miRNA细胞转染(Entranster)步骤

上传人:xian****hua 文档编号:147296882 上传时间:2022-09-02 格式:DOC 页数:1 大小:14.01KB
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下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下miRNA转染步骤(24孔板)1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6105,那么就用2105的细胞进行转染。 2.转染过程 取0.67ug(50pmol)的miRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25l。 注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 取1ul的EntransterTM-R4000,然后加入24ul无血清稀释液体,充分混匀,制成EntransterTM-R4000稀释液,终体积为25l。室温静置5分钟。 将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上)混合,室温静置15分钟。转染复合物制备完成。 将50l转染复合物滴加到有0.45ml全培养基(可含10%血清和抗生素)的细胞上,前后移动培养皿,混合均匀。 注意:对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。 转染后6小时观察细胞状态,如状态良好可不必更换培养基,继续培养24-96小时得到结果。
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