基因工程的常规技术1

第一节 凝胶电泳技术 一、琼脂糖凝胶电泳一、琼脂糖凝胶电泳 用琼脂糖凝胶作为支持介质的区带电泳法。用琼脂糖凝胶作为支持介质的区带电泳法。注意事项：注意事项：EBEB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。常用的电泳缓冲液常用的电泳缓冲液杂交技术：是利用杂交技术：是利用DNA分子的变性、复性以及碱分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，对某一特异性基互补配对的高度精确性，对某一特异性DNA序列进行探查的技术。序列进行探查的技术。1）切口平移标记法）切口平移标记法2）随机引物法（）随机引物法（random priming）以以68个核苷酸长的序列随机的寡核苷酸作个核苷酸长的序列随机的寡核苷酸作为引物，在为引物，在Klenow片段作用下，加入带有片段作用下，加入带有标记的标记的dNTP进行随机扩增，即可形成放射进行随机扩增，即可形成放射性同位素标记的性同位素标记的DNA探针。探针。优点：优点：由于随机引物由于随机引物标记仅仅需要一种酶，标记仅仅需要一种酶，比较简单，条件易于控比较简单，条件易于控制，杂交重复性好，所制，杂交重复性好，所以应用较多。以应用较多。末端标记末端标记用T4多核苷酸激酶标记DNA5末端 p-CGACG-OH 碱性磷酸酶碱性磷酸酶(AKP）-32PATPT4噬菌体多核苷酸激酶（噬菌体多核苷酸激酶（PNK）32P因此，核酸杂交也被称为因此，核酸杂交也被称为“DNA印迹杂交印迹杂交”。吸水纸吸水纸毛细管虹吸法毛细管虹吸法Southern转膜转膜（a）（b）（c）（d）（e）基因组基因组DNADNA限制片段限制片段硝酸纤维素滤膜硝酸纤维素滤膜同探针同源杂交的同探针同源杂交的基因基因DNA片段片段 X光底片光底片A B C D E F G H I J K L酶标记的第二抗体酶标记的第二抗体第一抗体第一抗体膜上结合的蛋白成分膜上结合的蛋白成分第一抗体第一抗体膜上结合的蛋白成分膜上结合的蛋白成分9、静夜四无邻，荒居旧业贫。22.7.2422.7.24Sunday,July 24,202210、雨中黄叶树，灯下白头人。7:49:217:49:217:497/24/2022 7:49:21 AM11、以我独沈久，愧君相见频。22.7.247:49:217:49Jul-2224-Jul-2212、故人江海别，几度隔山川。7:49:217:49:217:49Sunday,July 24,202213、乍见翻疑梦，相悲各问年。22.7.2422.7.247:49:217:49:21July 24,202214、他乡生白发，旧国见青山。2022年7月24日星期日上午7时49分21秒7:49:2122.7.2415、比不了得就不比，得不到的就不要。2022年7月上午7时49分22.7.247:49July 24,202216、行动出成果，工作出财富。2022年7月24日星期日7时49分21秒7:49:2124 July 202217、做前，能够环视四周；做时，你只能或者最好沿着以脚为起点的射线向前。上午7时49分21秒上午7时49分7:49:2122.7.249、没有失败，只有暂时停止成功！。22.7.2422.7.24Sunday,July 24,202210、很多事情努力了未必有结果，但是不努力却什么改变也没有。7:49:217:49:217:497/24/2022 7:49:21 AM11、成功就是日复一日那一点点小小努力的积累。22.7.247:49:217:49Jul-2224-Jul-2212、世间成事，不求其绝对圆满，留一份不足，可得无限完美。7:49:217:49:217:49Sunday,July 24,202213、不知香积寺，数里入云峰。22.7.2422.7.247:49:217:49:21July 24,202214、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。2022年7月24日星期日上午7时49分21秒7:49:2122.7.2415、楚塞三湘接，荆门九派通。2022年7月上午7时49分22.7.247:49July 24,202216、少年十五二十时，步行夺得胡马骑。2022年7月24日星期日7时49分21秒7:49:2124 July 202217、空山新雨后，天气晚来秋。上午7时49分21秒上午7时49分7:49:2122.7.249、杨柳散和风，青山澹吾虑。22.7.2422.7.24Sunday,July 24,202210、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。7:49:217:49:217:497/24/2022 7:49:21 AM11、越是没有本领的就越加自命不凡。22.7.247:49:217:49Jul-2224-Jul-2212、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。7:49:217:49:217:49Sunday,July 24,202213、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。22.7.2422.7.247:49:217:49:21July 24,202214、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。2022年7月24日星期日上午7时49分21秒7:49:2122.7.2415、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。2022年7月上午7时49分22.7.247:49July 24,202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022年7月24日星期日7时49分21秒7:49:2124 July 202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。上午7时49分21秒上午7时49分7:49:2122.7.24MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit amet,consectetur adipiscing elit.Fusce id urna blandit,eleifend nulla ac,fringilla purus.Nulla iaculis tempor felis ut cursus.感 谢 您 的 下 载 观 看感 谢 您 的 下 载 观 看专家告诉