四元泵下面的空白处，选择“方法”选项，进入泵编辑画面，将流速设为0ml/min，点击“确定”，关闭Purge阀（顺时针）。6.3.1.6右键点击四元泵下面的空白处，选择“方法”选项，进入泵编辑画面，设置使用的流动相比例和流速或选择已有方法开始系统平衡。6.3.1.7 点击四元泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积，点击“确定”。6.3.2 方法编辑若已创建方法，可在“方法”菜单选择“调用方法”，选择相应的方法。若无，需按下面步骤建立：6.3.2.1 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”，钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项，点击确定；6.3.2.2 出现“方法信息”对话框，如有需要可将方法的描述信息输入，也可选择不输入任何信息，点击确定；6.3.2.3 泵参数设定在“流量”处输入流量,如1ml/min，在“溶剂 B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入 ”一行“时间表”,编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar，以保护柱子。点击“确定”进入下一参数设定。6.3.2.4 柱温箱参数设定在柱温箱上手动输入规定的温度即可。 6.3.2.5紫外检测器（VWD G1314F）参数设定在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在“峰宽 (响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如0.1min (2s)。 在“时间表” 中可以“插入”一行，输入随时间切换的波长，如1min ，波长=300nm。点击“确定”，进入下一参数设定。6.3.2.6 在“ 运行时选项表 ”中选中“ 数据采集”，点击“确定”。6.3.2.7 完整方法编辑完毕。点击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名称，点击“确定”。 6.3.3 运行样品6.3.3.1 从菜单 “视图”中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后点击“改变” 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。6.3.3.2从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入操作者名称；在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。（区别:手动-每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Pr在前缀/计数器-“前缀”框中输入前缀，在“计数器”框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd数据0001，vwd数据0002。）6.3.3.3 点击“确定”，从“仪器”菜单选择“系统开启”。6.3.3.4 手动进样6.3.4 数据处理双击电脑桌面的“”图标，进入脱机工作站，从“视图”菜单中选择“数据分析”，或点击屏幕左下方的“数据分析”，进行数据处理。6.3.4.1 调用需要处理的数据：从“文件”菜单中选择“调用信号”，或者点击屏幕左上方的图标“”，跳出一个对话框，选择相应文件夹里的数据文件名称，单击“确定”即可。6.3.4.2 调用方法：从“方法”菜单里选择“调用方法”，或者点击屏幕左上方的图标“”，跳出一个对话框，选择相应的方法名称，单击“确定”即可。6.3.4.3 积分：6.3.4.3.1从“积分”菜单中选择“积分”，当前数据被积分。若积分不是很理想，则从“积分”菜单中选择“积分事件”，选择合适的“斜率灵敏度”、“最小峰面积”、“最小峰高”等。6.3.4.3.2从“积分”菜单中选择“积分”，则当前数据被重新积分。6.3.4.3.3 如积分不理想，则重复6.3.4.3.1和6.3.4.3.2，直到满意为止，此时点击图标“”进行积分参数的保存并退出积分参数设定界面。6.3.4.3.4 如果部分谱峰自动积分不是很理想，也可选择手动积分。点击图标“”，绘制峰基线并积分；点击图标“”，切线撇去一个峰并积分（适合拖尾峰的处理）；点击图标“”，手动分裂已积分的峰（适合未基线分离的峰的处理）；点击“”，删除已积分的峰；点击图标“”，将当前手动积分事件保存到数据文件中。其他数据处理方式详见工作站说明书。