HPLC二元泵和四元泵的区别

HPLC 二元泵和四元泵的区别|丄二元高压梯度（配置：双泵+泵后在线混合器）工作方式：双泵并联，可同时有两个流动相，按照预先设定的配比进入，再高压下进行混合，混合配比更准确， 气体的溶解度随压力的增大而增大，不易产生气泡，不用为了转换流动相而反复清洗，提高了工作效率。同时 可以做梯度洗脱，当待测样品成分复杂，用一个固定的流动相配比无法将样品中成分完全分开时，就需要用到 梯度洗脱，在同一个分析过程中由仪器自动改变流动相配比，将样品中前次无法分离的物质进行洗脱，在同一 谱图中得到分开的峰的效果。有助于提高分析准确性，避免遗漏重要物质的检测。丄四元低压梯度（配置：单泵另外一个是辅泵+低压梯度阀+在线脱气机+混合器）工作方式：最多可同时有四个流动相进入流路，按照预先设定的配比通过比例阀常压泵前混合，由于在常压下 两种液体混合时，会降低气体在混合溶液中的溶解度，通常会有气泡产生，所以四元低压梯度系统须配在线脱 气机，以消除气泡影响。可以做梯度洗脱，在仪器上进行设定之后，在同一样品分析工程中，相隔一段时间后， 按照用户设定的配比自行改变流动相配比，将样品中所有组分分离开来，有助于提高分析准确性。二元高压混合和四元低压混合的一个重大区别就是前者讲入输液泵后立即讲行混合而后者是讲泵以后慢慢混 合，有的还要过一混合器，混合不但置后，而且效果明显不如前者。高压梯度现在很多都可以用一个泵来控制 另一个泵，而低压梯度往往需要一个梯度控制系统。四元泵工作獵理示懑图单元泵工作原理冲曲橋二元泵流路结构图宾空韦四兀比依啊二束口第制联二元泵 SL 流路结构图二元泵 SL 包含两个相同的泵，这两个泵集成在一个腔体内。二元梯度由高压混合产生，可选脱气机适用于为获得最大的检测器灵敏度而要求最佳的稳定性（尤其是流速很低时）的应用。1、酸性物质适合做负离子检测，所以流动相偏碱性较合适，促使其解离，碱性物质适合做正离子检测，流动 相中适当的加入酸，促使其形成正离子，流动相中适当加一些醋酸钠（或者醋酸铵），可形成加钠的正离子或者 加铵的正离子。液质分析中推荐使用的流动相和添加剂科卿?使J协尽敝不便反相*乙扇*thUlli Pi 色*凸卡.W乙啟SS.甲（ft愷乙醸*甲鴨K他需沽赳、农面活件鬥，為广时试別*轿押盘的1L2.糖苷类的物质在做FAB和esi （+时，M+Na峰往往比M+H峰要强，此为经验，原因只是推测可能和天然产 物的提取过程有关;盐类化合物如盐酸盐、硫酸盐在质谱中酸的部分一般不会出现;二羧酸盐（esi负离子模式）除 了分子离子峰外，会出现连续掉44的两个峰，为失去羧酸根的离子，这三个峰非常特征，但是会受锥孔电压 的影响，调低电压谱图会更漂亮。3胺类物质做esi质谱时要注意进样量要少，因为很容易离子化，不易冲洗干净，会影响后面样品的测定。 像三乙胺在液质联用时不能用于调节流动相pH值。若不慎引入三乙胺，在正离子检测时总会出现很强的102 峰三乙胺的M+H）.4质谱用水一般用娃哈哈纯净水之类的就很好质谱用甲醇和乙腈，换用了很多品牌，发现Merck的还是稍 微好一些;Finniga用的氮气不一定要用到液氮瓶，用普通的钢瓶气就可以了，可能还省钱些;建议大家买一个好 一点的手电筒和一个放大镜，手电筒用来看源里面，放大镜看你割的毛细管平整。5.质谱的基线其实跟液相的紫外检测器和荧光检测器一样，基线高的原因不外乎内部和外部的原因。1）。你选择的流动相在质谱的响应比较高，比如水相比较多的时候，噪音比较大些;还有如果盐含量比较大 的时候，噪音更大些。