桃胶药理学作用地实验研究

word桃胶药理学作用的实验研究摘 要研究背景糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是由胰岛素分泌的绝对或相对不足以与细胞对胰岛素敏感下降，引起以糖代i身紊乱为主的临床综合症。糖尿病的发病率不断升高，尤其在开展中国家发病率增长较快，我困糖尿病患者人数仅次于印度，居世界第二位。糖尿病的并发症多且较为严重，其并发症随着病程的延长主要表现为大血管病变(如动脉粥样硬化、冠心病、脑血管和外周血管病变)、微血管病变(如神经病变、肾病和视网膜病变)和糖尿病骨质疏松等。目前糖尿病与其并发症的治疗效果仍不理想，因此，开发降低血糖的药物和保健食品是预防和改善糖尿病以与延缓并发症发生的重要措施之一。多糖(polysaccharides)是一种复杂的碳水化合物，其来源种类很多，有细菌多糖、植物多糖、真菌多糖和动物多糖等。近10多年来，对多糖的研究也越来越多，大量的研究证实多糖的药理作用十分广泛，如提高免疫、抗肿瘤、去除自由基抗衰老、抗感染、降血脂、降血糖等作用。目前关于多糖的药理研究中，尤以降血糖和降低血脂的研究较多。多糖类物质降血糖的作用机理主要包括以下几方面：改善胰岛细胞形态功能，促进胰岛素分泌；促进肝脏、肌肉等外周组织和靶器官对糖的利用；改变糖代谢酶系的活性；提高免疫能力，去除自由基的危害。桃胶(peach resin)是桃树(蔷薇科植物)的树干受机械损伤(如虫咬、切伤等)或致病后分泌出来的胶质半透明物质。我国古代文献，如草药验方交流集、名医别录、古今录验方、本草纲目和千金方等对桃胶的药理作用均有记载。桃胶味苦、性平，益气、和血、止渴，具有治疗消渴的作用。研究证实，桃胶主要成分为多糖，其多糖含量高达90以上，在所有植物中多糖含量最高，是一种不可多得的纯度较高的中药资源。根据人类2型糖尿病的发病特点，本文利用高脂高糖饲料联合d,N量四氧嘧啶的方法，模拟出近似于人类2型糖尿病的大鼠模型，并观察天然桃胶对糖尿病大鼠糖脂代谢以与相关重要脏器的影响，为今后桃胶的开发提供理论依据。研究方法1糖尿病大鼠模型的制备与分组SPF级SD大鼠80只，体质量1501609，雌雄各半，按体重将大鼠随机分成正常组(10只)和造模组(70只)，实验期I、日JJ下常组用根底饲料喂养，造模组予以高脂高糖的高能量饲料喂养。适应l周后，禁食(不禁水)12 h，临时用生理盐水将四氧嘧啶新鲜配制成2四氧嘧啶溶液(冰上避光操作)，按120、80、60mgkg分三次(隔同)对造模组大鼠进展腹腔注射，72h后测禁食12h空腹血糖，挑选血糖值在1 1125mmolL之I日J者为糖尿病大鼠。将成模后大鼠随机分成桃胶低、中、高剂量组和模型组，每组10只。2桃胶对DM模型大鼠空腹体重的影响3桃胶对DM模型大鼠空腹血糖的影响4桃胶对DM模型大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响5桃胶对DM模型大鼠糖化血红蛋白、胰岛素、C肽、胰岛素敏感指数的影响6桃胶对DM模型大鼠血脂含量的影响7桃胶对DM模型大鼠肝肾胰组织病理形态学的影响8统计学方法采用SPSSl30统计软件进展分析，计量资料以均数标准差(x虹)表示，主要采用独立样本t检验和方差分析。当方差齐时组间比拟采用单因素方差分析(ONEWAY ANOVA)，当方差不齐时用近似F检验的Welch法，并以最小显著差异法(LSD法)或DunnettT3法进展各组间的两两比拟。以Q=005为检验水准。结果1造模后大鼠的情况11造模后大鼠的一般情况币常大鼠精神状况良好，饮食、饮水与大小便正常，活动正常，反响灵敏，背毛平伏、浓密而有光泽，体重增长明显。造模组大鼠在实验期间均出现明显得多饮、多食、多尿症状，且尿中出现白色絮状样油脂，精神较为萎靡，活动稍少，体毛偏黄，少光泽。整个实验期造模鼠仅出现一例死亡。12造模后大鼠的体重变化情况造模后各组大鼠的体重，经Levene检验方差齐性(F=0820，P=O370)，采用独立样本t检验(Independent SamplesT Test)有显著性差异(t=-4536，卢0000)，说明经高能量饲料联合四氧嘧啶造模后，大鼠体重较前显著增加。13造模后大鼠的空腹血糖情况造模后大鼠的空腹血糖，经Levene检验方差不齐(F=47048，P=O000)，采用Satterthwaite近似t检验有显著性差异(t=15525，P-O000)，说明大鼠造模后空腹血糖较前显著升高。14造模后大鼠的血脂水平造模后各组HDLC无显著性差异(t_O714，P=O479)，LDLC有显著性差异(t一10717，P=0ooo)，TG有显著性差异(t8005，P=Oooo)，TC有显著性差异(t_5519,P=0ooo)，明确造模后的糖尿病大鼠伴有血脂水平的升高。2桃胶的药理学作用21桃胶治疗后大鼠的一般情况桃胶治疗后，低剂量组变化不明显；中、高剂量组糖尿病大鼠多饮、多食、多尿症状改善，体重虽较前仍有增长，但与模型组比拟，体重增长相对较缓；体毛色泽较前改善，精神较前好转，活动较多，反响较为灵敏。中文摘要22桃胶对DM模型大鼠体重的影响治疗后各组间大鼠体重比拟均有显著差异(F=7403，P-0000)，需进一步进展两两比拟。予以桃胶治疗后，各剂量组大鼠的体重与正常组比拟，虽仍有不同程度的增加(P以05)，但与模型组比拟有显著性差异(尸m 05)，明确桃胶有控制体重增长的作用。