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免疫诊断免疫诊断Immunodiagnosis Immunodiagnosis 免疫系 王巍免疫诊断免疫诊断(Immune diagnosis)概念概念 利用免疫学原理进行临床疾病的诊利用免疫学原理进行临床疾病的诊断或辅助诊断断或辅助诊断 抗原抗体反应的高度特异性抗原抗体反应的高度特异性 -亲和力亲和力 抗原抗体反应的可逆结合抗原抗体反应的可逆结合 -解离度解离度 抗原抗体反应需要合适的浓度和比例抗原抗体反应需要合适的浓度和比例-可可见性见性 抗原抗体反应的两个阶段：抗原抗体反应的两个阶段：（1 1）特异性结合）特异性结合-非共价，肉眼不可见，几秒非共价，肉眼不可见，几秒-几分钟几分钟 （2 2）可见性反应）可见性反应-电荷吸引，肉眼可见，数小时电荷吸引，肉眼可见，数小时-数天数天一、抗原或抗体的检测一、抗原或抗体的检测（一）、抗原抗体反应的特点（一）、抗原抗体反应的特点抗原抗体比例合适抗原抗体比例合适温度：温度：37度度酸碱度：酸碱度：pH 6-8电解质：失去表面电荷电解质：失去表面电荷抗原抗体反应的影响因素：抗原抗体反应的影响因素：（二）、检测抗原或抗体的方法（二）、检测抗原或抗体的方法1.凝集反应（凝集反应（agglutination)：颗粒性抗原与相应抗颗粒性抗原与相应抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团块凝集团块直接凝集反应：直接凝集反应：颗粒性抗原颗粒性抗原+相应抗体相应抗体 ABO ABO血型测定血型测定间接凝集反应：间接凝集反应：可溶性抗原可溶性抗原+颗粒载体颗粒载体+相应抗体相应抗体2.沉淀反应沉淀反应(precipitation)：可溶性抗原与相应抗体结可溶性抗原与相应抗体结合出现沉淀物合出现沉淀物单向免疫扩散：可用于检测血清中单向免疫扩散：可用于检测血清中IgIg的含量的含量双向免疫扩散：抗原抗体的定性分析双向免疫扩散：抗原抗体的定性分析免疫电泳：常用于血清蛋白种类分析免疫电泳：常用于血清蛋白种类分析免疫比浊：免疫比浊：Ag ConcentrationDiameter2AgAgAgAgAb in gel单向免疫扩散单向免疫扩散双向免疫扩散双向免疫扩散Ag+-AgAb免免 疫疫 电电 泳泳3.用标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应用标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应免疫荧光法免疫荧光法：荧光素与抗体连接荧光素与抗体连接 荧光抗体荧光抗体 直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色 间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色记的二抗染色AgFluorochromeLabeled AbTissue SectionAgFluorochromeLabeled Anti-IgTissue SectionUnlabeledAb 酶免疫测定：酶免疫测定：酶标记抗体进行的抗原抗体反应酶标记抗体进行的抗原抗体反应 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA)(ELISA)：将已知的抗原或抗体吸附在固将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用相结合，通过酶它将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。作用于底物后显色来判定结果。