微生物课程实验8 微生物的生理生化反应

跳转到第一页 实实 验验 八八微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应跳转到第一页 微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应n目的要求目的要求n实验材料实验材料n实验程序实验程序n思考题思考题跳转到第一页 目的要求目的要求n通过不同细菌对不同化合物的分解通过不同细菌对不同化合物的分解利用情况，了解细菌生理代谢的多利用情况，了解细菌生理代谢的多样性。样性。n学习各种接种方法学习各种接种方法跳转到第一页实实 验验 材材 料料n菌种：菌种：大肠杆菌（大肠杆菌（Escherichia ccoli）、）、枯草杆菌枯草杆菌（Bacillus subtilis）荧光假单胞菌荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、）、金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌（菌（Staphylococcus aureus）。）。n培养基：培养基：淀粉培养基、油脂培养基、石蕊牛乳培养淀粉培养基、油脂培养基、石蕊牛乳培养基。基。n试剂：试剂：碘液。碘液。n其它：其它：试管、三角瓶、移液管、接种针、接种环、试管、三角瓶、移液管、接种针、接种环、培养皿。培养皿。跳转到第一页实实 验验 程程 序序n淀粉水解试验淀粉水解试验n油脂水解试验油脂水解试验n石蕊牛奶试验石蕊牛奶试验跳转到第一页实实 验验 程程 序序 （淀粉水解试验）（淀粉水解试验）n某些细菌可以产生淀粉酶（胞外某些细菌可以产生淀粉酶（胞外酶），使淀粉水解为麦芽糖和葡酶），使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。淀粉萄糖，再被细菌吸收利用。淀粉水解后遇碘不再变蓝色。水解后遇碘不再变蓝色。在淀粉培养基的平板上每个菌种在淀粉培养基的平板上每个菌种涂片涂片0.30.5cm大小的圆，其中大小的圆，其中一种应以枯草杆菌作为对照。将一种应以枯草杆菌作为对照。将培养皿倒置于培养皿倒置于370C恒温箱中培养恒温箱中培养24h，观察时打开皿盖，滴加少观察时打开皿盖，滴加少量碘液于平板上，使其铺满整个量碘液于平板上，使其铺满整个平板。如菌体周围出现无色透明平板。如菌体周围出现无色透明圈，则说明淀粉已被水解。透明圈，则说明淀粉已被水解。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的强弱。力的强弱。跳转到第一页实验程序实验程序 （油脂水解试验）（油脂水解试验）n某些细菌可以产生脂肪酶（胞外某些细菌可以产生脂肪酶（胞外酶），能分解培养基中的脂肪成酶），能分解培养基中的脂肪成为甘油及脂肪酸。用中性红来指为甘油及脂肪酸。用中性红来指示，当细菌分解脂肪产生脂肪酸示，当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则培养基中出现红色斑点。时，则培养基中出现红色斑点。在油脂培养基的同一平板上的两在油脂培养基的同一平板上的两边划线培养两种菌（其中一种是边划线培养两种菌（其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照）。金黄色葡萄球菌作为对照）。370C恒温箱内培养恒温箱内培养24h，取出后取出后观察平板底层长菌的地方，如出观察平板底层长菌的地方，如出现红色斑点，即说明脂肪被水解，现红色斑点，即说明脂肪被水解，此反应为正反应。此反应为正反应。跳转到第一页 实验程序实验程序V（培养基培养基2）n油脂培养基油脂培养基 蛋白胨蛋白胨 10g 牛肉膏牛肉膏 5g NaCl 5g 香油或花生油香油或花生油 10g 中性红（中性红（1.6%水溶液）约水溶液）约1mL 琼脂琼脂 1520g 蒸馏水蒸馏水 1000mL pH 7.2 配制时注意事项：配制时注意事项：1.不能使用已变质的油。不能使用已变质的油。2.油和琼脂及水先加热。油和琼脂及水先加热。3.调好调好pH之后，再加入中性红使培养基稍呈红色为止。之后，再加入中性红使培养基稍呈红色为止。4.