23桃胶对DM模型大鼠空腹血糖的影响治疗后各组间空腹血糖比拟有显著性差异(F=35938，P=-0000)，需进一步进展组问的两两比拟。给药后中、高剂量组空腹血糖与正常组比拟，无显著性差异(P005)，而模型组和低剂量组空腹血糖显著高于讵常组(P001)。中、高剂量组空腹血糖显著低于模型组(P005)，高剂量组空腹血糖显著低于低剂量组(P005)。24桃胶对DM模型大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响各组大鼠胸腺指数(thymus index)和脾脏指数(spleen index)，经方差分析后明确有显著性差异(F=4314，P=-0005；F=8354，P=-0000)，需进一步进行两两比拟(采用LSD法)。在胸腺指数和脾脏指数方面，模型组与正常组比较均有显著差异(P005)，与中、高剂量组比拟均有显著差异(P005)；低、高剂量组之l、HJ比拟均有显著差异(尸005)。明确桃胶能增加免疫器官重量，调节免疫功能。25桃胶对糖化血红蛋白、胰岛素、C肽、胰岛素敏感指数的影H向各组胰岛素(F=31861，P=0000)、C肽(F=17831，P=0000)、胰岛素敏感指数(F=97432，P=0000)，糖化血红蛋I兰t(F=27221，P=0000)均有显著性差异，需进一步进展两两比拟。模型组胰岛素、C肽和糖化血红蛋I兰i(GHbAlc)水平显著高于正常组(氏O01)，胰岛素敏感指数显著低于J下常组(尸001)。治疗后，高剂量组胰岛素、C肽和血红蛋白与模型组相比显著改善(尸005)，而高剂量组上述几个指标较低剂量组有显著性差异(尸005)。模型组LDLC、TG和TC显著高于正常组(PO01)，中、高剂量组LDLC、TG和TC显著低于模型组(尸001或尸005)，中、高剂量组血脂与正常组接近。由表中可知，低、中、高剂量组之间可见一定的量效关系趋势，但无统计学意义(尸005)。27对DM模型大鼠肝脏、肾脏和胰腺的影响对肝脏的影响：肉眼观察，F常组大鼠肝脏外形正常，暗红色，被膜光滑、湿润。模型组和桃胶低剂量组大鼠的肝脏体积明显增大，包膜紧X，边缘钝圆，质地变软，有油腻感，外表无光泽，呈奶油黄色；桃胶中、高剂量组大鼠的肝体积、质地、色泽均较模型组有明显改善。200光镜下，正常组大鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构F常，肝细胞无脂肪变性等异常改变；模型组与给药各组大鼠均有不同程度的肝细胞脂肪变性，以模型组最重，低、中、高剂量次之，其表现为肝小叶界限不清，肝细胞索排列紊乱，大局部肝窦消失，多数肝细胞出现严重的脂肪变性，以小叶中央静脉周围最为严重，肝细胞极度肿胀呈圆形，胞浆内可见大小不等，数量不一的脂滴空泡(脂肪变性)，严重者脂滴相互融合，将细胞核挤向细胞一侧，酷似脂肪细胞。对肾脏的影响：肉眼观察下，J下常组大鼠的肾脏体积轻度肿大，包膜紧X，混浊无光泽，呈浊红色。镜下观察，正常组。肾小球和肾小管大小、形态均正常，排列规如此。与正常组相比，模型组和低剂量组大鼠肾小球体积明显增大，系膜基质增多，基底膜增厚；近曲小管上皮肿胀，有的小管腔内可见透明管型，远曲小管上皮胞浆空宽，显示气球样变性。肾小管、间质内炎症细胞浸润增多，且有糖原沉积；与模型组比拟，中、高剂量组系膜基质增多、基底膜增厚情况减轻，。Iqd,管、问质内炎症细胞浸润减少，无糖原沉积。对胰脏的影响：200倍光镜下，正常组大鼠的胰岛呈椭圆形的细胞团，境界清楚，胰岛数与岛内细胞数较多，各分泌细胞大小一致，胞质丰富，核染色质清晰；模V中文摘要型组大鼠的胰岛明显萎缩，轮廓欠圆润，胰岛内形态欠规如此，细胞数目少，且排列紊乱，肿胀变形，空泡明显，局部细胞缺失、塌陷；低剂量组大鼠的胰岛体积偏小，形态较规如此，胰岛内细胞稀疏，大小不一，排列不均，局部细胞出现核固缩；中、高剂量组胰岛数与岛内细胞数明显增多，细胞分布均匀，核大小根本相等，无核固缩现象。研究结论1验证了利用高能量饲料联合4,N量四氧嘧啶可模拟出近似于人类2型糖尿病的模型。2桃胶能改善糖尿病大鼠的一般状况，控制体重；增加免疫器官重量，提高免疫器官指数，改善免疫功能；能改善胰岛素抵抗，控制空腹血糖。3桃胶能改善体内血脂代谢紊乱，降低糖尿病大鼠LDLC、TG、TC水平，从而减轻脂毒性对机体的损伤。4桃胶能在一定程度上减轻肝。肾胰组织的损伤，有利于控制糖尿病与其并发症的发生开展。关键词：桃胶糖尿病血糖血脂 形态学随着我国经济的开展、人民生活水平的提高与膳食结构和生活方式的变化，疾病谱发生了很大变化。生活方式病(糖尿病、心血管病、肥胖、肠癌、便秘等)发病率呈逐年升高的趋势。其中糖尿病(Diabetes mellitus，DM)的发病率不断升高，在我国，1978年以前糖尿病的平均发病率低于1，最近5年的糖尿病发病率以每年11的惊人速度增长。退休职工健康体检分析报告显示：45参检人群存在空腹血糖增高现象，说明糖尿病以与糖耐量异常人数不断增加。我国是全球糖尿病患病率增长最快的国家之一，我国糖尿病患者人数仅次于印度，居世界第二位。预计1112025年，世界糖尿病患者将增至3亿以上。糖尿病的并发症多且较为严重【l巧】，其中肥胖和高血脂往往是糖尿病的危险因素之一。调查显示20岁以上糖尿病患者，80为肥胖患者，肥胖人群糖尿病患病率比普通人群高4倍【6】o我国也是高脂血症，高血压病，肥胖病等生活方式病患病率增长最快的国家之一，肥胖人数约2亿，儿章的肥胖率已达81，与20年前相比成人超重率上升了39，肥胖率上升了97。