双抗体夹心法双抗体夹心法 检测待测抗原检测待测抗原间接法间接法 检测待测抗体检测待测抗体BAS-ELISA BAS-ELISA（生物素（生物素-亲和素系统亲和素系统-ELISA-ELISA）酶联免疫斑点试验酶联免疫斑点试验(ELISPOT)(ELISPOT)免疫组化技术免疫组化技术放射免疫测定法（放射免疫测定法（radioimmunoassay,RIA）：）：放射性核素标记抗原或抗体，放射性核素标记抗原或抗体，131131I I、125125I I化学发光免疫技术（化学发光免疫技术（chemiluminescence immunoassay,CLIA）：）：化学发光物质化学发光物质标记抗原或抗体，标记抗原或抗体，鲁米诺鲁米诺免疫胶体金（免疫胶体金（immunological colloidal gold signature,ICS）：）：胶体金颗粒标记抗原或抗体，氯金酸胶体金颗粒标记抗原或抗体，氯金酸（HAuClHAuCl4 4）免疫印迹技术（免疫印迹技术（immunoblotting,western blotting）：）：十二烷基磺酸钠（十二烷基磺酸钠（SDSSDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳（）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGEPAGE）后转）后转膜孵育一抗二抗膜孵育一抗二抗二、免疫细胞的测定二、免疫细胞的测定分析免疫细胞的数量和功能，评价病人的分析免疫细胞的数量和功能，评价病人的免疫功能包括免疫功能包括CDCD分子测定、淋巴细胞转化、分子测定、淋巴细胞转化、吞噬实验、细胞毒实验等吞噬实验、细胞毒实验等（一）、淋巴细胞的分离与类型鉴定（一）、淋巴细胞的分离与类型鉴定分离方法：密度梯度离心分离方法：密度梯度离心 单个核细胞单个核细胞磁珠分离：抗体与磁珠交联磁珠分离：抗体与磁珠交联免疫吸附分离法：将已知抗体包被培养皿，加入淋巴细胞免疫吸附分离法：将已知抗体包被培养皿，加入淋巴细胞悬液悬液荧光激活细胞分选仪分离法（荧光激活细胞分选仪分离法（FACSFACS）抗原肽抗原肽-MHC-MHC分子四聚体技术分子四聚体技术磁珠分离法：磁珠分离法：磁珠标记的抗体磁珠标记的抗体流式细胞分选仪（流式细胞分选仪（FACS）（二）、免疫细胞功能测定：（二）、免疫细胞功能测定：T T细胞功能测定细胞功能测定B B细胞功能测定细胞功能测定吞噬细胞功能测定吞噬细胞功能测定T T细胞功能测定：细胞功能测定：T T细胞增殖试验细胞增殖试验细胞毒试验细胞毒试验细胞因子检测细胞因子检测皮肤试验皮肤试验 3H-TdR 3H-TdR 掺入法：掺入法：氚标记的胸腺嘧啶核苷，掺入新合成的氚标记的胸腺嘧啶核苷，掺入新合成的DNADNA中，中，增殖越多增殖越多3H-TdR3H-TdR掺入越多掺入越多2.MTT2.MTT法法 3-3-（4 4，5-5-二甲基二甲基-2-2-噻唑）噻唑）-2-2，5-5-二苯基溴化二苯基溴化四唑，被琥珀酸脱氢酶还原为紫褐色颗粒四唑，被琥珀酸脱氢酶还原为紫褐色颗粒细胞增殖的检测法：细胞增殖的检测法：细胞毒实验：细胞毒实验：细胞形态：台盼蓝染色51Cr的释放LDH释放凋亡细胞检测法：凋亡细胞检测法：细胞形态：琼脂糖电泳:DNA ladder bandFACS:DNA 断裂为非二倍体TUNEL：TdT-dUTP 连接着色 DNA 3断裂末端死细胞细胞因子的检测细胞因子的检测生物活性检测法：CTLL 细胞株 IL-2 依赖 增殖 vs 细胞因子含量免疫学检测：ELISA ELISPOTB B细胞功能测定细胞功能测定IgIg定量：单向琼脂扩散、免疫比浊法、定量：单向琼脂扩散、免疫比浊法、ELISAELISAB