2）。检测器的灵敏度越高的时候，噪音应该越高。如果质谱的污染比较严重时，基线肯定比较高。比如离 子阱检测器，用得久了，阱中的离子就会增多，一方面降低了质谱的灵敏度，另一方面增加了基线噪音。3）。质谱的基线很多时候还跟你选择的离子宽度有关。比如你作选择离子扫描的时候，基线就低些。你作 选择反应扫描的时候，离子宽度不要选得太宽，太宽噪音就高些。4）。多级质谱一般做二级或三级质谱，基线噪音就低很多。6质谱维护经验交流：做样前诗佥查氮气，流动相，质谱仪的真空度，毛细管温度1）最好不用直接进样（容易污染离子源） ;2）做联用时最好分流（a可以使用常规柱，b缩短分析时间，c延长质量分析器寿命）；3）最好使用在线切换阀，降前每个样品的前后1-2分钟的流动相切入废液（避免样品中的盐进入质谱，做 Sequence时可以把平衡柱子的流动相切入废液）；4开始联用前，直接运行质谱数分钟，可以先将温度毛细管温度和离子源温度（APCI）加热到预设定值（如 果是APCI源还可以避免将烧掉heater太贵了，最好别烧）；5）待机时将切换阀置于wastq避免刚开液相时将流动相打入离子源；6）关机前毛细管的温度先降下来，稳定一段时间后再关闭电源，避免风扇停止转动后毛细管外围的热量向 里扩散，容易引起内部线路及电子元器件老化加速;7）每天清理毛细管外部，擦洗干净，每次停机时注意清洗Skimmer，用无尘擦拭纸，kimberly那种；8 ）如果用的是钢瓶而且天天做样的话，将两个钢瓶并联，当然，一月不做一次的话就算了;9）做定量时注意离子源喷针的具体位置，否则标准曲线就不能用了;10）不要不经过柱子分离进行定量分析，结果不可靠（竞争性抑制目标分子离子化）;11 ）如果是负离子检测的话，可以相流动相中加入少量异丙醇;12）不要使用不挥发性盐，如果使用挥发性盐，但浓度不要超过20mmol/l;13）需要使用酸的情况下可以用甲酸，乙酸，三氟乙酸可以用，但能用甲酸或乙酸时就别用TFA;7.理论上液质联用禁止使用任何不挥发性的缓冲盐，如果需要尽量使用诸如乙酸氨等挥发性盐，浓度不要 超过 20mmol/l.对于不挥发性的缓冲盐，如果你的仪器有吹扫捕集的话也可使用，但一定要小心。万不得已也不要用，首 先有不挥发盐是得不到好的离子流的，其次盐留在质谱中很难除掉，除非停机清洗，不然一直会影响其他样品 的分析。可以找质谱友好的条件来做液质联机，例如色谱条件为20mM磷酸盐的水/乙腈流动相，做液质联机的时候 就可以用醋酸铵代替，然后用醋酸调节pH值与磷酸盐的一致即可。除了难挥发的盐，三乙胺、表面活性剂、还有高浓厦0.5%）的 TFA，都对质谱不好，液质联用的流动相中 应该避免。经验总结二：（质量定量分析经验）1、要用目标离子的碎片定量，特征性强，排除干扰;2、在定量分析的方法设置上，尽可能提高扫描速率，提高准确率和重复性可以通过a减小扫描质量数的 范围来提高目标峰的扫描次数，或将一个样品全部分析时间断分成n个segments对目标离子单独设置扫描 模式）;3、一定要通过色谱柱分离后定量分析，避免竞争性离子的存在影响目标离子的离子化效率;如果目标分子 未与竞争性分子完全分开，则在离子化过程中导致目标分子的离子化效率降低，导致样品分子的定量结果偏低， 当然标准浓度的样品也要用相同的方法分析。4、如果样品都是纯品的话可以不经过色谱柱直接进样分析，包括做标准曲线的样品（虽然不建议直接进样 分析）。