据中国居民营养与健康状况显示，高脂血症的发病率逐渐增高，成人血脂异常患病率为186，血脂异常人数约16亿人、血脂异常患病人群逐渐年轻化。积极控制血糖、血脂异常和肥胖成为预防心脑血管疾病、降低死亡率的重要手段。桃胶是桃树(蔷薇科植物)的树干受机械损伤(如虫咬、切伤等)或致病后分泌出来的胶质半透明物质【7】。我国桃胶资源较为丰富，分布广泛，某某、某某，江西，某某，某某，某某，某某，某某，某某等省均为产地。桃胶产量较大，且价格廉价，约为2500元吨。其多糖含量高达90以上，是一种不可多得的纯度较高、临床证实有效的多糖类中药资源。我国古代文献，如草药验方交流集、名医别录、古今录验方、唐本草、本草纲目和千会方等对桃胶的药理作用均有记载。原桃胶味苦，性平，益气、和血、止渴、活血消肿、通淋止痛【8】。古代已经记载桃胶具有治疗消渴的作用，且具有药食兼备的特点。前言目前，桃胶主要应用于食品和工业领域，如饮料、香精、果汁、啤酒、糕点、面包、乳制品、巧克力、泡泡糖等产品，是天然的增稠剂、悬浮剂、胶粘剂、成膜剂、上光剂、稳定剂，被视为国产“阿拉伯胶。在工业中，桃胶粉可用于轻工业包装、印刷护版、彩色铅笔芯、微粉、陶瓷贴花、焰火、美术颜料、墨汁稳定剂、粉术冶金、磁性材料与化妆品等产品中。桃胶的临床应用主要见于古代文献，在医学领域的药理学研究以与应用研究较少。早在1962年某某放射学会议上，某某医学院曾介绍了桃胶钡剂混悬液作胃肠道检查的方法，认为同阿拉伯胶的效果不相上下。之后有关专利报道，桃胶有增强免疫功能和提高血象的作用。经药理、毒性试验和临床研究，桃胶液对所有T细胞都有升高作用，T3、T4亚群尤为明显；提高血象，以升高白细胞尤为显著；并能保护造血功能，减轻化疗、放疗的毒副作用【9】。另据文献报道，中药桃胶溶液能使II度烧伤创面迅速结痂成膜，渗出液明显减少，疼痛明显减轻，且无过敏反响和其他不良反响，创周炎性反响发生程度低于对照组，细菌学调查结果明确抗菌结果也要优于对照组【l 01。至于桃胶在保健品中的应用办未见报道。利用桃胶生产桃胶多糖，可以大大提高桃胶的药用价值，增加桃胶的经济附加值，使得桃胶资源得以充分的利用，有利于提高农民收入，有益于调整农业产业结构，为农业开展提供技术支持。由于桃树产胶会导致桃果的减产，因而国外严格禁止桃树产胶，关于原桃胶利用与加工方面的研究报道也少见，仅日本有利用原桃胶用作天然食品添加剂的规定。从1996年起，日本一直将桃胶视为天然食品添加剂(2009年食品添加物。梭合影窖c：阴寸为调查辗告耆)使用。如日本公丌特许专利10150930(1998)报道：原桃胶可用作甜味食品和片剂的涂料。我国多个版本的药典也规定桃胶可以用作中药材。我国原桃胶有药用历史传统，且已经开展了许多在食品等领域应用的研究。如：有些厂家将商品桃胶用于制造糕点、面包、乳制品、巧克力、泡泡糖、香料等；中医利用原桃胶防治血淋、石淋、痢疾、腹泻、疼痛等症；现代医学如此利用原桃胶治疗糖尿病、泌尿系统结石等疾病，还用作癌症的辅助治疗或药材配料。本课题组多年来一直从事多糖的研究，特别是对多糖的别离、提纯等，已取得阶段性成果【11。31。关于桃胶的理化特性研究结果明确：桃胶主要成分是多糖，其多糖含量高达90以上，其他物质含量极少，其多糖主要由半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等成分组成，在目前所有植物中，桃胶中多糖含量最高，是一种不可多得的纯度较高的中药资源。据古代医籍与近代某些老中医经验，均明确桃胶有治疗糖尿病的作用。基于上述，本课题组对桃胶进展了前期初步研究，证实桃胶对糖尿病小鼠有一定的降血糖作用。根据其成分组成，可明确其降糖作用主要与多糖相关，但是不同的多糖，其单糖组成不尽一致，其降糖机制是否与其他多糖一致，尚不明确。本课题将通过模拟糖尿病模型，进一步探讨桃胶多糖的降糖机制，为降糖新药的丌发提供研究方向，并为桃胶多糖丌发成食品新资源和保健品提供依据，从而起到充分利用我国丰富的桃胶资源，带动农林经济开展的作用。第一章多糖的药理学研究概况第一章 多糖的药理学研究概况天然多糖广泛存在于植物、动物和微生物组织中，约有300多种。人们对多糖生物活性的研究，可以追溯到1936年Shear对多糖抗肿瘤活性的发现们。其作为药物始于1943年，随着化学和生物学的快速开展和别离技术的提高，多糖的生物学功能得到了广泛研究和应用。近10多年来，关于多糖的药理学研究也越来越多。现对多糖的研究进展如下综述：1多糖来源与分类近年来，研究明确多糖具有广泛的牛物活性而且作为药物具有低毒高效的优点，因此多糖的研究已经成为当今学术界的一大热点。按其来源可分为：植物多糖：人参多糖、党参多糖、枸杞多糖等；动物多糖：甲壳素、肝素和硫酸软骨素等；真菌多糖：灵芝多糖、香菇多糖、透明质酸和羊肚菌多糖等；海洋生物类多糖：红藻多糖、褐藻多糖、牡蛎多糖、海参多糖等。目前，在2型糖尿病的防治中，研究较多的是植物多糖和真菌多糖的降糖作用。2多糖的生物学活性21免疫调节作用现代医学、细胞生物学与分子生物学的开展使人们认识到免疫系统的紊乱不仅会产生多种疾病，而且与人体衰老与老年人发病有关。多糖可以通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。