B细胞增殖试验细胞增殖试验抗体形成细胞测定：抗体形成细胞测定：溶血空斑实验吞噬细胞功能测定吞噬细胞功能测定趋化功能测定（趋化功能测定（Boyden 小室）小室）吞噬功能测定吞噬功能测定 硝基蓝四氮唑硝基蓝四氮唑 NBT淡黄色经超氧阴离子淡黄色经超氧阴离子O2-变变为蓝黑色颗粒为蓝黑色颗粒 荧光标记的生物颗粒、天然有色颗粒（鸡红细胞）荧光标记的生物颗粒、天然有色颗粒（鸡红细胞）三、免疫学检测方法的应用三、免疫学检测方法的应用疾病的诊断：疾病的诊断：感染性疾病感染性疾病 超敏反应性疾病超敏反应性疾病 自身免疫病自身免疫病 免疫缺陷病免疫缺陷病 肿瘤肿瘤免疫学监测：免疫学监测：免疫学防治免疫学防治Immunoprophylaxis and immunotherapyImmunoprophylaxis and immunotherapy 一、一、免疫预防免疫预防疫苗的基本要求疫苗的基本要求:安全安全 有效有效 实用实用 自然免疫：自然免疫：机体感染病原体后建立的特异性免疫，包括胎儿机体感染病原体后建立的特异性免疫，包括胎儿或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。疫苗（疫苗（vaccinevaccine）：）：一些能够诱导机体产生特异性免疫的人工一些能够诱导机体产生特异性免疫的人工主动免疫制剂如细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素等统称主动免疫制剂如细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素等统称为疫苗。为疫苗。人工主动免疫人工主动免疫:用疫苗接种机体使之产生特异性免用疫苗接种机体使之产生特异性免 疫疫,从而预防感染的措施。从而预防感染的措施。人工被动免疫：人工被动免疫：给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。人工主动免疫人工主动免疫 减毒活疫苗：免疫原性强，类似轻症感染，只需接种减毒活疫苗：免疫原性强，类似轻症感染，只需接种一次。卡介苗、脊髓灰质炎、麻疹、风疹疫苗一次。卡介苗、脊髓灰质炎、麻疹、风疹疫苗 灭活疫苗（死疫苗）：免疫原性强，理化灭火，诱导灭活疫苗（死疫苗）：免疫原性强，理化灭火，诱导特异性抗体的产生，无法诱导特异性抗体的产生，无法诱导CTLCTL，需接种多次。狂犬病、，需接种多次。狂犬病、伤寒、流感疫苗伤寒、流感疫苗 类毒素：细菌的外毒素经类毒素：细菌的外毒素经0.3%-0.4%0.3%-0.4%甲醛处理，诱导甲醛处理，诱导机体产生抗毒素。白喉、破伤风机体产生抗毒素。白喉、破伤风 人工被动免疫人工被动免疫 抗毒素：用细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的免疫抗毒素：用细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的免疫血清，具有中和外毒素的作用。破伤风抗毒素、白喉抗毒血清，具有中和外毒素的作用。破伤风抗毒素、白喉抗毒素素 人免疫球蛋白制剂：从大量混合血浆或胎盘血中分离人免疫球蛋白制剂：从大量混合血浆或胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓缩剂。甲型肝炎、丙型肝炎、麻疹、制成的免疫球蛋白浓缩剂。甲型肝炎、丙型肝炎、麻疹、脊髓灰质炎等疾病的预防脊髓灰质炎等疾病的预防 细胞因子和单克隆抗体细胞因子和单克隆抗体 佐剂（佐剂（adjuvant)adjuvant)：预先或与抗原同时注入体内，可增强预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质。增强物质。