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薄层色谱在医药方面应用的研究进展摘要 制备色谱技术在各个领域的迅速发展，使得研究和开发有中国特色的医药和攻克疑难杂症方面尤为重要，薄层色谱作为一种在物质分析和分离方面具有良好效果的制备方法，越来越受到人们的重视。文章列举了一些国内外近些年有关薄层色谱用于医药成分研究的动态，综述了一些有关薄层色谱的优势和具体的制备方法，希望能对未来研究医药方面的科研工作者提供一些帮助。关键词 薄层色谱、医药1.1前言 中国民族传统医药是在千年临床经验基础上总结而来的，有4O多个民族有自己的特色药物，有20多个民族有较完整的医药体系，可谓资源丰富，数量庞大，特色鲜明从中研究和开发创新药物，是我国减少仿制、增加自主创新、攻克重大疾病的有效途径目前中国少数民族传统医药开发主要靠提取、分离、纯化及活性追踪技术，虽然这类技术手段在民族药物资源的挖掘和开发中取得了关键性的进展，但是尚不能满足海量的民族医药资源的开发需要，大量宝贵的民族医药资源亟待开发和利用极有必要采取新思路、新技术、新手段，加快开发速度，弥补常规手段的不足。1现代制备色谱技术以快速、高效、高载样量和自动化为发展方向，融合了传统色谱的经典理论和现代科学技术中的众多创新之处，解决了许多传统色谱未能解决的问题与不足可用于少数民族传统医药样品的快速制备和分离1.2薄层色谱法的基本原理 色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）。2 化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物。 薄层色谱可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01g）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。 1.3薄层色谱法的应用1.3.1 娑罗子的薄层色谱鉴别 婆罗子为中国药典收载的少常用中药。该药具有疏肝、理气、和胃、止痛、杀虫之功效; 用于治疗肝胃气滞, 院腹胀满, 小儿疮积等病症; 近年来临床用于治疗冠心病, 此外, 还具有抗炎消肿的作用。采用不同展开系统对3 种不同来源的婆罗子进行薄层色谱实验, 结果表明, 婆罗子药材植物来源不同, 但所含化学成分基本相同。同时表明, 采用抓仿一甲醇(4 , l) 为展开剂,化学诸成分分离较好。另外, 通过对不同品种来源的婆罗子进行的秦皮甲素、秦皮乙素成分鉴定, 表明婆罗子中均含有秦皮乙素, 并不含秦皮甲素。31.3.2 微乳薄层色谱用于黄连类药物分离鉴定的研究微乳液是由表面活性剂、助表面活性剂、油、水等组分在适当配比下自发生成的无色透明、各向同性、低粘度的热力学稳定体系, 与胶束皆属缔合胶体, 但在某些特性上存在明显的差别。与胶束体系相比, 微乳体系具有更大的增溶量( 增溶量: 胶束体系5% 20% , 微乳体系60% 70%) 和超低界面张力(界面张力mN/m: 油水界面72, 胶束体系20,微乳体系10-2 10-4）。4 实验使用聚酰胺薄膜,以中性的含水量为75%的阴离子O/W型微乳液作为展开剂。在此层析条件中,黄连各生物碱的Rf值适中(药根碱0.47,小檗碱0.59,巴马丁0.67);黄连各生物碱间的vRf值均大于0105(药根碱与小檗碱0112,小檗碱与巴马汀0.08,药根碱与巴马汀0.20),供试品中生物碱及其它成分的斑点得以完全分离;色谱斑点规则清晰,圆而集中,不扩散,不拖尾;点样量更小,仅为常用量的一半,因而检出灵敏度显著提高。此外, 由于微乳展开剂含水量大, 湿度对实验无影响，不使用刺激性强的浓氨水及苯等有机溶媒, 减少了环境污染并降低了实验成本。51.3.3风湿宁胶囊的薄层色谱鉴别研究风湿宁胶囊由元胡、麻黄、青风藤、羌活、独活等多味中药组成, 具有祛风散寒、除湿通络、活血止痛的功能, 临床上用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、痛风性和风湿性及退行性关节炎等疾病的治疗, 具有较好的临床疗效。为了有效地控制其内在质量,保证临床疗效, 对处方中的麻黄、青风藤、元胡进行了定性鉴别。6元胡的薄层鉴别以正丁烷-氯仿-甲醇（10:6:1）展开剂，麻黄以氯仿-甲醇-浓氨作展开剂，青风藤以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水作为展开剂。实验所得色谱斑点清晰明显，实验方法简单易行，重现性好。1.4薄层色谱的制备步骤1.4.1薄层板制备7 除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.20.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。手工制板一般分不含粘合剂的软板和含粘合剂的硬板俩种。常用吸附剂的基本情况：颗粒的大小，太大洗脱剂流速快分离效果不好，太细溶液流速太慢。一般说来吸附性强的颗粒稍大，吸附性弱的颗粒稍小。氧化铝一般在100-150目。氧化铝分为碱性氧化铝，适用于碳氢化合物、生物碱及碱性化合物的分离，一般适用于PH为9-10的环境。中性氧化铝适用于醛、酮、醌、酯等PH约为7.5的中性物质的分离。酸性氧化铝适用于PH44.5的酸性有机酸类的分离。氧化铝、硅胶根据活性分为五个级，一级活性最高，五级最低。黏合剂及添加剂：为了使固定相（吸附剂）牢固地附着在载板上以增加薄层的机械强度，有利于操作，需要时在吸附剂中加入合适的黏合剂：有时为了特殊的分离或检出需要，要在固定相中加入某些添加剂。