大量实验研究明确，多糖不仅能活巨噬细胞(M)、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞(NK)、细胞毒T细胞(CTL)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)等免疫细胞，还能促进细胞因子生成，活化补体，从而对免疫系统发挥多方面的调节作用。胡庭俊等51应用反向离子对高效液相色谱法测定银耳多糖(TPS)对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶c(PKC)的活性的影响，结果明确TPS作为外源性信号分子，4硕士学位论文与脾淋巴细胞外表特异性受体结合，活化细胞膜PKC，并引起级联反响，使细胞内一系列蛋白质级联磷酸化，最后将胞外信号传递到细胞核，活化核内转录因子，引起基因表达，调节免疫细胞的功能。22抗肿瘤作用手术、放疗和化疗仍是目前治疗癌症的主要手段，但存在术后并发症、癌细胞转移与放化疗对正常细胞的杀伤而引起机体免疫力下降等问题多糖通过增强机体的免疫力可以与手术、放疗与化疗药物配合使用，从而更有效地预防和治疗癌症。多糖通过活化巨噬细胞，活化淋巴细胞，促进细胞因子分泌，活化补体而提高宿主抗肿瘤免疫功能，通过影响肿瘤细胞膜生化、抗自由基、诱导肿瘤细胞分化与凋亡，影响肿瘤细胞超微结构而发挥直接的抗肿瘤作用。多糖的分子结构、给药剂量、给药途径、给药时间、联合运用等是影响多糖抗肿瘤作用的重要因素n6。203。机体内存在多种免疫监视机制发挥着抗肿瘤作用功能，而免疫活性细胞致敏、激活和扩增有依赖于抗原提呈细胞(APC)提呈相应的抗原多肽以与共刺激信号。树突状细胞被认为是目前发现的功能最强的APC，它能摄取各类抗原，在机体细胞免疫和体液免疫调控中均起着重要作用。人们己从不同生物材料中得到多种具有抗肿瘤活性的多糖，如从香菇多糖具有强的抗肿瘤活性，其抑制癌症和抗肿瘤效果不是直接作用于移植性癌细胞，而是通过宿主调节而发生作用。多糖类药物用于抗肿瘤可以克制化疗、放疗过程中对正常细胞的损伤。23抗病毒作用研究发现，红藻中红藻多糖具有明显抑制牛免疫缺陷病毒BIV的生长的作用，杜仲碱被认为含有多糖类，具有抗破坏人体免疫系统病毒的功能；香菇多糖能促进HIV感染者外周血单个核细胞分泌工L一1、IL一2和IFNr，抑制IL一4、IL一10和TNFa分泌212引，均有望开发成抗AIDS药物。另外，有研究认为香菇多糖和灵芝多糖等对抗慢性肝炎有显著疗效，酿酒酵母葡聚糖能增强宿主对鼠肝炎病毒抵第一章多糖的药理学研究概况抗力，使肝细胞坏死病变明显减轻，并使血清谷丙转氨酶恢复正常，对单纯疱疹病毒和脑脊髓炎病毒有抵抗作用。猪苓多糖能抑铝IJtBV转基因小鼠HBsAg的表达，从而抑制肝炎病毒心引。在已经发现的抗病毒多糖中，活性最强的是硫酸化多糖。一般认为，硫酸多糖通过干扰病毒对宿主靶细胞的朱1i附、抑制抗原的表达、抑制合胞体形成等途径抑制病毒瞳圳。辛现良等瞳钔发现海洋硫酸多糖能抑制病毒逆转录酶活性，干扰HIV一1与细胞吸附，有抑铝iJAIDS的作用。黄精多糖具有抗病毒作用，硫酸化后作用有了很大的提高。24抗氧化作用自由基被认为是机体衰老和某些慢性病发生的原因之一。这是因为自由基引发脂质过氧化产生脂质过氧化物，造成对细胞、酶类与核酸等生物大分子的损害。当机体内的自由基过多或消除过慢，就会攻击各种细胞、器官并使之受到损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。电离辐射也町激发体内产生自由基，对机体造成广泛的损伤。机体抗氧化防御系统对氧化的应激反响主要是提高谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性，从而起到抗氧化作用。关于多糖的抗氧化作用机制尚无定论，一种解释是-OH可以夺取多糖碳氢链上的氢原子结合成水，而多糖碳原子上留下单电子可继续氧化形成过氧自由基，后者可进一步分解；另有研究认为是多糖环上的羟基可与产生-OH等所必需的金属离子络合，从而抑制活性氧自由基的产生。总之，多糖具有去除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化活性的能力，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。钦传光等刚采用化学发光法和分光光度法在多种化学模拟体系中研究了泥鳅多糖去除活性氧的作用，结果明确泥鳅多糖能够有效地去除02-、一OH、H202等活性氧，对DNA链具有良好的保护作用。云芝多糖能够增强GSHPX活性，促进H202去除心71，能使辐射引起的迟发型超敏感性反响低下和SOD活力下降明显恢复，过氧化水平降低，对受Y射线辐射的小鼠有明显的防护作用啪3。小鼠服云芝多糖lOmgkg连续315天，不仅对正常小鼠有升高SOD活力和降氐LPO水平的作用，而且能有效减轻或防止因辐射所引起的SOD活力低下，同时使升高的LPO下降啪1。25抗衰老作用中药多糖类成分的抗衰老作用与现代应用，主要涉与以下四个方面：加强DNA的复制与合成，提供必须的微量元素与营养来延长动物的生长期，提高动物对非特异性刺激的抵抗能力以达到强壮作用；调节蛋白质和核酸、糖和脂质代谢：抗脂质过氧化与抑制脂褐素作用；提高机体SOD活力去除LPO和MDA，抑带tJMAOB的作用，以达到抗衰老的作用。州。山茱萸多糖可有效去除羟自由基和超氧阴离子自由基。