增加局部抗原浓度增加局部抗原浓度刺激单核刺激单核-巨噬细胞系统，增强抗原处理和提呈能力巨噬细胞系统，增强抗原处理和提呈能力刺激淋巴细胞增殖分化刺激淋巴细胞增殖分化常用佐剂：常用佐剂：氢氧化铝氢氧化铝 ISCOMsISCOMs（免疫刺激复合物）（免疫刺激复合物）含含CpGCpG寡核苷酸寡核苷酸 细胞因子细胞因子新型疫苗新型疫苗亚单位疫苗：亚单位疫苗：有效免疫原成分制成的疫苗，如乙型有效免疫原成分制成的疫苗，如乙型 肝炎病毒表面抗原制成的乙肝炎病毒表面抗原制成的乙型肝炎疫苗型肝炎疫苗结合疫苗：结合疫苗：细菌夹膜多糖细菌夹膜多糖+白喉类毒素白喉类毒素 （脑膜（脑膜 炎球菌、肺炎球菌疫苗已获准使炎球菌、肺炎球菌疫苗已获准使用）用）合成肽疫苗：合成肽疫苗：疟疾疫苗、肝癌疫苗处于临床试验阶段疟疾疫苗、肝癌疫苗处于临床试验阶段基因工程疫苗基因工程疫苗 重组抗原疫苗：乙型肝炎疫苗获准使用重组载体疫苗重组抗原疫苗：乙型肝炎疫苗获准使用重组载体疫苗DNADNA疫苗：用编码有效免疫原的基因与表达质粒构建重疫苗：用编码有效免疫原的基因与表达质粒构建重 组体直接免疫机体。组体直接免疫机体。转基因植物疫苗：将编码有效免疫原的基因导入可食转基因植物疫苗：将编码有效免疫原的基因导入可食 用的植物细胞基因组中，使其在植用的植物细胞基因组中，使其在植 物的可食用部分稳定表达，通过摄物的可食用部分稳定表达，通过摄 取食物达到免疫接种的目的。取食物达到免疫接种的目的。我国计划免疫程序我国计划免疫程序疫苗名称疫苗名称第一次第一次第二次第二次第三次第三次加强加强预防传染病预防传染病卡介苗出生肺结核乙肝疫苗出生1月龄6月龄乙型病毒性肝炎脊灰疫苗2月龄3月龄4月龄4周岁脊髓灰质炎百白破疫苗3月龄4月龄5月龄18-24月龄，6周岁百日咳白喉破伤风麻疹疫苗8月龄麻疹麻腮风疫苗18-24月龄风疹流行性腮腺炎乙脑疫苗8月龄2周岁流行性乙型脑炎A群流脑疫苗6-18月龄（1、2次间隔3个月）流行性脑脊膜炎A+C群流脑疫苗3周岁6周岁甲肝疫苗18月龄甲型肝炎以上为儿童免疫规划疫苗，以下为重点人群接种疫苗以上为儿童免疫规划疫苗，以下为重点人群接种疫苗出血热双价纯化疫苗出血热炭疽减毒活疫苗炭疽钩体灭活疫苗钩体病许多疾病无有效疫苗：许多疾病无有效疫苗：病毒：病毒：HIVHIV，疱疹病毒疱疹病毒 细菌：细菌：葡萄球菌，葡萄球菌，A A组链球菌组链球菌 真菌：真菌：假丝酵母假丝酵母 原生动物原生动物：疟疾，利什曼病：疟疾，利什曼病 蠕虫感染蠕虫感染：血吸虫病：血吸虫病疫苗的应用疫苗的应用传染病传染病抗肿瘤抗肿瘤计划生育计划生育防止免疫病理损伤防止免疫病理损伤二、免疫治疗二、免疫治疗（ImmunotherapyImmunotherapy）利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的免疫功能，达到治疗母的所采取的措施。免疫功能，达到治疗母的所采取的措施。免疫抑制免疫抑制、免疫增强免疫增强主动或被动主动或被动特异或非特异特异或非特异（一）、分子治疗（一）、分子治疗分子疫苗：合成肽疫苗、重组载体疫苗和分子疫苗：合成肽疫苗、重组载体疫苗和DNA 疫苗可作疫苗可作为肿瘤和感染性疾病的治疗性疫苗为肿瘤和感染性疾病的治疗性疫苗抗体：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体抗体：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体3.细胞因子：外源性细胞因子治疗、细胞因子拮抗疗法、细胞因子：外源性细胞因子治疗、细胞因子拮抗疗法、微生物抗原疫苗微生物抗原疫苗4.