增加骨密度保健食品

3、增加骨密度保健食品评价方法、增加骨密度保健食品评价方法1、概述、概述2 2、常见的增加骨密度保健食品原料及产品、常见的增加骨密度保健食品原料及产品1 1、概述、概述1.11.1、骨的组成、骨的组成骨组织的结构：骨膜、骨质、骨髓骨组织的结构：骨膜、骨质、骨髓骨组织的细胞：骨细胞、成骨细胞、破骨细胞骨组织的细胞：骨细胞、成骨细胞、破骨细胞遍布于骨基质遍布于骨基质骨溶解功能骨溶解功能骨重建功能骨重建功能调节矿物平衡调节矿物平衡 主要功能是产生胶原纤维、粘多糖和主要功能是产生胶原纤维、粘多糖和糖蛋白等，在细胞外形成骨的有机质，称糖蛋白等，在细胞外形成骨的有机质，称为类骨质。随着类骨质增多、钙化，成骨为类骨质。随着类骨质增多、钙化，成骨细胞转化为骨细胞。细胞转化为骨细胞。主要功能是吸收骨，一个破骨细主要功能是吸收骨，一个破骨细胞可以吸收胞可以吸收100100个成骨细胞所形成的个成骨细胞所形成的骨质。骨质。骨组织的成份：无机物、有机物骨组织的成份：无机物、有机物通常称为骨盐，通常称为骨盐，其中其中95%95%是固是固体钙和磷体钙和磷。9090为为I I型胶原蛋白型胶原蛋白其余为无定形的均质其余为无定形的均质状物质，如：糖蛋白、状物质，如：糖蛋白、唾液蛋白及少量脂质唾液蛋白及少量脂质等等解释解释1.21.2、骨的代谢、骨的代谢 正常成熟骨的代谢主要以正常成熟骨的代谢主要以骨重建骨重建形式进行。形式进行。在调节激素和局部细胞因子等的协调作用下，骨在调节激素和局部细胞因子等的协调作用下，骨组织不断组织不断吸收旧骨，生长新骨吸收旧骨，生长新骨。如此周而复始地。如此周而复始地循环进行，形成了体内骨转换的相对稳定状态。循环进行，形成了体内骨转换的相对稳定状态。钙的生理功能和代谢钙的生理功能和代谢 钙是构成骨骼的主要无机成分，以羟基磷钙是构成骨骼的主要无机成分，以羟基磷灰石结晶体灰石结晶体CaCa1010（POPO4 4)6 6(OH)(OH)2 2的形式存在的，约的形式存在的，约占人体体重占人体体重1%1%2%2%，其中，其中99%99%的钙存在于骨骼的钙存在于骨骼中，它是保持骨骼坚硬的基本条件。中，它是保持骨骼坚硬的基本条件。正常人血正常人血钙和骨钙之间维持着一种动态平衡，这种平衡钙和骨钙之间维持着一种动态平衡，这种平衡调节着骨的代谢。调节着骨的代谢。钙在人体中由肠道吸收和摄入，人体的大部钙在人体中由肠道吸收和摄入，人体的大部分钙存储在骨骼，钙的代谢途径，是血液中钙分钙存储在骨骼，钙的代谢途径，是血液中钙和骨骼中的钙保持动态平衡。和骨骼中的钙保持动态平衡。这个动态平衡是由体内激素调节完成（主这个动态平衡是由体内激素调节完成（主要有甲状旁腺激素和降钙素，维生素要有甲状旁腺激素和降钙素，维生素D D等）。等）。1.31.3、骨密度、骨密度 骨骼中的矿物元素含量，通常骨骼中的矿物元素含量，通常称之为骨密度。它是骨质量的一个称之为骨密度。它是骨质量的一个重要指标，反应骨质疏松的程度，重要指标，反应骨质疏松的程度，也是预测骨折危险性的重要指标和也是预测骨折危险性的重要指标和依据。依据。