5、如果用的离子源的喷针位置是可移的话，一定要记住做标准曲线时其位置，否则其位置移动后在相同 的条件下进入质谱的离子流量会发生改变，标准曲线就不能使用了!对于调用的质谱方法不要改动 shealthgas and aux gaS的流速，否则会影响进入质谱的样品量。6、所建立的标准曲线一个月后如果想重复使用，则用QC样品检验一下该标准曲线！7、对于已经建立好的分析方法在扫描范围、流动相的组成、梯度或流速等方面不要作任何改动，否则， 标准曲线要重作。扫描范围改变目标峰的扫描次数、流动相组成改变离子化效率，流速改变色谱峰的保留时间 和峰宽。8、离子阱的强项在于多级-定性，四级杆的强项在于定量;9、对于热稳定性不好的样品可以通过提高气速，降低毛细管温度的方法保证定量分析的重复性;一旦方法 固定后不要轻易改动。经验总结三：解析图谱 解析未知样的质谱图，大致按以下程序进行。（一）解析分子离子区（1）标出各峰的质荷比数，尤其注意高质荷比区的峰。（2）识别分子离子峰。首先在高质荷比区假定分子离子峰，判断该假定分子离子峰与相邻碎片离子峰关系 是否合理，然后判断其是否符合氮律。若二者均相符，可认为是分子离子峰。分析同位素峰簇的相对强度比及峰与峰间的Dm值，判断化合物是否含有C1、Br、S、Si等元素及F、 P、I等无同位素的元素。（4）推导分子式，计算不饱和度。由高分辨质谱仪测得的精确分子量或由同位素峰簇的相对强度计算分子 式。若二者均难以实现时，则由分子离子峰丢失的碎片及主要碎片离子推导，或与其它方法配合。（5）由分子离子峰的相对强度了解分子结构的信息。分子离子峰的相对强度由分子的结构所决定，结构稳 定性大，相对强度就大。对于分子量约200的化合物，若分子离子峰为基峰或强蜂，谱图中碎片离子较少、表 明该化合物是高稳定性分子，可能为芳烃或稠环化合物。例如：萘分子离子峰m/z 128为基峰，蒽醌分子离子峰m/z 208也是基峰。 分子离子峰弱或不出现，化合物可能为多支链烃类、醇类、酸类等。（二）、解析碎片离子 （1）由特征离子峰及丢失的中性碎片了解可能的结构信息。若质谱图中出现系列CnH2n+1峰，则化合物可能含长链烷基。若出现或部分出现m/z 77, 66, 65, 51, 40, 39等弱的碎片离子蜂，表明化合物含有苯基。若m/z 91或105为基峰或强峰，表明化合物含有苄基或苯 甲酰基。若质谱图中基峰或强峰出现在质荷比的中部,而其它碎片离子峰少,则化合物可能由两部分结构较稳 定,其间由容易断裂的弱键相连。(2) 综合分析以上得到的全部信息,结合分子式及不饱和度,提出化合物的可能结构。(3) 分析所推导的可能结构的裂解机理,看其是否与质谱图相符,确定其结构,并进一步解释质谱,或与 标准谱图比较，或与其它谱(1H NMR、13C NMR、IR)配合，确证结构。1. 分子量是偶数,主体碎片离子也是偶数,那是否含有氮,含奇数还是偶数？ 不含氮的化合物,分子量应为偶数。 一种情况：分子量偶数,不含氮,碎片偶数。可能是重排。2. 分子量是偶数,主体碎片离子是奇数,那是否含有氮,含奇数还是偶数？ 一种情况：分子量是偶数,主要碎片离子是奇数,不含氮。3. 分子量是奇数,主体碎片离子也是偶数,那是否含有氮,含奇数还是偶数？含氮，含奇数氮。(含奇数N的化合物，其分子量为奇数。含奇数N的奇电子离子的质核比为奇数)4. 分子量为奇数,主体碎片离子是奇数,那是否含有氮,含奇数还是偶数？ 一种情况：含奇数氮。个人观点,共参考。