微生物抗原疫苗微生物抗原疫苗 1 1）多克隆抗体）多克隆抗体 在临床应用的多克隆抗体包括：在临床应用的多克隆抗体包括：胎盘球蛋白、丙种球蛋白、破伤风抗毒素、白喉抗毒素、胎盘球蛋白、丙种球蛋白、破伤风抗毒素、白喉抗毒素、抗淋巴细胞抗血清、抗抗淋巴细胞抗血清、抗RhRh抗体、抗抗体、抗SARSSARS病毒抗体等病毒抗体等2 2）鼠源单克隆抗体）鼠源单克隆抗体 在临床应用的鼠源单克隆抗体：在临床应用的鼠源单克隆抗体：抗抗C CD3D3（OKT3OKT3）：）：抗器官移植排斥抗器官移植排斥 抗抗C CD20D20：治疗治疗B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤3 3）基因工程抗体）基因工程抗体 基因工程抗体已经成为治疗性抗体的主流产品。包括：基因工程抗体已经成为治疗性抗体的主流产品。包括：嵌合抗体（嵌合抗体（chimeric Ab)chimeric Ab)人源化抗体（人源化抗体（humanized Abhumanized Ab）人抗体人抗体 抗体药物抗体药物基因工程抗体基因工程抗体 鼠源单克隆抗体治鼠源单克隆抗体治疗存在的主要问题是疗存在的主要问题是H HAMAAMA（Human anti-Human anti-mouse antibodymouse antibody）反反应，导致疗效下降，应，导致疗效下降，副作用增加。副作用增加。抗细胞因子及其受体抗体抗细胞因子及其受体抗体 抗抗TNFTNF 及其受体的抗体治疗类风湿关节炎及其受体的抗体治疗类风湿关节炎 抗抗IL-2IL-2及其受体治疗自身免疫病和抗移植排斥及其受体治疗自身免疫病和抗移植排斥 抗抗VEGFVEGF抗体治疗肿瘤抗体治疗肿瘤 抗抗EGFR2EGFR2、EGFR1 EGFR1抗体治疗肿瘤抗体治疗肿瘤 抗抗CDCD分子抗体分子抗体 抗抗CD20CD20嵌合抗体治疗嵌合抗体治疗B B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 抗抗CD33CD33治疗急性髓性白血病治疗急性髓性白血病 抗抗CD52CD52治疗淋巴瘤治疗淋巴瘤 抗抗CD11aCD11a治疗银屑病治疗银屑病抗体药物的主要问题抗体药物的主要问题临床用量大成本高，价格昂贵生产工艺复杂，硬件设备高投入治疗性免疫靶标的鉴定有很大难度存在临床风险治疗性抗体名称（括号内为商品名）适应症肿肿 瘤瘤抗CD20（Rituxan，Zevalin，Bexxar，Arzerra）非霍奇金淋巴瘤抗HER2/CD340（Herceptin）转移性乳腺癌抗CD33（Mylotarg）急性髓样细胞白血病抗CD52（Campath）B细胞白血病、T细胞白血病和T细胞淋巴瘤抗EGFR（Erbitux，Vectibix）转移性结肠直肠癌和头颈部肿瘤抗RANKL（Prolia/Xgeva）预防已经转移并损害骨质的肿瘤患者的骨骼相关事件 急性移植排斥反应急性移植排斥反应抗CD3（Orthoclone OKT3）肾移植后急性排斥反应抗CD25（Zanapax，Simulect）肾移植后急性排斥反应自身免疫病和过敏性疾病自身免疫病和过敏性疾病抗TNF（Remicade，Humira，Simponi）Crohn病，类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、溃疡性结肠炎、强直性脊椎炎抗IgE（Xolair）持续性哮喘抗CD（Raptiva）斑状牛皮癣抗4整合素（Tysabri）多发性硬化症抗VEGF（Lucentis）年龄相关性黄斑病变抗CD45RO+（Amevive）银屑病及其他自身免疫紊乱疾病抗TNF（Cimzia）类风湿性关节炎抗IL-1（Ilaris）自身炎症性疾病抗IL-12/IL-23（Stelara）成年患者中度至严重的斑块性银屑病人源型抗C5（Soliris）阵发性睡眠性血红蛋白尿症 其其 