6.3.5 打印报告6.3.5.1 打开打印机电源开关，从“报告”菜单中选择“设定报告”，或点击屏幕中间的图标“”，跳出一对话框，选择相应的定量方法和报告格式，单击确定后退出。6.3.5.2 从“报告”菜单中选择“打印报告”，或点击屏幕中间的图标“”，则可预览到报告。若报告中显示的时间范围及响应范围不合适，则可点击“关闭”退出预览。进入“报告版面设计”界面，选择相应的报告格式，双击图谱，点“自定义量程”，输入合适的时间范围和响应范围，并选择“全部使用相同量程”，点击“确定”并保存当前模版后退出，再重新进入“数据分析”界面，重新预览报告，若时间范围和响应范围均合适，单击“打印报告”，即可。6.4 宏命令的使用6.4.1 在“视图”下拉单中调出“化学工作站工作日程表”；6.4.2 输入日期时间、命令并选好执行命令的模式，点击保存图标；6.4.3 各宏命令代表意思及输入方法： 开泵：pumpall on 关泵：pumpall off开灯：lampall on 关灯：lampall off载入一个方法：loadmethod xxx.M开始一个方法：startmethod xxx.M停止一个方法：stopmethod xxx.M关闭整个系统：standby。6.5.4 注意事项：日程表编辑完毕后，一定要保存，并且不能关闭；宏命令不区分大小写。6.6 关机6.6.1 样品测试完毕后，关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。l 5%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min;（若使用了无机盐流动体系，则冲洗约30-60min.）l 50%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min;l 80%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min。6.6.2退出化学工作站，依次提示关泵及其它窗口，关闭计算机。关闭Agilent 1260各模块电源开关。6.6.3 做好仪器使用登记，并填写实验室仪器设备使用记录表。6.7 系统日常维护和保养6.7.1色谱柱 使用前仔细阅读色谱柱的说明书，注意适用范围，如pH值范围、压力范围、温度范围、流动相类型等。6.7.2流动相：5%乙腈/甲醇-水应用棕色玻璃瓶存放，避免光照，防止长菌。6.7.3试样配制l 尽量用流动相配制试样。l 必要时使用超声波处理试样，确保试样完全溶解并混合均匀。l 若试样中有肉眼可见的机械杂质，则必须用针头过滤器对试样进行过滤（根据试样的性质选择有机相或水相针头过滤器）。l 对含有颗粒的固体样品，经研磨均匀后方可取样。l 手动进样针：取样前应用试样润洗3次以上，使用后应用甲醇/乙腈清洗3次以上。l 废液处理：及时清理废液瓶，以防废液溢出。6.8仪器安全保障6.8.1 每天使用仪器之前，要打开Purge阀将各个通道冲洗45min左右；6.8.2及时更换Purge Valve内的过滤芯(当打开Purge Valve，流速为5ml/min压力高于10bar时)。Purge阀在关闭状态时，不宜过紧。6.8.3 当仪器使用缓冲溶液作业时，要用水进行过渡并将柱塞杆清洗开关打开。6.8.4仪器暂停两天以上不使用（包括两天），过滤板最好选用甲醇浸泡。6.8.5避免使用不相溶的溶剂作流动相，避免水和缓冲液、酸、碱和含氯溶液在泵内长时间的停留。 6.8.6每次使用前后，应检查泵头、并清洗除去污染物或析出的固体盐。 6.8.7 避免在泵压过高的状态下长时间工作，如果流速较大且压力较高，关闭泵以前需将流速逐渐降低以避免压力波动过大，损坏色谱柱。 6.8.8 无压力显示或压力波动较大时，不能进行分析，应检查排气阀是否关闭，泵中气泡是否已排除，排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染、堵塞。 6.8.9每次使用、维护完毕后，应当详细填写使用记录，包括柱子类型，遇到的问题、维护方法等。对实验中仪器的出错，应当详细填写具体的发生情况以及处理方法。未能处理的，应向他人求证，并对下位使用者提出问题所在。每次使用仪器之前，应当查看使用记录，确定有没有尚未解决的仪器故障。6.8.10仪器的移动，安装，更新或升级应当由仪器负责人或供应商完成，操作者不得随意移动，拆装仪器。6.8.11仪器出现故障，请立即告知仪器负责人，由负责人集中处理，解决问题。打雷闪电天气最好不开机测样, 防止损坏仪器。7 相关文件7.1 Agilent1260系列四元泵参考手册（英文）。7.2 Agilent1260系列课件紫外检测器用户手册。7.3中国药典附录 高效液相色谱法。7.4AT-550色谱柱恒温恒湿箱使用说明书。7.5高效液相色谱法流动相配制标准操作规程 8 相关记录8.1实验室仪器设备使用记录 8.2HPLC流动相配制记录