资源描述
小鼠生长激素（GH） Elisa试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96Tlyg/L _32yg/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、脑垂体样本中生长激素（GH）含量。实验原理小鼠生长激素（GH）Elisa试剂盒说明书本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠生长激 素（GH）水平。用纯化的小鼠生长激素（GH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入生长激素GH）， 再与HRP标记的生长激素（GH）抗体结合，形成抗体抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤 后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的 黄色。颜色的深浅和样品中的生长激素GH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光 度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠生长激素（GH）浓度。试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml XI瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品（64p g/L） 0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlX1瓶4 样品稀释液 6mlX1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂 A 液 6mlX1 瓶 11 封板膜 2 张6显色剂B液6mlX 1/瓶 12密封袋1个标本要求1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融2. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。3. 组织处理：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻 保存备用。标本融化后仍然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS （PH7.4），用手 工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。 分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。32p g/L 5号标准品150p l的原倍标准品加入150p l标准品稀释液16p g/L 4号标准品150p l的5号标准品加入150p l标准品稀释液8p g/L 3号标准品150p l的4号标准品加入150p l标准品稀释液 4p g/L 2号标准品150p l的3号标准品加入150p l标准品稀释液 2p g/L 1号标准品150p l的2号标准品加入150p l标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50p l,待测样品孔中先加样品稀释液40p l， 然后再加待测样品10p l （样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50p 1,空白孔除外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50p 1,再加入显色剂B50p 1,轻轻震荡混匀，37C避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50p 1,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出 标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍 数,即为样品的实际浓度。注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）o5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8Co2有效期： 6 个月
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