他他抗gpb/a（ReoPro）预防冠状动脉血管成形术中发生血栓抗呼吸道合胞病毒（Synagis）预防儿童在高危期呼吸道合胞病毒感染抗IgG（OncoScint）检测结直肠腺癌和卵巢上皮细胞癌，诊断乳房癌、肺小细胞癌、胰腺癌、胃癌和食管癌抗PSMA（ProstaScint）评估疑有复发的前列腺患者、用于患者的分期抗CEA（CEA-Scan）检测原发性、结直肠癌转移，乳腺癌淋巴转移抗肌凝蛋白单株（Myoscint）心肌梗塞引起的胸痛定位、心肌梗塞和心肌炎的造影抗SCLC抗体片段-NR-LU-10-Fab（Verluma）诊断常规方法检查经常无效的小细胞肺癌抗CD15（NeutroSpec）用于阑尾炎疑似患者的鉴别诊断美国美国FDAFDA已批准生产和临床使用的单克隆抗体（截至已批准生产和临床使用的单克隆抗体（截至20112011年）年）批准上市的批准上市的重组重组细胞因子药物细胞因子药物 IFN 白血病、肝炎、Kaposi肉瘤 IFN 类风湿关节炎、慢性肉芽肿、生殖器疣 G-CSF 自身骨髓移植、化疗导致的粒细胞减少症、再生障碍性贫血 GM-CSF 自身骨髓移植、化疗导致的血细胞减少症、再生障碍性贫血 Epo 慢性肾衰导致贫血、癌症或癌症化疗导致的贫血、失血后贫血 IL-2 癌症、免疫缺陷、疫苗佐剂 IFN 多发性硬化症 IL-11 放化疗所致血小板减少症 SCF 与G-CSF联合应用与外周血干细胞移植 PDGF 糖尿病导致的皮肤溃疡 EGF 外用药治疗烧伤、溃疡（仅在中国上市）bFGF 外用药治疗烧伤、外周神经炎（仅在中国上市）TNF 局部灌注治疗晚期骨髓瘤（仅在德国上市）TNF突变体 晚期肿瘤（仅在中国上市）Tpo 治疗血小板减少症（仅在中国上市）重组蛋白质药物重组蛋白质药物批准上市的批准上市的重组重组可溶性可溶性受体受体药物药物 可溶性可溶性TNFTNF受体受体-IgIg（EnbrelEnbrel）：）：治疗类风湿关治疗类风湿关节炎（节炎（Amgen),2006Amgen),2006年销售额超过年销售额超过4545亿美元亿美元 可溶性可溶性CD152-Ig CTLA4-IgCD152-Ig CTLA4-Ig）:商品名商品名AbataceptAbatacept，治疗自身免，治疗自身免疫病（疫病（Bristol-Myers Bristol-Myers SquibbSquibb）,2005,2005年年1212月批准上市月批准上市重组蛋白质药物的主要问题重组蛋白质药物的主要问题半衰期短，需要反复给药能够诱导抗体产生基因治疗基因治疗 将正常人体基因通过将正常人体基因通过 in vivo in vivo 或或 ex ex vivovivo的途径导入病人体内，通过体内表的途径导入病人体内，通过体内表达正常基因治疗疾病。达正常基因治疗疾病。Ashanti de Silva,was the first patient to be treated with gene therapy.重症联合免疫缺陷（重症联合免疫缺陷（SCIDSCID）的基因治疗）的基因治疗 腺苷脱氨酶（腺苷脱氨酶（ADAADA）基因治疗）基因治疗(1990)(1990)XSCIDXSCID的的IL-2IL-2受体受体 链基因治疗链基因治疗n性联性联SCIDSCID的发病是由于的发病是由于IL-2RIL-2R 基因缺陷基因缺陷n20002000年法国科学家在年法国科学家在ScienceScience首次报道首次报道2 2例成功例成功基因治疗的结果；至基因治疗的结果；至20022002年法、英、美共治疗年法、英、美共治疗1414例，例，1212例成功。例成功。第一例成功接受第一例成功接受IL-2RIL-2R 基因治疗的男孩基因治疗的男孩Rhys EvansRhys EvansXSCID XSCID 基因治疗原理基因治疗原理基因治疗的主要问题基因治疗的主要问题病毒载体的安全性靶基因选择基因导入效率基因的可调控表达（二）、（二）、免疫细胞治疗免疫细胞治疗细胞疫苗：细胞疫苗：肿瘤细胞疫苗：灭活瘤苗、异构瘤苗。