罗涛的答辩报告

学校：绵 阳 师 范 学 院 年级：2006 级 1 班 专业：化 学 姓名：罗 涛 学号：0610410160 导师：胡 晓 黎 副研究员 血清白蛋白是血浆中最为丰富的蛋白质，不仅对维持透压起重要作用，而且能与进入血液中的大部分内源性和外源性物质如药物等进行可逆的结合从而起到在体内转运的作用。药物与白蛋白的亲和力大小也影响到药物在体内的分布、清理以及通过改变血液或组织中游离药物浓度来影响药效。因此，研究药物与血清白蛋白的结合作用对理解药物的作用机制具有重要意义。本文研究了芦丁与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用，对于阐明药物的运输过程以及其在体内的作用机制具有一定的意义。关于研究芦丁与血清白蛋白作用的研究已有报道，本文在此基础上，进一步用热力学法研究芦丁与血清白蛋白的作用机制，得出了芦丁与血清白蛋白的结合常数、结合位点数和结合过程的基本热力学参数，为芦丁在体内的储存、运输、作用机理及临 床 试 验 提 供 有 用 的 信 息。实验仪器：RF-4500PC荧光光谱仪；微量可调移液器；SWQ-Ic数字控温仪等实验药品：一定浓度芦丁的乙醇溶液 1.010-4molL-1牛血清白蛋白 pH 7.4 的Tris缓冲溶液等 荧光测量：严格按照RF-4500PC荧光光谱仪规范操作步骤进行荧光测量 连续加入法分别对290K，298K时牛血清白蛋白和不同浓度芦丁混合溶液的进行荧光测量 300320340360380400420440460020040060080010001200140016001800FluorescenceWavelength/nm08 图 1数据处理与结果讨论：290K时荧光光谱图：序号 C(芦丁)/molL-1 F F0-F(F0-F)/F 1015020020.0541010-3 141785.000.0600030.108210-3 1176326.00.277140.162310-3 1165337.00.289350.216410-3 930.3571.70.614760.270510-3 782.6719.40.919270.324610-3 296.512054.071300350400450020040060080010001200140016001800FluorescenceWavelength/nm09 298K时荧光光谱图 图 2序号 C(芦丁)/molL-1 F F0-F(F0-F)/F 1017000020.054110-3 1232468.00.379830.108210-3 1199501.00.417840.162310-3 1176524.00.445650.216410-3 1146554.00.483460.270510-3 1126574.00.509870.324610-3 1102598.00.54270.100.150.200.250.300.350.00.20.40.60.81.0y=4.38423x-0.37894(Fo-F)/FC/10-3molL-1根据Stern-Volmer方程绘制290K时的(F0-F)/FQ曲线 图 30.050.100.150.200.250.300.350.300.350.400.450.500.55y=0.70323x+0.2932(Fo-F)/FC/10-3molL-1 图 4温度/K Stern-Volmer方程 Stern-Volmer猝灭常数Ka 290y=4.384x-0.3789 4.384103 298y=0.7032x+0.2932 0.7032103 由该表可看出：随温度升高直线斜率减小，表明猝灭机理为静态猝灭 根据不同温度下相互作用所得的结合常数，利用公式 lnK2/K1=H(1/T1-1/T2)/R G=-RTlnKa G=H-TS 从而计算出反应的焓变(H)、熵变(S)和吉布斯自由能变(G)等反应的热力学参数的值。温度/KKaLmol-1 GkJmol-1 HkJmol-1 SJmol-1K-1 290 4.384103-20.35-26.54-21.17 2980.703103-16.24-26.54-34.56 根据ROSS理论：H0 00 疏水作用力 H0 静电作用力 H0 S0 范德华力或氢键作用力 所以，芦丁与牛血清白蛋白之间的相互作用力为范德华力或氢键作用力。1）芦丁对牛血清白蛋白的荧光存在猝灭作用。2）试验发现温度对芦丁与牛血清白蛋白的荧光灭反应的影响较大，两者在生理条件下猝灭机理为静态猝灭。3）计算了两个实验温度下芦丁与BSA的结合常数，得到作用过程的热力学参数，得出了范德华力或氢键作用力为主要作用力。本文所获结果可以为更深入的了解芦丁与血清白蛋白的作用机理，改造芦丁分子，寻找新的药物分子提供有价值的参考信息。结 论