南沙参多糖能降低老龄小鼠肝、脑中脂褐素含量，显著抑制老龄小鼠血清中丙二醛的生成，提高老龄小鼠红细胞中超氧化酶与全血中谷胱甘肽过氧化物酶的活性，可使老龄小鼠肝、脑中B型单氨氧化酶的活性降低。从荔枝中提炼出中性的多糖具有强大的抗氧化活性，可以作为一个新的抗氧化剂来研究。“1。此外，螺旋藻多糖，菠叶大黄多糖，紫菜多糖均有抗衰老活性。26降JIlL糖作用糖尿病己成为我国的多发病和常见病，其患病率高达3O，尤其是40岁以上的中、老年人群中患病率更高，并具明显上升趋势协21。开发安全、无毒副作用、预防和治疗高血糖的天然药品和保健食品很有必要。研究发现，源自茶叶、南瓜、当归、人参、大麦、玉米等天然植物的多糖具有显著的降血糖效果。我国和同本民间常用粗老茶治疗糖尿病。已证实，茶多糖是粗老茶中治疗糖尿病的主要有效成分。陈建国等。1探讨茶多糖对四氧嘧啶所致的I型糖尿病小鼠的降血糖效果，按200mgkg剂量腹腔注射四氧嘧啶生理盐水溶液造模，分别按10、20、4Ogkgbw三个不同剂量灌胃茶多糖治疗，连续4周，结果以空腹血糖值作为检测指标。与模型对照组相比，中、高剂量茶多糖组小鼠在实验中期血糖值就明显降低，差异有显著性；实验术期有继续降低趋势，与对照组比拟均有非常显著性差异；血糖值降低幅度随着茶多糖剂量增加而增大，明确茶多糖具有明显降低糖尿病小鼠空腹血糖值的作用，并呈一定剂量一效应关系。实验结果还显示，茶多糖能明显改善糖尿病小鼠“三多一少的症状。第一章 多糖的药理学研究概况给予四氧嘧啶所致的糖尿病大鼠南瓜粗多糖灌胃，3周后检测大鼠空腹血糖值，南瓜多糖组血糖值明显低于模型组与阳性对照药消渴丸组，并能有效改善大鼠糖尿病症状。许莹等71分别对正常小鼠和四氧嘧啶所致糖尿病小鼠按低中高剂量灌服当归多糖30、60、120mgkg，结果显示，120mgkg高剂量当归多糖对正常组小鼠血糖有明显影响，给药后4h空腹血糖下降23给药后7h下降26，在给药后1lh下降40，但中、低剂量的当归多糖对正常小鼠血糖无显著影响；高剂量当归多糖对四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖有显著影响，给药后4h血糖下降20，给药后7h下降30，在给药后11h下降4l，中、低剂量组作用不显著。苦瓜多糖、灵芝多糖、山药多糖、桑叶多糖等都具有降血糖的作用。27降血脂作用高脂血症常继发于糖尿病、肾病综合症等疾病，是动脉粥样硬化、冠心病的危险因素之一。有动物实验明确，局部植物多糖具有降血脂功能。罗琼等。州探讨了枸杞多糖粗品与其纯化组分对四氧嘧啶180mgkg造模的实验性家兔高脂血症的降血脂作用，三种药物分别以O25、10、lOmgkgd剂量灌胃，生理盐水作对照，连续lOd。结果显示，枸杞具有降低高脂血症兔血脂(血清总胆固醇TC、血清甘油三酯TG)的作用；枸杞多糖粗品能显著降低实验性高脂血症兔的TC、TG，血清高密度脂蛋白(HDL-C)相应升高；纯品枸杞多糖能明显降低高脂血症兔的血清总胆固醇与血清甘油三酯，均达降脂有效水平，有效率100。用亚平等m州探讨了多糖对高脂血症大鼠有明显的血脂调节作用和肝脏保护作用。以高脂饲料诱导制备高脂血症大鼠，分别将黄芪多糖以1668、834、3529kg齐tJ量参加高脂饲料进展喂养，结果显示，黄芪多糖可显著降低高脂血症大鼠的血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、丙二醛水平和肝脏总胆固醇、丙二醛含量。尹俊青等n叨用黄芪多糖对健康人群血脂进展干预，受试者每同早晚各1次服用黄芪多糖(保健食品)总疗程共4周，能有效地降低健康人血清总胆固醇、载脂蛋白B、低密度脂蛋白胆固醇的水平。另外，黄精多糖、桑叶多糖、莼菜多糖、玉米活性多糖等都有降血脂作用。28抗突变作用螺旋藻多糖能抑制受辐射蚕豆根尖细胞微核率的产生以与染色体畸变的发生，用60Co-r射线照射NIH雄性小鼠，剂量23Gymin，分辐射前后灌胃4mgg多糖蛋白两个实验组，其骨髓细胞PCENCELL率显著高于阳性对照组。螺旋藻水溶性BAP还能显著增强辐射引起的DNA损伤的切除修复活性和程序PbDNA合成(UDS)，且能延缓以上两个重要修复反响的饱和。29抗菌消炎作用低分子量透明质酸在啮齿类动物中具有直接抑制致病菌生长与其病理反响功能，大分子量透明质酸所特有的吸水保湿功能，在皮肤外表易形成一层水化膜，此膜如同一道天然屏障，能有效地将皮肤与细菌隔离开来，阻止细菌侵入皮肤内部，问接产生抗菌消炎效果。此外，在皮肤组织内部，透明质酸与蛋白结合形成透明质酸一蛋白复合物存在细胞间隙中，并形成高分子凝胶，将细胞粘合在一起，发挥细胞正常代谢与组织持水作用，产生保护组织细胞免受病原菌的侵害和防止感染等H2|。叶锦林等n33对紫球藻提取液与其多糖溶液进展体外抑菌实验，研究明确多糖是抗菌作用的主要成分，紫球藻提取物与其多糖对革兰氏阳性菌(特别是金黄色葡萄球菌和八叠球菌)的抑菌作用较为明显。至于其抑菌机制，可能是通过抑制菌体蛋白合成或作用于菌体细胞结构来实现的，还有待进一步研究证实。此外，多糖类还具有抗消化性溃疡和抗凝血等作用。3多糖在防治2型糖尿病并发症方面的作用中药多糖不仅能降氐T2DM患者血糖水平，改善“三多一少症状，且对T2DM并发症防治有显著效果。31对血液流变学的影响现代医学认为，DM并发症的产生是由于患者高血糖、高血脂等代谢紊乱使血液粘稠度增高，致广泛的微循环障碍。