自体或同种肿瘤细肿瘤细胞疫苗：灭活瘤苗、异构瘤苗。自体或同种肿瘤细胞经理化方法处理，抑制其生长保留其免疫原性。胞经理化方法处理，抑制其生长保留其免疫原性。基因修饰的瘤苗：用基因修饰的方法改变肿瘤细胞的遗传基因修饰的瘤苗：用基因修饰的方法改变肿瘤细胞的遗传性状，降低致瘤性，增强免疫原性性状，降低致瘤性，增强免疫原性树突状细胞疫苗：使用肿瘤提取物抗原或肿瘤抗原多肽等树突状细胞疫苗：使用肿瘤提取物抗原或肿瘤抗原多肽等体外刺激树突状细胞，或用携带肿瘤相关抗原基因的病毒体外刺激树突状细胞，或用携带肿瘤相关抗原基因的病毒载体转染树突状细胞，再回输给患者，可有效的激活抗肿载体转染树突状细胞，再回输给患者，可有效的激活抗肿瘤免疫应答瘤免疫应答取自体淋巴细胞经体外激活、增殖后回输患取自体淋巴细胞经体外激活、增殖后回输患者，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫者，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫效应，即过继免疫（效应，即过继免疫（Adoptive immunityAdoptive immunity）CIK CIK（cytokine induced killercytokine induced killer）:外周淋巴细胞外周淋巴细胞经经 PHA+IL-2+IL-1PHA+IL-2+IL-1等多种细胞因子诱导培养等多种细胞因子诱导培养 TIL TIL（tumor infiltrating lymphocytetumor infiltrating lymphocyte）：肿瘤肿瘤中中 T T 细胞经体外细胞经体外 IL-2 IL-2 诱导培养诱导培养过继转移：过继转移：移植所用干细胞来自于移植所用干细胞来自于 HLA HLA 型别相同的供者，型别相同的供者，采集采集CD34+CD34+干细胞干细胞 1.1.骨髓骨髓 2.2.外周血外周血 3.3.脐血脐血造血干细胞移植：造血干细胞移植：免疫细胞治疗的主要问题免疫细胞治疗的主要问题疗效不稳定，不同个体反应不同疗效不稳定，不同个体反应不同只能采取个体化治疗，不能工业生产，质量控制有只能采取个体化治疗，不能工业生产，质量控制有难度难度成本高，价格昂贵成本高，价格昂贵种种 类类举举 例例主主 要要 作作 用用细菌产物细菌产物卡介苗、短小棒状杆菌、胞壁酰二肽、二霉菌酸酯海藻卡介苗、短小棒状杆菌、胞壁酰二肽、二霉菌酸酯海藻糖糖活化巨噬细胞、活化巨噬细胞、NK细胞细胞合成性分子合成性分子吡喃共聚物、马来酐二乙烯醚（吡喃共聚物、马来酐二乙烯醚（MEV）、嘧啶、聚肌）、嘧啶、聚肌胞苷酸胞苷酸诱导产生诱导产生IFN细胞因子细胞因子IFN-、IFN-、IFN-、IL-2活化巨噬细胞、活化巨噬细胞、NK细胞细胞激激 素素胸腺素、胸腺生成素胸腺素、胸腺生成素 增强胸腺功能增强胸腺功能（三）、生物应答调节剂和免疫抑制剂（三）、生物应答调节剂和免疫抑制剂天然动植物药物天然动植物药物免疫增强剂：免疫增强剂：黄芪、茯苓、枸杞等黄芪、茯苓、枸杞等生物应答调节剂：生物应答调节剂：具有促进或调节免疫功能的制剂，通常对免疫功能正常者无影响，而对免疫功能异常，特别是免疫功能低下者有促进或调节作用免疫抑制剂免疫抑制剂化学合成药物 糖皮质激素、环磷酰胺、硫唑嘌呤2.微生物制剂 环孢素A（CsA)、FK506、麦考酚酸酯、雷帕霉素3.来源于动植物的免疫抑制剂 苦参、雷公藤等苦参、雷公藤等 常用于防止移植排斥反应的发生和自身免疫病的治疗
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