骨密度异常的类型骨密度异常的类型骨骨密密度度异异常常骨质减少骨质减少骨质疏松骨质疏松轻轻到到重重原发性原发性继发性继发性绝经后骨质疏松症（绝经后骨质疏松症（型）型）老年性骨质疏松症（老年性骨质疏松症（型）型）特发性骨质疏松（包括青少年型）特发性骨质疏松（包括青少年型）1.41.4、骨质疏松症的概念、骨质疏松症的概念 骨质疏松症是以骨组织骨质疏松症是以骨组织显微结构显微结构受损，受损，骨矿成分骨矿成分和骨基质和骨基质等比例不断减少，骨质变薄，骨脆性增加和等比例不断减少，骨质变薄，骨脆性增加和骨折危险性升高的一种全身骨代谢障碍的疾病。骨折危险性升高的一种全身骨代谢障碍的疾病。1.51.5、骨质疏松症的病因骨质疏松症的病因 凡可使凡可使骨的净吸收增加骨的净吸收增加，促进骨微结构紊乱的因素都促进骨微结构紊乱的因素都会促进骨质疏松症的发生会促进骨质疏松症的发生。（一）内分泌因素（一）内分泌因素 这是造成骨质疏松症的重要病因之一。与骨这是造成骨质疏松症的重要病因之一。与骨质疏松症有着直接关联的激素主要有质疏松症有着直接关联的激素主要有4 4种，即雌种，即雌激素、甲状旁腺激素、降钙素、活性维生素激素、甲状旁腺激素、降钙素、活性维生素D D1 1，25-25-（OHOH）2 2D D3 3。(1)(1)雌激素雌激素:已知绝经后妇女卵巢功能衰退，已知绝经后妇女卵巢功能衰退，雌激素水平显著下降，其骨矿物质加速丢失。雌激素水平显著下降，其骨矿物质加速丢失。作用机理：直接抑制破骨细胞。雌激素缺乏，作用机理：直接抑制破骨细胞。雌激素缺乏，破骨细胞活跃，骨骼的吸收（被破坏）作用加强破骨细胞活跃，骨骼的吸收（被破坏）作用加强;成骨细胞的活性下降（因已证实成骨细胞上有雌成骨细胞的活性下降（因已证实成骨细胞上有雌激素的受体），骨形成量减少。激素的受体），骨形成量减少。（2 2）甲状旁腺激素（）甲状旁腺激素（PTH PTH）PTH PTH是由甲状旁腺主细胞分泌的，由是由甲状旁腺主细胞分泌的，由8484个氨基个氨基酸残基组成，它是调节血钙水平的主要激素。一般酸残基组成，它是调节血钙水平的主要激素。一般认为，认为，PTH PTH 通过其分泌的骨吸收因子通过其分泌的骨吸收因子(如如IL-6IL-6、IL-IL-1111等等)促进破骨细胞的作用。使破骨细胞活跃，骨促进破骨细胞的作用。使破骨细胞活跃，骨质溶解，骨钙释放入血。增加血钙。质溶解，骨钙释放入血。增加血钙。骨质钙骨质钙血钙血钙促进破骨促进破骨细胞作用细胞作用 (3)(3)降钙素（降钙素（CTCT）它由甲状腺滤泡旁细胞分泌，是一种由它由甲状腺滤泡旁细胞分泌，是一种由32 32 个个氨基酸残基组成的肽类激素，也是一种重要的钙调氨基酸残基组成的肽类激素，也是一种重要的钙调节激素。降钙素主要是通过抑制骨质的吸收与促进节激素。降钙素主要是通过抑制骨质的吸收与促进骨中钙盐的沉积使血钙水平降低。这与骨中钙盐的沉积使血钙水平降低。这与PTH PTH 的作用的作用正相反，二者形成一对拮抗激素，共同调节血钙水正相反，二者形成一对拮抗激素，共同调节血钙水平。并抑制胃肠道和肾小管吸收钙离子，使血钙浓平。并抑制胃肠道和肾小管吸收钙离子，使血钙浓度降低。度降低。血钙血钙骨质钙骨质钙抑制破骨抑制破骨细胞作用细胞作用 (4)(4)活性维生素活性维生素D D 促进钙结合蛋白生成，增加肠钙吸收。活性维促进钙结合蛋白生成，增加肠钙吸收。