现代血液流变学认为，血液粘稠度的第一章多糖的药理学研究概况增加会加速血管病变。研究发现1，丹皮多糖能降低红细胞硬化程度，提高红细胞变形性，降低血液粘稠度，明显改变DM大鼠血液流变学指标，抑制机体高糖环境下非酶糖化反响，对预防DM血管病变发生、开展有积极作用。32对肾脏病理改变的影响在TBDM患者死亡病因中，DM肾病仅次于大血管并发症，早期观察DM肾病变化尤为重要。研究明确，黄芪多糖可降低血糖，增加胰岛素敏感性，降低DM大鼠心肌脂质过氧化程度，增NSOD活性，可有效抑NDMd,鼠肾小球纤维化，减轻。肾脏肥大、。肾小球硬化和细胞外基质沉淀。33对心肌病变的保护作用糖尿病性心肌病变是DM常见慢性并发症，其病理改变主要是心功能降低、心肌细胞肥大、心肌纤维化和细胞凋亡与微血管病变等。实验发现H5|，丹皮多糖能升高DM大鼠肌酸激酶水平，降低乳酸脱氢酶水平，说明月皮多糖能纠正DM大鼠能量代谢紊乱，抑制糖尿病性心肌病变开展；月皮多糖能降t氐III型前胶原水平，一定程度地抑制层黏连蛋白水平升高，从而对心肌细胞外增生起抑制作用，对糖尿病性心肌病变具有保护作用。34对视网膜Mul ler细胞Kir21通道蛋白表达的影响在DM病早期出现经典的视网膜微血管病变之前，由于视网膜Muller细胞代谢和功能的改变以致视网膜神经层病变，因此控SUMuller细胞改变对预防和治疗DM视网膜病变有重要意义。李玉红等州发现，黄芪多糖除具降糖作用外，还可通过抑SgDM时Muller细胞上Kir21通道蛋白表达下降来保护DM大鼠视网膜功能，以降低DM视网膜病变发病率。4多糖调节糖代谢紊乱和胰岛素抵抗的可能机理41多糖受体的发现植物多糖构效关系的研究至今尚未完善。多糖的活性与分子量、溶解度、粘度、初级结构和高级结构有关。同本学者H力已开始了多糖化学结构中活性决定簇的研究，特别是近些年来有关多糖受体的发现对说明其作用机理有重要意义。当多糖与受体作用时只有分子中几个低聚糖片段与受体结合。推测多糖象蛋白质和酶一样，可能在多糖分子中存在一个或几个寡糖片段的“活性中心。由此发现具有药理活性的多糖表现除半乳糖醛酸区和带中性糖侧链的鼠李半乳糖醛酸中心。42对激素水平的调节大量实验明确，植物多糖能降低正常与实验性糖尿病鼠的F常血糖水平，与其促胰岛素分泌的作用严密相关。植物多糖能够有效地对抗肾上腺素、胰高血糖素引起的高血糖8|。可能的机制是植物多糖作用于糖代谢酶或是竞争性抑制激素受体作用的结果。43对糖代谢酶活性的调节文献n训报道，怀庆地黄根茎的热水提取物为果胶样多糖组分，经化学修饰与蛋白酶处理得到的结果明确，活性存在于多糖结构局部，它可明显提高肝脏葡萄糖与葡萄糖一6一磷酸脱氢酶的活性，降低肝脏葡萄糖一6一磷酸酶与磷酸果糖激酶的活性。灵芝多糖如此能增加肝葡萄糖、磷酸果糖激酶、葡萄糖一6一磷酸脱氢酶的活性，降低糖原合成酶的活性。植物多糖可通过调节糖代谢酶的活性，抑制糖异生，促进葡萄糖的利用，达到改善糖代谢紊乱和胰岛素抵抗的目的。44抗氧化和免疫调节作用多糖具有重要的抗氧化和免疫调节作用，能促进细胞免疫功能和诱生多种细胞因子，增强机体免疫嘲1，这也是多糖在改善糖代谢紊乱和胰岛素抵抗过程中发挥药效作用的可能机制之一。多糖广泛的生物活性己被人们认知，通过其受体调节糖代谢激素水平和酶的活性，并通过抗氧化作用和提高机体免疫力等途径，增加糖利用，抑制糖异生，达到改善糖代谢紊乱和胰岛素抵抗的作用，并能起到防治2型糖尿病并发症的作用。虽然多糖在治疗肿瘤、感染、糖尿病等疾病方面有较好的疗效，且用于临床和科研方面均具有巨大潜力，但是，多糖来源广泛，是否不同来源的多第一章多糖的药理学研究概况糖都具有这些药理作用，有待进一步研究和证实。不同多糖的组成、分子量、硕士学位论丈第二章桃胶药理学作用的实验研究21材料与方法211试验药物桃胶粉为食用级，主要成分为多糖，含量达90以上(购自某某鼎力胶业某某，批号09040860)。212动物与饲料SPF级SD大鼠80只，雌雄各半，体质量为1501609。放置在室温18。C一22，相对湿度为5070，12h明暗交替的环境下饲养。实验期间自由饮水、饮食，根底饲料为标准全价饲料。动物和饲料均由南方医科大学实验动物中心提供(动物合格证号为：SCXK(哟)20060015)。高脂高糖的高能量饲料由55基础饲料、15猪油(自备)、30蔗糖(市售)混合加工制成。213药品与试剂四氧嘧啶(Alloxan，ALX)购自Sigma公司，批号：10122281；甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)试剂盒均由某某建成生物试剂公司提供；糖化血红蛋白、C肽试剂盒由某某建成生物试剂公司提供；胰岛素酶联免疫吸附法(ELLISA)检测试剂盒，由Dsl试剂公司提供，批号：2008101600；1的戊巴比妥钠：某某化学试剂厂生产；柠檬酸钠、柠檬酸：某某化学试剂厂生产；甲醇、二甲苯、NaH：PO,2H。0、Na：HP0412H：0和NaCl等，均由某某省光华化学厂某某生产，批号20080128；乙醇(无水乙醇)由某某省某某市西陇化工厂生产，批号：080827；乙醇(95)由某某省某某市西陇化工厂生产，批号：080624；第二章桃胶药理学作用的实验研究高效切片石蜡(58-60)，由某某华永石蜡某某生产，批号：071026；磨砂硅化载玻片、显微镜盖玻片，均为世泰CITOGLAS出品。