薄层板的活化：硅胶板于105-11烘30分钟，氧化铝板于150-160烘4小时，可得活性的薄层板。1.4.2点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样直径不超过5mm，点样距离一般为11.5cm即可。样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环环形色谱效应。因此配制样品溶液时应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。点样方式有点状点样和带状点样。1.4.3展开 展开剂也称溶剂系统，流动性或洗脱剂，是在平面色谱中用作流动相的液体。展开剂的主要任务是溶解被分离的物质，在吸附剂薄层上转移被分离物质，使个组分的Rf值在0.20.8之间并对被分离物质要有适当的选择性。作为展开剂的溶剂应满足以下要求：适当的纯度、适当的稳定性、低黏度 、线性分配等温线、很低或很高的蒸气压一级尽可能低的毒性。展开方式总的来讲平面色谱的展开有线性、环形及向心3种几何形式。 A 单次展开 用同一种展开剂一个方向展开一次，这种方式在平面色谱中应用最为广泛。（垂直上行展开，垂直下行展开，一向水平展开，对向水平展开）B 多次展开 单向对此展开，用相同的展开剂沿同一方向进行相同距离的重复展开，直至分离满意，广泛应用于薄层色谱法C 双向展开 用于成分较多、性质比较接近的难分离组分的分离。薄层展开展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.51.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至规定距离（一般为1015cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。1.4.4显色 显色剂可采用喷雾显色、浸渍显色或置适宜试剂的蒸气中熏蒸显色，用以检出斑点。 显色装置喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。 荧光薄层板可用荧光猝灭法；普通薄层板，有色物质可直接检视，无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻璃板，检视。1.4.5测定比移值 系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值。鉴别时，可用供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。除另有规定外，比移值（Rf）应在0.20.8 之间。81.4.6薄层扫描薄层扫描法指用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检测层析谱。对于中成药复方制剂，亦可用相应的原药材按需要组合作阴、阳对照，然后比较其薄层扫描图谱加以鉴别。使用仪器为薄层扫描仪。如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。1.5薄层色谱在中药研究的弊端 在中药的研究上, 通常是把一个成分复杂的、完整的药材通过化学手段分解出各种可以确定其化学结构的化学成分, 逐一研究其药理作用, 竭力找出最有效的活性成分, 结果将药材本身内部各种成分的综合作用和相互关系割裂开来。分析工作者沿着这条思路也力求运用各种分析检测手段测定某种有效成分, 以某一活性成分含量的多少来判断某种药材的质量。但是对于中医理论指导下的中药, 尤其是复方制剂, 任何一种活性成分均不能反映中医用药所体现的整体疗效。就是说分析的越细, 目标越缩小, 离中药的整体疗效的距离越远。9参考文献：【1】刘庆山等。现代制备色谱技术在少数民族医药快速研究体系中的应用。北京：中央民族大学 中国少数民族传统医学研究院 2009【2】刘烨大豆提取物中异黄酮成分的分离与纯化湖南师范大学 2007【3】杜向红等，娑罗子的薄层色谱鉴别。郑州：河南省人民医院，河南省药品检验所，河南省双益药具科技开发公司 1999【4】康纯等。微乳薄层色谱用于黄连类药物分离鉴定的研究。江苏：扬州大学，扬州市药品检验所 1999【5】雷厉，宋志宏，屠鹏飞，吴立军，陈发奎反相高效液相色谱法制备。松果菊苷标准品j，色谱，2001，19(3)：200502【6】 张玲, 赵建平, 张美玲。风湿宁胶囊的薄层色谱鉴别研究。山西省：中医药研究院 2004【7】国家药典委员会. 中国药典, 部 S . 北京: 化学工业出版社,2010: 附录V .【8】谢培山。中药制剂色谱指纹图谱( 图像) 鉴别。广东广州：广州市药品检验所2000【9】周同惠等。纸色谱和薄层色谱。北京：科学出版社，1989【10】霍斯泰特曼K， 马斯顿A，霍斯泰特曼 M 著，赵维民，张天佑译。制备色谱技术。北京：科学出版社，2000【11】张天佑。逆流色谱技术。北京：北京科学技术出版社，1991【12】袁黎明等。制备色谱技术及应用。北京：化学工业出版社，2006【13】危华玲, 杨嘉珍, 潘洪平。复方野葛根胶囊的薄层色谱鉴别研究。广西南宁:广西壮族自治区人民医院 【14】张菲博落回及银杏叶中有效成分的提取制备分离2004，湖南师范大学【15】鞠兴荣，袁建，汪海峰高效液相色谱法测定大豆提取物中大豆异黄酮的含量川中国粮油学报，2000，15(4)：2629【16】潘娓婕，刘谦光酸水解法从葛根中提取分离葛根素和大豆苷元叨天然产物研究与开发，2000，12(6)：6669
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