活性维生素生素D D缺乏缺乏(可伴有血清钙下降可伴有血清钙下降)导致骨盐动员加速，导致骨盐动员加速，骨吸收增强。骨吸收增强。（二）生活习惯（二）生活习惯 1 1）长期钙质摄入量）长期钙质摄入量不足，导致体内形成负钙不足，导致体内形成负钙平衡；平衡；2 2）酗酒和抽烟，食）酗酒和抽烟，食用草酸含量高的食物，大用草酸含量高的食物，大量饮用含咖啡因的饮料，量饮用含咖啡因的饮料，摄取过量的蛋白质，高盐摄取过量的蛋白质，高盐饮食，维生素饮食，维生素D D摄人不足摄人不足和光照减少等均为骨质疏和光照减少等均为骨质疏松症的易发因素；松症的易发因素；3 3）长期缺少运动，足够）长期缺少运动，足够的体力活动有助于提高的体力活动有助于提高PBMPBM，成骨细胞和骨细胞具有接受应成骨细胞和骨细胞具有接受应力、负重等力学机械刺激的接力、负重等力学机械刺激的接受体，故成年后的体力活动是受体，故成年后的体力活动是刺激骨形成的一种基本方式，刺激骨形成的一种基本方式，而活动过少者易于发生骨质疏而活动过少者易于发生骨质疏松症；松症；4 4）长期卧床和失重）长期卧床和失重(如太空宇航员如太空宇航员)也常导也常导致骨质疏松。致骨质疏松。（三）遗传因素（三）遗传因素 骨质疏松性骨折决定于骨峰值和骨量丢失速率骨质疏松性骨折决定于骨峰值和骨量丢失速率两个主要因素。一般认为两个主要因素。一般认为峰值骨密度受遗传和环境峰值骨密度受遗传和环境因素的影响分别占因素的影响分别占75%75%和和25%25%。骨质疏松症可能是多。骨质疏松症可能是多基因的疾病。现在发现的并认为可能的基因有以下基因的疾病。现在发现的并认为可能的基因有以下几种：几种：1 1）维生素）维生素D D受体基因；受体基因；2 2）骨钙素的维生素）骨钙素的维生素D D启动区基因；启动区基因；3 3）型胶原基因；型胶原基因；4 4）雌激素受体基因。）雌激素受体基因。（四）其它（四）其它 如如药物因素药物因素：一些药物及放化疗法也会造成：一些药物及放化疗法也会造成骨质疏松症。骨质疏松症。年龄增加年龄增加：骨质流失加剧，身体对：骨质流失加剧，身体对钙质吸收能力也相应减弱。钙质吸收能力也相应减弱。免疫因素免疫因素：类风湿性：类风湿性关节炎所致的骨质疏松症是免疫反应所引起的典关节炎所致的骨质疏松症是免疫反应所引起的典型病例。型病例。性别因素性别因素：男性骨：男性骨 矿物质含量明显高于女性等。矿物质含量明显高于女性等。驼背驼背1.61.6、骨质疏松症的危害、骨质疏松症的危害严重危害身体健康严重危害身体健康腰背酸疼腰背酸疼身高缩短身高缩短骨折骨折 呼吸系统障碍呼吸系统障碍 骨质疏松症已成骨质疏松症已成为我国一个严重的公为我国一个严重的公共健康问题共健康问题2 2、常见的增加骨密度保健食品、常见的增加骨密度保健食品原料及产品原料及产品 2.12.1原料原料 （1 1）钙：钙是身体中矿物化组织）钙：钙是身体中矿物化组织骨骼骨骼和牙齿和牙齿的必需矿物质的必需矿物质，是维系骨密度的基础营养，也是影，是维系骨密度的基础营养，也是影响骨密度的一个重要膳食因素。当钙摄入或钙吸收响骨密度的一个重要膳食因素。当钙摄入或钙吸收不足时就会诱发甲状旁腺功能亢进，继而导致来自不足时就会诱发甲状旁腺功能亢进，继而导致来自骨骼的骨动员，释放更多的钙以维持血清的钙稳定，骨骼的骨动员，释放更多的钙以维持血清的钙稳定，骨丢失因此而发生。