214主要仪器设备5公斤电子天平，某某天平仪器某某生产；GRANT水浴恒温箱(美国)；全自动生化分析仪，美国强生公司；美国伯乐BIORAD 680型酶标仪；ACCUCHEK Active罗康全活力型血糖检测仪，德国罗氏诊断公司生产；罗康全活力型血糖试纸，罗氏诊断产品(某某)某某，批号：22988231；LeicaRM2025型石蜡切片机，德国莱卡公司生产；BH一20显微镜，由OLYMPUS公司生产。215实验方法2151糖尿病大鼠模型的建立：按体重将大鼠随机分成正常组(10只)和造模组(70只，实验期间J下常组用根底饲料喂养，造模组予以高脂高糖饲料喂养。适应1w后，禁食(不禁水)12 h，用生理盐水将四氧嘧啶配制成新鲜的2四氧嘧啶溶液(注意冰上避光操作，防止分解)，按剂量120、80、60mgkg对造模组大鼠问断进展三次腹腔注射，72h后测禁食12h空腹血糖，挑选血糖值在1 1125mmolL之间者为糖尿病大鼠，并将其随机分为4组：模型组、桃胶高、中、低剂量组(4、2、lgkg)，每组10只。2152给药方法：桃胶高、中、低剂量组，分别按4、2、lg(kgd)的剂量灌胃，空白对照和模型组同时灌胃等体积生理盐水，每天两次，连续灌胃2周。2153指标检测：采用罗康全活力型血糖仪检测空腹血糖；胸腺指数(Thymusindex)和脾脏指数(spleen index)分别为胸腺、脾脏与体重的比值；胰岛素(Insulin)、糖化血红蛋白(GHbAlc)和C肽均采用全自动生化分析仪测定；空腹胰岛素(FINS)采用ELLISA法，根据血糖与对应的空腹血糖(FBG)结果计算其胰岛素敏感指数(ISI)，依据公式ISI=I(FBGFINS)，统计分析采用14硕士学位论文Ln1(FBGFINS)计算而得。总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)的测定按照试剂盒要求，用全自动生化分析仪进展检测。2154组织形态学观察：取新鲜肝、肾、胰组织，常规福尔马林溶液固定后经脱水、石蜡包埋、切片、HE染色等一系列步骤后普通光学显微镜下进展形态学观察。其具体操作步骤如下：脱水：(1)从固定液中取出肝、肾、胰组织，流水冲洗lh，吸去多余的水分；(2)60酒精24 h(3)70酒精12 h(4)80酒精 6 h(5)90酒精 lh(6)95酒精 30 min(7)无水乙醇(I)30 min(8)无水乙醇(II)30 min(9)无水乙醇(III)40min(10)二甲苯(I)20 min(11)二甲苯(II)15 min浸蜡：(12)-rV苯与石蜡混合液40min(13)石蜡(I)30 min(14)石蜡(II)30 min包埋：石蜡包埋，存于4。C冰箱。用轮转式切片机对蜡块进展连续切片，片厚5 la rn，捞组织片于载玻片上，烤箱60。C中过夜，切片备用。苏木精伊红染色：第二章桃胶药理学作用的实验研究(1)二甲苯(I)(2)二甲苯(II)(3)无水乙醇(I)(4)无水乙醇(II)(5)95酒精(6)85酒精(7)dH20(8)吸干切片上过多的水分(9)苏木精液染色(10)流水稍洗去苏木精液(11)1盐酸乙醇(12)水洗(13)促蓝液返蓝(14)流水冲洗(15)蒸馏水过洗(16)O5伊红液染色(17)水洗(18)807,醇稍洗(19)957,醇(I)(20)95乙醇(II)(21)无水乙醇(22)无水乙醇(23)二甲苯(I)(24)-甲苯(II)(25)二甲苯(III)(26)中性树脂封片216统计学处理：计量资料均以x士s表示，采用SPSSl30统计软件进展分析，采用独立样本t检验和方差分析。当方差齐时，采用单项方差分析(ONEWAY ANOVA)。并用最小显著差值法(LSD法)法进展各组问的两两比拟；当方差不齐时采用近似F检验的Welch检验，组问的两两比拟采用DunnettT3法。以口=005为检验水准。22结果221造模后大鼠情况2211造模后大鼠的一般情况正常组大鼠精神状况良好，饮食、饮水与大小便证常，活动正常，反响灵敏，背毛平伏、浓密而有光泽，体重增长明显。造模组大鼠在实验期间均出现明显多饮、多食、多尿症状，且尿中出现白色絮状样浮游油脂。精神较为萎靡，活动稍少，体毛偏黄，少光泽。整个实验期间仅桃胶中剂量组造模鼠出现一例死亡。2212造模后大鼠的体重变化造模后各组大鼠的体重，经Levene检验方差齐性(F=0820，P=O370)，采用独立样本t检验(Independent SamplesT Test)有显著性差异(t一4536，P=0000)，说明经高能量饲料联合四氧嘧啶造模后，大鼠体重较前显著增加。第二章桃胶药理学作用的实验研究造模后大鼠的空腹血糖，经Levene检验方差不齐(F=47048，卢0000)，采用Satterrthwaite近似t检验有显著性差异(t=15525，P=0000)，说明大鼠造模后空腹血糖较前显著升高。2214造模后大鼠的血脂水平造模后各组HDLC无显著性差异(t=0714，P=0479)，LDL-C有显著性差异(t一10717，P=Oooo)，TG有显著性差异(t=-8005，P=0ooo)，TC有显著性差异(t一5519,P=0ooo)，明确造模后的糖尿病大鼠伴有血脂水平的升高。表23造模后大鼠的血脂水平(一X+S，m moIL)Tab2-3The bloodlipidlevel of diabetic rats(X+S，m molL)222桃胶的药理作用2221治疗后大鼠的一般情况桃胶治疗后，低剂量组变化不明显；中、高剂量组糖尿病大鼠多饮、多食、多尿症状改善，体重虽较前仍有增长，但与模型组大鼠比拟，体重增长较缓；体毛色泽较前改善，精神较前好转，活动较多，反响较为灵敏。