分装培养基时，需不断地搅拌，使油脂均匀分布于培养基分装培养基时，需不断地搅拌，使油脂均匀分布于培养基中中跳转到第一页实验程序实验程序 1 （石蕊牛奶试验）（石蕊牛奶试验）n 细菌对牛奶的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解细菌对牛奶的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂，石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱原指示剂，石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可的利用可分为三种情况：分为三种情况：1.酸凝固作用酸凝固作用 细菌发酵乳糖后产酸，使石蕊牛乳变细菌发酵乳糖后产酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固。红，当酸度很高时，可使牛乳凝固。2.凝乳酶凝固作用凝乳酶凝固作用 某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。但通中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。但通常此类细菌还能水解蛋白质而产生一些碱性物质，使常此类细菌还能水解蛋白质而产生一些碱性物质，使石蕊变蓝。石蕊变蓝。跳转到第一页实验程序实验程序III 2（石蕊牛奶试验）石蕊牛奶试验）3.胨化作用胨化作用 酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。此作用可在酸性和碱性条件下进明的液体。此作用可在酸性和碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原脱色。行，一般石蕊色素被还原脱色。n接种大肠杆菌或荧光假单胞菌于石蕊牛奶培接种大肠杆菌或荧光假单胞菌于石蕊牛奶培养基中，置于养基中，置于370C恒温箱内培养恒温箱内培养7d。另外保另外保留留1支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照跳转到第一页实验程序实验程序跳转到第一页实验程序实验程序（培养基）（培养基）n淀粉水解培养基淀粉水解培养基 蛋白胨蛋白胨 10g 氯化钠氯化钠 5g 可溶性淀粉可溶性淀粉 2g 牛肉膏牛肉膏 3g 水水 1000mL 琼脂琼脂 1520g pH 7.47.8 1210C高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌30min跳转到第一页实验程序实验程序（培养基（培养基1）n石蕊牛奶培养基：石蕊牛奶培养基：1.脱脂牛奶的制备：脱脂牛奶的制备：新鲜牛奶用离心机分离，除去上新鲜牛奶用离心机分离，除去上层奶油，取下层脱脂牛奶。若无新鲜牛奶可用脱脂奶层奶油，取下层脱脂牛奶。若无新鲜牛奶可用脱脂奶粉代替，每粉代替，每1000mL溶解溶解100g脱脂奶粉。或将鲜乃煮脱脂奶粉。或将鲜乃煮沸，在阴凉处静置沸，在阴凉处静置24h，用虹吸法取出底层牛奶。用虹吸法取出底层牛奶。2.石蕊液的配制：石蕊液的配制：将石蕊浸泡在蒸馏水中过夜或更长将石蕊浸泡在蒸馏水中过夜或更长时间，使石蕊变软而易于溶解，溶解后过滤，即可用时间，使石蕊变软而易于溶解，溶解后过滤，即可用作配制石蕊牛奶。石蕊作配制石蕊牛奶。石蕊2.9g，蒸馏水蒸馏水1000mL 跳转到第一页实验程序实验程序VI（石蕊牛奶培养基石蕊牛奶培养基2）3.石蕊牛奶的配制：石蕊牛奶的配制：2.5%石蕊溶液石蕊溶液4mL，脂肪牛奶脂肪牛奶100mL，混合后的颜色为丁香混合后的颜色为丁香花紫色为适度，分装试管，牛奶高度约花紫色为适度，分装试管，牛奶高度约4cm。间歇灭菌或间歇灭菌或0.6kg蒸汽灭菌蒸汽灭菌2030min。n注意事项：最好用新鲜牛奶，否则需调注意事项：最好用新鲜牛奶，否则需调节节pH，调过调过pH的牛奶色调不正。的牛奶色调不正。跳转到第一页 思思 考考 题题n分述淀粉水解实验，油脂水解实验分述淀粉水解实验，油脂水解实验和石蕊牛奶实验的基本生化原理。和石蕊牛奶实验的基本生化原理。跳转到第一页实实 验验 九九结结 束束