因此，钙在预防和治疗骨质疏骨丢失因此而发生。因此，钙在预防和治疗骨质疏松症中的地位是非常重要而无法替代的。松症中的地位是非常重要而无法替代的。奶类奶类食品食品海产品海产品豆制品豆制品蔬菜类蔬菜类干果类干果类 （2 2）维生素）维生素D D：人体维生素：人体维生素D D的水平与的水平与骨密度密切相关。骨密度密切相关。维生素维生素D D是钙吸收的主要是钙吸收的主要调节因素，可以帮助人体吸收钙，有效地提调节因素，可以帮助人体吸收钙，有效地提高人体骨密度。高人体骨密度。适当补充维生素适当补充维生素D D能够延缓能够延缓骨质丢失，降低骨折发生率。骨质丢失，降低骨折发生率。肝脏肝脏蛋黄蛋黄奶类食品奶类食品香菇香菇 （3 3）大豆异黄酮、大豆皂苷）大豆异黄酮、大豆皂苷 大豆异黄酮、大豆皂苷等物质大豆异黄酮、大豆皂苷等物质与人体分泌的与人体分泌的雌激素分子结构非常相似雌激素分子结构非常相似，能够与破骨细胞上的，能够与破骨细胞上的雌激素受体相结合，减少骨质流失，同时避免了雌激素受体相结合，减少骨质流失，同时避免了补充雌激素可能诱发癌症的风险；此外，大豆异补充雌激素可能诱发癌症的风险；此外，大豆异黄酮能增强机体对钙的利用，增加骨密度。黄酮能增强机体对钙的利用，增加骨密度。（4 4）磷及磷酸盐）磷及磷酸盐 磷是人体必需的元素，磷是人体必需的元素，磷与钙结合成骨矿物质，钙磷与钙结合成骨矿物质，钙 与磷的比值为与磷的比值为2121，合理的钙磷比例有，合理的钙磷比例有利于磷的吸收。磷吸收不良引起的磷缺利于磷的吸收。磷吸收不良引起的磷缺乏可导致骨量减少，最后发展为骨质疏乏可导致骨量减少，最后发展为骨质疏松症；但同时需要注意的是，过量的磷松症；但同时需要注意的是，过量的磷会影响钙磷能被吸收的有效性，从而干会影响钙磷能被吸收的有效性，从而干扰钙的营养。扰钙的营养。在一般食物中，磷的含量往往比钙多，如肉、在一般食物中，磷的含量往往比钙多，如肉、禽、鱼类中磷的含量比钙多禽、鱼类中磷的含量比钙多121220 20 倍，而蛋、谷倍，而蛋、谷类、硬果类、干豆类中磷的含量比钙多类、硬果类、干豆类中磷的含量比钙多1 1倍，大米倍，大米中磷比钙多中磷比钙多6 618 18 倍。所以，以谷类膳食为主的倍。所以，以谷类膳食为主的人，往往磷的摄入多于钙。注意钙、磷的合适比人，往往磷的摄入多于钙。注意钙、磷的合适比值，以使钙、磷很好地被吸收并参与骨的形成。值，以使钙、磷很好地被吸收并参与骨的形成。2.2 2.2 市场上流通的产品市场上流通的产品 就目前市场产品品种来看，增加骨密度的就目前市场产品品种来看，增加骨密度的保健食品大体分为两类：一类是含钙的、通过保健食品大体分为两类：一类是含钙的、通过直直接补充钙接补充钙质而达到增加骨密度目的的保健食品；质而达到增加骨密度目的的保健食品；另一类是不含钙或者不以补钙为目的，而是通过另一类是不含钙或者不以补钙为目的，而是通过调整内分泌而促进钙的吸收调整内分泌而促进钙的吸收从而达到增加骨密度从而达到增加骨密度这一目的的保健食品。这一目的的保健食品。