硕士学位论文2222对DM模型大鼠体重的影响治疗后各组间大鼠体重比拟均有显著差异(F=7403，P=0000)，需进一步进展两两比拟。予以桃胶治疗后，各剂量组大鼠的体重与正常组比拟，虽仍有不同程度的增加(K005)，但与模型组比拟有显著性差异(K005)，明确桃胶有控制体重增长的作用。表2-4桃胶对DM模型大鼠体重的影响(x妇)Tab2-4The effct ofpeachresin onbody weightof diabetic rats(x士s)Note：#PO05 VS Normal；+P005)，而模型组和低剂量组空腹血糖明显高于正常组(PO01)，中、高剂量组空腹血糖显著低于模型组(P005)，高剂量组空腹血糖显著低于低剂量组(P005)。19第二章桃胶药理学作用的实验研究表25桃胶对DM模型大鼠空腹血糖的影响(x士s)Tab25The effct ofpeachresin on bloodglucosein diabetic rats(x姆)Note：+P001 VS Normal：4P001 VS Model：P005 VS Low dose2224对DM模型大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响各组大鼠thymus index和spleen index，经方差分析后明确有显著性差异(F=4314，P=0005；F=8354，P=0000)，需进一步进展两两比拟(采用LSD法)。在thymus index和spleen index方面，模型组与正常组比拟均有显著差异(尸O05)，与中、高剂量组比拟均有显著差异(尸O05)；低、高剂量组之间比拟均有显著差异(尸005)。明确桃胶能增加免疫器官重量，调节免疫功能。表26桃胶对DM模型大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响(x土s)Tab26The effct ofpeachresin on in diabetic rats(x士s)Note：“PO05，44POOI VS Normal：+P005，P001 VS Model：PO05，POOl vsLow dose硕士学位论文2225对DM模型大鼠Insulin、C peptide、ISI和GHbA。c的影响由下表可知，各组Insulin(F=31861，P=O000)、C肽(F=17831，P=O000)、ISI(F=97432，P=O000)， GHbAc(F=27221，P=O000)均有显著性差异，需进一步进展两两比拟。模型组胰岛素、C肽和糖化血红蛋白水平显著高于正常组(P001)，胰岛素敏感指数显著低于F常组(P001)。治疗后，高剂量组胰岛素、C肽和血红蛋白与模型组相比显著降低(P005)，而高剂量组上述几个指标较低剂量组有显著性差异(P005)。模型组LDLC、TG和TC显著高于正常组(尸001)，中、高剂量组LDLC、TG和TC显著低于模型组(P2l第二章桃胶药理学作用的实验研究001或尸005)，中、高剂量组血脂与正常组接近。由表中可知，低、中、高剂量组之间可见一定的量效关系趋势，但无显著性差异(P005)。表28桃胶对DM模型大鼠血脂的影响(Xs，mmolL)Tab28The bloodlipidlevel of diabetic ratsby peachresin(X 4-S，mmolL)Note：PO05，+PO01 MS Normal：4 P005，4#PO01 MS Model2-22-7对DM模型大鼠肝脏的病理形态学影响肉眼观察，F常组大鼠的肝脏外形正常，暗红色，被膜光滑、湿润。模型组和桃胶低剂量组大鼠的肝脏体积明显增大，包膜紧X，边缘钝圆，质地变软，有油腻感，表面无光泽，呈奶油黄色；桃胶中、高剂量组大鼠的肝体积、质地、色泽均较模型组有明显改善。200 X光镜下，正常组大鼠的肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，肝细胞无脂肪变性等异常改变；模型组与给药各组大鼠均有不同程度的肝细胞脂肪变性，以模型组最重，低、中、高剂量次之，其表现为肝小叶界限不清，肝细胞索排列紊乱，大局部肝窦消失，多数肝细胞出现严重的脂肪变性，以小叶中央静脉周围最为严重，肝细胞极度肿胀呈圆形，胞浆内可见大小不等，数量不一的脂滴空泡(脂肪硕士学位论文变性)，严重者脂滴相互融合，将细胞核挤向细胞一侧，酷似脂肪细胞。 (见附图11-15)22-8对DM模型大鼠肾脏的病理形态学影响肉眼观察 正常组大鼠的肾脏体积轻度肿大，包膜紧X，混浊无光泽，呈浊红色。镜下观察 正常组肾小球和肾小管大小、形态均下常，排列规如此。与证常组相比，模型组和低剂量组大鼠的肾小球体积明显增大，系膜基质增多，基底膜增厚；近曲小管上皮肿胀，有的小管腔内可见透明管型，远曲小管上皮胞浆空宽，显示气球样变性。肾小管、间质内炎症细胞浸润增多，且有糖原沉积；与模型组比拟，中、高剂量组大鼠的系膜基质增多、基底膜增厚情况减轻，肾小管、间质内炎症细胞浸润减少，无糖原沉积。 (见附图2125)229对DM模型大鼠胰岛的形态学影响200倍光镜下，正常组大鼠的胰岛呈椭圆形的细胞团，境界清楚，胰岛数与岛内细胞数较