化妆品中游离甲醛的检测方法x

附件 2化妆品中游离甲醛的检测方法Determinationof free formaldehyde incosmetics1 范围本方法规定了柱后衍生 - 高效液相色谱法测定化妆品中游离 甲醛含量。本方法适用于水剂、膏霜乳液、凝胶类化妆品中游离甲醛含 量的测定。2 方法提要样品中的游离甲醛经高效液相色谱分离， 柱后衍生， 在 420nm 波长下检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计 算含量。取 0.2g 样品时，本方法对游离甲醛的检出浓度为 0.003%， 最低定量浓度为 0.005%。3 试剂和材料除另有规定外， 所用试剂均为分析纯或以上规格， 水为 GB/T 6682 规定的一级水。3.1 甲醛标准物质水溶液，使用前按附录 A 方法进行标定。3.2 磷酸，分析纯。3.3 乙酸铵，色谱纯。3.4 冰乙酸 , 分析纯。3.5 乙酰丙酮，分析纯。3.6 二氯甲烷，分析纯。3.7磷酸溶液：取磷酸（3.2） 2mL ,缓缓加入到998mL水中， 混匀。3.8柱后衍生溶液：称取 62.5g乙酸铵（3.3），力口 7.5mL冰乙 酸（ 3.4）， 5mL 乙酰丙酮（ 3.5），加水至 1000mL ，摇匀。该溶液 可有效使用 3 天。3.9甲醛系列标准溶液： 精密量取甲醛标准物质水溶液 （3.1） 适量，用磷酸溶液（3.7）稀释成1.0卩g/mL2.0卩g/mL 5.0卩g/mL 10.0卩g/mL 20.0卩g/m、50.0卩g/m的标准系列溶液。临用现配。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器。4.2 柱后衍生仪。4.3 天平。4.4 离心机。4.5 涡旋振荡器。5 分析步骤5.1 样品处理称取样品0.2g （精确至0.001g）于10mL具塞比色管中，加 磷酸溶液（ 3.7）至刻度，涡旋处理1 分钟， 5000rpm 离心 5min ，取上清液经0.45微孔滤膜（水相）过滤，滤液作为待测溶液，并尽快测定。必要时，可以取上清液加入 10mL 二氯甲烷（ 3.6），振摇，静 置分层后取上层溶液经 0.45 m微孔滤膜（水相）过滤，滤液作为 待测溶液。5.2 色谱参考条件色谱柱：C18色谱柱（250 4.6mm X5m）,或等效色谱柱； 流动相：磷酸溶液（ 3.7）；流速： 1.0mL/min ；柱温：20 C；检测波长： 420nm；进样体积：10 yL;柱后衍生溶液流速： 0.5mL/min ；衍生温度：100 C。5.3 测定在“5.2”项色谱条件下， 取“3.9”项下的甲醛系列标准溶液 分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标， 甲醛衍生物的峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线， 得到回归方程。取“5.1 ”项下处理得到的待测溶液进样10 yL,进行色谱分析，根据保留时间和光谱图定性，测得甲醛衍生物的峰面积，根据标 准曲线得到待测溶液中游离甲醛的质量浓度。 按“ 6” 计算样品中 游离甲醛的含量。6分析结果的表述6.1计算（游离甲醛） xX式中： （游离甲醛）一一化妆品中游离甲醛的含量，%;m样品取样量，g ;二一一代入标准曲线计算得到的样品中甲醛的质量浓度，卩 g/mL ;V 定容体积，mL。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超 过算术平均值的10%。6.2回收率和精密度回收率为95.3% 112.5%，相对标准偏差小于 10%。7图谱1?S-為i -1ZM-*图1甲醛标准溶液色谱图甲醛（4.542min）附录 A（规范性附录）甲醛标准溶液的标定A.1 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯或以上规格，水为 GB/T 6682规定的一级水。A.1.1硫酸，优级纯。A.1.2氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠 4g,用少量水溶解，再加 水至100mL，混匀。A.1.3 硫酸溶液I:取硫酸（A.1.1 ） 3mL ,缓慢加入到97mL 水中，混匀。A.1.4 硫酸溶液取硫酸（A.1.1 ） 10mL ,缓慢加入到90mL 水中，混匀。A.1.5 淀粉溶液：称取可溶性淀粉1g,用水5mL调成溶液后， 加入沸水95mL ,煮沸，加水杨酸0.1g或氯化锌0.4g防腐。A.1.6 碘标准溶液：称取碘13.0g和碘化钾35g,加水100mL , 溶解后加入盐酸3滴，用水稀释至1L ,过滤后转移至棕色瓶中。