（1 1）欣乐佳牌）欣乐佳牌 氨糖骨胶原软骨素片氨糖骨胶原软骨素片 标志性成分：碳酸钙、标志性成分：碳酸钙、D-D-氨基葡萄糖盐酸盐、硫氨基葡萄糖盐酸盐、硫酸软骨素片。经动物功能酸软骨素片。经动物功能试验证明，具有增加骨密试验证明，具有增加骨密度的保健功能。度的保健功能。保健功能：增加骨密度保健功能：增加骨密度 适宜人群：中老年人适宜人群：中老年人（2 2）大豆异黄酮维）大豆异黄酮维E E软胶囊软胶囊 产品类别：产品类别：保健食品保健食品 批准文号：批准文号：国食健字国食健字 本品是以大豆异黄酮本品是以大豆异黄酮粉、维生素粉、维生素E E等为主要原等为主要原料制成的保健食品，经动料制成的保健食品，经动物功能试验证明，具有增物功能试验证明，具有增加骨密度的保健功能加骨密度的保健功能。（3 3）安利纽崔莱钙镁片）安利纽崔莱钙镁片 产品类型：保健食品产品类型：保健食品成分：碳酸钙、氧化镁、成分：碳酸钙、氧化镁、紫花苜蓿浓缩物、柠紫花苜蓿浓缩物、柠檬酸锌檬酸锌 、柠檬酸锰、柠檬酸锰 、柠檬酸铜。柠檬酸铜。适宜人群：需补充钙质适宜人群：需补充钙质人群。人群。3 3、增加骨密度保健食品评价方法、增加骨密度保健食品评价方法 我国目前执行的保健食品管理办法将我国目前执行的保健食品管理办法将“改善骨质疏松改善骨质疏松”列入列入2121项保健食品功能。由于项保健食品功能。由于保健食品管理办法规定改善骨质疏松需要进保健食品管理办法规定改善骨质疏松需要进行人体实验，检验、申报耗时长、费用高，所以行人体实验，检验、申报耗时长、费用高，所以此项功能少有企业申报。此项功能少有企业申报。新颁布的保健食品新颁布的保健食品2727种种功能取消了功能取消了“改善骨质疏松改善骨质疏松”，取而代之的是，取而代之的是“增加骨密度增加骨密度”功能。功能。动物试验动物试验 分为分为方案一方案一（补钙为主的受试物）和（补钙为主的受试物）和方案二方案二（骨代谢有关的其它功效成份，如以（骨代谢有关的其它功效成份，如以内分泌调节等作用为主的不含钙或不以补钙内分泌调节等作用为主的不含钙或不以补钙为主的受试物）两种。方案二仅适用于每日为主的受试物）两种。方案二仅适用于每日钙摄入量在钙摄入量在100mg100mg以下以下的受试物，其它受试物的受试物，其它受试物均采用方案一。均采用方案一。1 1）试验项目：）试验项目：a)a)体重体重 b)b)骨干重骨干重 c)c)骨钙含量骨钙含量 d)d)骨密度骨密度 e)e)骨组织病理形态骨组织病理形态 2 2）试验原则）试验原则 ：a)a)根据受试样品作用原理的不同，方案一和方根据受试样品作用原理的不同，方案一和方案二任选其一进行动物试验。案二任选其一进行动物试验。b)b)所列指标均为必做项目。所列指标均为必做项目。c)c)样品使用未批准用于食品的含钙化合物，必样品使用未批准用于食品的含钙化合物，必须进行须进行钙吸收代谢试验钙吸收代谢试验；样品使用属营养强化剂；样品使用属营养强化剂范围内的钙源及来自普通食品的钙源（如可食动范围内的钙源及来自普通食品的钙源（如可食动物的骨、奶等），可以不进行钙吸收代谢试验。物的骨、奶等），可以不进行钙吸收代谢试验。