ELISA试剂盒操作方法

人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒操作方法供应商：上海樊克生物有限公司产品规格：96T/48T。保存条件：2-8 C低温保存保质期：6个月，所有试剂盒均提供最新批次。试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。【人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样 品的OD值由标准曲线查 出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度 与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样 品的OD值代入方程式，计 算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒组成：封板膜：2片（48） /2片（96）说明书：1份密封袋：1个标准品：2700ng/L0.5ml X 1 瓶0.5ml X1 瓶2-8 C 保存酶标包被板：1X481X962-8 C保存样品稀释液：3ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存显色剂A液：3ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存显色剂B液：3ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8 C保存终止液:3ml X 1 瓶 6ml X 1 瓶2-8 C保存浓缩洗涤液：（20mlX20倍）X1瓶（20mlX30倍）X1瓶2-8C保存【人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒】实验原理：本 试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人铁蛋白（FE）水平。用纯化的人铁蛋 白（FE）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入铁蛋 白（FE），再与HRP标记的铁蛋白（FE）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体 复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化 下转化成蓝 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的铁蛋白（FE）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准 曲线计算样品中人铁蛋白（FE）浓度。目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中铁蛋白（FE）的含量。服务承诺：供货期：款到发货。工作时间内免费的技术咨询和指导。请来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性（免费代测）。保存条件及有效期：试剂盒保存：2-8C |有效期：6个月【人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒】样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。 仔细收集上清，保存 过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分 钟后，离心20分钟左右 （2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如 有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细 收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS （PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔 细收集上 清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组 织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅 速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分 钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。 若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。Elisa试剂盒标本要求：1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若 不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融2. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。试剂盒操作步骤：1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管 中进行稀释。12g/L 5号标准品150l的原倍标准品加入150l标准品稀 释液,6g/L 4号标准品150l的5号标准品加入150l标准品稀释液,3g/L 3号标准品150l的4号标准品加入150l标准品稀释液，1.5g/L 2号标准品150l的3号标准品加入150l标准品稀释液,0.75g/L 1号 标准品150l的2号标准品加入150l标准品稀释液。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）， 标准孔，待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l,待测样品孔中先加 样品稀释液40l,然后再加待测样品10l （样品最终稀释度为5倍）。加样 将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去, 如此重复5次,拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50p 1,再加入显色剂B50p l,轻轻震荡混匀，37C 避光显色10分钟.10. 终止：每孔加终止液501,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11测定：以空白零,450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在 加终止液后15分钟以内进行。操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第 二孔中分别加标准品1001，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液501,混匀； 然后从第一孔、第二孔中各取1001分别加到 第三孔和第四孔，再在第三、第 四孔分别加标准品稀释液501，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各 取501 弃掉，再各取501分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准 品稀释液50u1 ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50pl分别加到第七、第 八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50pl，混匀后从第七、第八 孔中分别取501加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别 加标准品稀释液 50pl，混匀后从第九第十孔中各取50pl弃掉。（稀释后各孔加样量都为501， 浓度 分别为 1800ng/L， 1200ng/L ， 600ng/L， 300ng/L，150ng/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作 相同）、待测样品孔。在 酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液401，然 后再加待测样品101 （样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底 部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。配液：将30 （48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 （48T的20倍） 倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50pl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀, 37C避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50pl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测 定应在加终止液后15分钟以内进行。【人血小板碱性蛋白，PBP/CXCL7ELISA试剂盒】注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包 被板开封后如未用完，板条 应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影 响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一 次加样时间最好控制在5分 钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过 高（样本OD值大于标准品 孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍 数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数 （XnX5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。试剂盒性能：1. 样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2. 批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：0.2IU/L - 6IU/L注：本产品只用于科研实验，不用于临床诊断。