A.1.7 重铬酸钾标准溶液 c（1/6K2Cr2O7）=0.1mol/L ：准确称 取于120C2C干燥至恒重的重铬酸钾基准物质 4.9031g ,溶于水 转移至1L容量瓶中，定容到刻度，摇匀。A.1.8 硫代硫酸钠标准溶液： 称取硫代硫酸钠 （Na2S2O3.5H2O） 26g或无水硫代硫酸钠16g溶于1L新煮沸放冷的水中，加入氢氧化 钠0.4g或无水碳酸钠0.2g，摇匀，储存于棕色玻璃瓶内，放置两周 后过滤，并按如下方法标定浓度：准确量取重铬酸钾标准溶液 （A.1.7）25.00mL于500mL碘量瓶 中，加碘化钾2.0g和硫酸溶液口 （A.1.4） 20mL ,立即密塞，摇匀， 于暗处放置10min。加水150mL，用硫代硫酸钠溶液（A.1.8）滴定 至溶液显浅黄色时，加入淀粉溶液（A.1.5 ） 2mL，继续滴定至溶液颜色由蓝色变为亮绿色。同时做空白试验。按下式计算硫代硫 酸钠溶液的浓度：（ ）式中：c（Na2&03）硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L ;c（K2CrO7）重铬酸钾标准溶液的浓度c（1/6K zCaOJ, mol/L ;V1滴定重铬酸钾消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL ;Vo滴定空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL。A.2标定准确量取甲醛标准物质水溶液适量（相当于甲醛1020mg）于250mL碘量瓶中，加入碘标准溶液（A.1.6） 50.00mL ,氢氧化钠溶液（A.1.2） 15mL ,加塞，摇匀放置15min，加硫酸溶液I （A.1.3 ） 20mL ,立即塞紧，混匀，于暗处放置15min，用硫代硫酸钠标准溶液（A.1.8 ）滴定至溶液显淡黄色时， 加入淀粉溶液（A.1.5 ）2mL ,继续滴定至溶液的蓝色刚好褪去，记录消耗硫代硫酸钠标准溶液 的体积。同时做空白试验。并按下式计算甲醛的浓度：（ ）（ ）式中：（HCHO）甲醛溶液的浓度分数，mg/L ；V 甲醛标准储备液取样体积，mL ；mL ；mL ；V。一一滴定空白溶液消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积， Vi滴定甲醛溶液消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积， c硫代硫酸钠溶液的摩尔浓度， mol/L ；15 甲醛（1/2HCHO ）摩尔质量，g/mol。附录 B（规范性附录）液相色谱 -串联质谱参考方法当样品中游离甲醛含量大于0.05% 时，可采用液相色谱 -三重四级杆质谱进行确证。B.1 样品处理称取样品0.2g （精确至O.OOIg）于10mL具塞比色管中，加 五氟苯肼溶液（称取五氟苯肼1.0g ,置1000mL容量瓶中，用磷酸溶液（ 3.7）溶解并定容，摇匀，即得）至刻度，涡旋处理1 分钟，5000rpm离心5min，取上清液经0.22卩谄微孔滤膜过滤，滤 液作为待测溶液，立即测定。另取甲醛标准溶液适量（与样品中游离甲醛的量相当）于10mL 具塞比色管中，同法处理。B.2 液相色谱 - 质谱法参考条件色谱参考条件：色谱柱：C18柱（2.1mmX150mmK 3.5卩:），或等效色谱柱；流动相 A ：水；流动相 B ：乙腈；流动相梯度洗脱程序见下表：表1流动相梯度洗脱程序时间/minV （流动相A） /%V （流动相B） /%1.090103.040606.001008.001008.19010流速：0.3mL/min ;柱温：25C；进样量：5 L质谱参考条件：离子源：电喷雾离子源（ESI源）；监测模式：负离子多反应监测模式；气流温度：160 C；鞘气温度：350 C；雾化气压力：30psi ；毛细管电压：1500V ；碰撞气：氮气；其他质谱条件参见下表：表2监测离子对及相关电压参数设定表物质名称母离子（m/z） 子离子（m/z）CE （V）甲醛与五氟苯肼衍生物20918917167B.3定性分别取B.1项下甲醛标准溶液及样品溶液5L,在相同试验条件下，样品中各离子对的保留时间应与标准溶液中各离子对的 保留时间一致；样品色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比 与标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过下表规定范围，则 可以判断样品中存在甲醛。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度（k）k 50%50 % k 20 %20 % k 10 %k 10 %图B.1甲醛与五氟苯肼衍生物LC-MS色谱图