方案一方案一 1.1 1.1 实验原理实验原理 1.2 1.2 仪器和试剂仪器和试剂 1.3 1.3 实验方法实验方法 1.4 1.4 观察测量指标观察测量指标 1.5 1.5 数据处理数据处理 1.6 1.6 结果判断原则结果判断原则：1.1 1.1 实验原理实验原理 动物若摄入钙量不足会影响机体和骨骼动物若摄入钙量不足会影响机体和骨骼的生长发育。生长期大鼠在摄食低钙饲料的的生长发育。生长期大鼠在摄食低钙饲料的基础上分别补充碳酸钙（对照组）或受试含基础上分别补充碳酸钙（对照组）或受试含钙产品（实验组），比较两者在促进机体及钙产品（实验组），比较两者在促进机体及骨骼的生长发育、增加骨矿物质含量和增加骨骼的生长发育、增加骨矿物质含量和增加骨密度上的差异，从而对受试物骨密度上的差异，从而对受试物“增加骨密增加骨密度的功能度的功能”进行评价。进行评价。1.2 1.2 仪器和试剂仪器和试剂 原子吸收分光光度计、骨密度仪（双能原子吸收分光光度计、骨密度仪（双能X X线骨骨密度仪或固体密度仪）、精准卡尺、动线骨骨密度仪或固体密度仪）、精准卡尺、动物解剖器械、物解剖器械、105105烘箱、钙含量测定所需试烘箱、钙含量测定所需试剂（硝酸、高氯酸、氧化镧等）剂（硝酸、高氯酸、氧化镧等）双能双能X线骨线骨密度仪密度仪 1.3 1.3 实验方法实验方法 实验动物：出生实验动物：出生4 4周左右的断乳周左右的断乳SDSD大鼠，体重大鼠，体重约约60-8060-80克，同一性别，每组至少克，同一性别，每组至少1010只。只。基础饲料基础饲料：用此基础饲料配制低钙对照组（钙用此基础饲料配制低钙对照组（钙含量含量150mg/100g）。）。动物分组及剂量设置：实验设三个剂量组，以动物分组及剂量设置：实验设三个剂量组，以人体推荐剂量的人体推荐剂量的1010倍为其中的一个剂量组，另设两个倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组；同时设一个低钙对照组（剂量组；同时设一个低钙对照组（150mg/100g150mg/100g饲料）饲料）和与相应剂量受试物钙水平相同的碳酸钙对照组（如和与相应剂量受试物钙水平相同的碳酸钙对照组（如仅设一个碳酸钙对照组，推荐设立与高剂量钙水平相仅设一个碳酸钙对照组，推荐设立与高剂量钙水平相 同的碳酸钙对照组）。用低钙对照组饲料配制受同的碳酸钙对照组）。用低钙对照组饲料配制受试样品各剂量组和碳酸钙对照组。试样品各剂量组和碳酸钙对照组。受试物给予途径及时间：受试物给予途径及时间：经口灌胃给予受试物，低钙对照组灌胃给予经口灌胃给予受试物，低钙对照组灌胃给予配样溶剂（去离子水）。受试样品给予时间配样溶剂（去离子水）。受试样品给予时间4 4周周。实验步骤：实验步骤：出生出生4 4周的断乳大鼠经适应周的断乳大鼠经适应3 35 5天后，禁食天后，禁食1616小时，称体重，按体重随机分组，分笼饲养。并小时，称体重，按体重随机分组，分笼饲养。并自由饮水（去离子水，以避免从饮水中获得钙）。自由饮水（去离子水，以避免从饮水中获得钙）。1.4 1.4 观察测量指标观察测量指标 生长发育指标：试验初，禁食生长发育指标：试验初，禁食1616小时后，小时后，测定体重，量身长。以后，每周测量体重、测定体重，量身长。以后，每周测量体重、身身长长一次，记录一周摄食量，计算食物利用率；一次，记录一周摄食量，计算食物利用率；实验末，（处死动物，剥离出双侧股骨）取其实验末，（处死动物，剥离出双侧股骨）取其中双侧股骨，于中双侧股骨，于105105烤箱中烤至恒重，称量烤箱中烤至恒重，称量骨干重。骨干重。骨密度测定：骨密度测定：单光子骨密度仪法、单光子骨密度仪法、双能双能X X线骨密度仪法、线骨密度仪法、固体密度仪测定法固体密度仪测定法 （新方法简单，易操作，不需要大型仪器）（新方法简单，易操作，不需要大型仪器）骨钙含量测定：骨钙含量测定：用原子吸收法或用原子吸收法或化学法对恒重的左侧股骨进行消化测定。化学法对恒重的左侧股骨进行消化测定。骨组织病理形态学检查骨组织病理形态学检查 取股骨或肱骨，经脱钙切片制片、染色后，镜取股骨或肱骨，经脱钙切片制片、染色后，镜下观察。下观察。HEHE常规染色常规染色观察骨结构完整性：观察骨结构完整性：观察指标：骨板及骨小梁（数量减少观察指标：骨板及骨小梁（数量减少/变薄变变薄变细细/间隙增宽间隙增宽/疏松断裂），破骨细胞（增多疏松断裂），破骨细胞（增多/减减少），成骨细胞（增多少），成骨细胞（增多/减少），及其他改变。减少），及其他改变。茜素红染色茜素红染色观察钙沉积情况观察钙沉积情况 钙质沉积呈橘红色，其它呈复染色（淡绿色）。钙质沉积呈橘红色，其它呈复染色（淡绿色）。按评分标准打分。按评分标准打分。1.6 1.6 数据处理数据处理 实验数据采用方差分析。实验数据采用方差分析。1.7 1.7 结果判断原则：结果判断原则：a)a)生长发育指标（体重、身长、股骨干重）中生长发育指标（体重、身长、股骨干重）中至少一项显著至少一项显著高于低钙对照组高于低钙对照组；b)b)股骨骨钙含量或股骨骨钙含量或骨密度显著骨密度显著高于低钙对照组高于低钙对照组，且病理学上（骨组织学，且病理学上（骨组织学结构或钙沉积）两方面结果中的任一方面结构或钙沉积）两方面结果中的任一方面优于低钙对优于低钙对照组照组；c)c)进行钙吸收试验时，钙吸收率显著进行钙吸收试验时，钙吸收率显著高于低高于低钙对照组钙对照组，且高剂量组不低于相应钙含量的碳酸钙对，且高剂量组不低于相应钙含量的碳酸钙对照组。照组。例：润欣牌骨乐胶囊增加骨例：润欣牌骨乐胶囊增加骨密度的动物实验研究密度的动物实验研究 润欣牌骨乐胶囊人体推荐量润欣牌骨乐胶囊人体推荐量33.33mg/kg.bw33.33mg/kg.bw。该样品实测钙离子为。该样品实测钙离子为205g/kg205g/kg样品，由此推算人体每日摄入钙离子为样品，由此推算人体每日摄入钙离子为409mg409mg，属于以补钙为主的保健食品。属于以补钙为主的保健食品。方案二方案二 2.1 2.1 实验原理实验原理 雌性成年大鼠切除卵巢后，骨代谢增强，并雌性成年大鼠切除卵巢后，骨代谢增强，并发生骨重吸收（破骨）作用大于骨生成（成骨）发生骨重吸收（破骨）作用大于骨生成（成骨）作用的变化。这种变化表现为骨量丢失，经过一作用的变化。这种变化表现为骨量丢失，经过一定时间的积累，可以造成骨密度降低模型。在建定时间的积累，可以造成骨密度降低模型。在建立模型的同时或模型建立之后给模型实验组大鼠立模型的同时或模型建立之后给模型实验组大鼠补充受试物，通过受试物抑制破骨或促进成骨等补充受试物，通过受试物抑制破骨或促进成骨等骨代谢调节作用，观察其在增加骨密度、骨钙含骨代谢调节作用，观察其在增加骨密度、骨钙含量、骨重量等的效果，从而对受试样品增加骨密量、骨重量等的效果，从而对受试样品增加骨密度的功能进行评价。度的功能进行评价。2.2 2.2 实验动物实验动物 3 3月龄月龄SDSD成年雌性大鼠，实验前适应成年雌性大鼠，实验前适应3 35 5天。天。2.3 2.3 仪器和试剂仪器和试剂 同方案一同方案一 2.4 2.4 实验设计和实验剂量实验设计和实验剂量 去卵巢骨密度降低模型去卵巢骨密度降低模型 大鼠经腹腔注射大鼠经腹腔注射30mg/kg30mg/kgbwbw的戊巴比妥钠溶液麻的戊巴比妥钠溶液麻醉，摘除双侧卵巢。醉，摘除双侧卵巢。动物分组动物分组 大鼠经适应性饲养后分组，实验动物按大鼠经适应性饲养后分组，实验动物按体重随机分组为体重随机分组为假手术组假手术组、切除卵巢组、切除卵巢组+溶剂溶剂组组、切除卵巢、切除卵巢+低剂量受试物组低剂量受试物组、切除卵巢、切除卵巢+中剂量受试物组中剂量受试物组、切除卵巢、切除卵巢+高剂量受试物组高剂量受试物组。必要时设切除卵巢必要时设切除卵巢+阳性对照组（具雌激素活阳性对照组（具雌激素活性的物质）。每组动物性的物质）。每组动物812812只。只。受试物给予和实验周期受试物给予和实验周期 三个剂量组灌胃给予受试物，溶剂对照三个剂量组灌胃给予受试物，溶剂对照组和假手术组灌胃给予溶剂（去离子水）。组和假手术组灌胃给予溶剂（去离子水）。动物自由饮水和基础饲料。喂养时间为动物自由饮水和基础饲料。喂养时间为1212周。周。试验末取大鼠双侧股骨测定。试验末取大鼠双侧股骨测定。2.5 2.5 观察指标（同方案一）观察指标（同方案一）体重体重 股骨干重股骨干重 骨钙测定骨钙测定 骨密度测定骨密度测定 骨组织病理学检测骨组织病理学检测 2.6 2.6 数据处理数据处理 实验数据采用方差分析实验数据采用方差分析 。2.7 2.7 结果判断原则结果判断原则 受试物试验组的股骨骨钙含量或骨密度受试物试验组的股骨骨钙含量或骨密度显著高于模型对照组，且骨组织形态学指标显著高于模型对照组，且骨组织形态学指标较模型对照组有显著性改善，方可判定受试较模型对照组有显著性改善，方可判定受试物具有增加骨密度功能的作用。物具有增加骨密度功能的作用。例例:玉竹牌养骨茶增加骨密度的玉竹牌养骨茶增加骨密度的动物实验研究动物实验研究 玉竹牌养骨茶样品人体推荐剂量为玉竹牌养骨茶样品人体推荐剂量为83mg83mgkgbw,kgbw,该样品实测钙离子为该样品实测钙离子为20.92g/kg20.92g/kg样品。由样品。由此推算人体每日摄入钙离子仅此推算人体每日摄入钙离子仅104mg104mg，属不以补，属不以补钙为主的保健食品。根据中华人民共和国卫生部钙为主的保健食品。根据中华人民共和国卫生部保健食品检验与评价技术规范保健食品检验与评价技术规范(2003(2003年年)中中的要求，应该采用切除动物卵巢的方法建立骨质的要求，应该采用切除动物卵巢的方法建立骨质疏松模型。疏松模型。谢谢观看/欢迎下载BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES.BY FAITH I BY FAITH