实验一普通光学显微镜的结构与使用方法.ppt

实验一普通光学显微镜结构与使用方法 杭州师范大学陈建明 一 实验目的和要求 了解显微镜的构造和各部分的作用 掌握显微镜的使用技术和保养措施学会简易临时玻片的制作方法和生物绘图方法 二 实验内容 在显微镜下练习观察动 植物玻片标本 制作洋葱鳞叶内表皮细胞临时装片 进行显微镜操作练习 在显微镜下观察池塘水样中的微小生物 三 相关知识与实验原理 要知道的几个重要的分辨率 人眼 0 2mm 250mm光学显微镜 0 2um电子显微镜 0 2nm 显微镜是观察细胞的主要工具 根据光源不同 可分为光学显微镜和电子显微镜两大类 前者以可见光 紫外线显微镜以紫外光 为光源 后者则以电子束为光源 1 光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成 照明系统 包括光源和聚光器 光学放大系统 由物镜和目镜组成 是显微镜的主体 机械装置 用于固定材料和观察方便 包括镜台 载物台 调节器和 物镜转换器 旋转器 等 尼康E 600显微镜 显微镜概述 普通光学显微镜的构造 2 荧光显微镜 尼康E800荧光DIC显微镜 荧光显微镜照片 微管呈绿色 微丝红色 核蓝色 3 激光共聚焦扫描显微镜 LCSM照片蓝色为细胞核 绿色为微管 4 暗视野显微镜darkfieldmicroscope 聚光镜中央有挡光片 视野背景是黑的 只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜 物体边缘是亮的 可观察4 200nm的微粒子 分辨率比普通显微镜高50倍 把透过标本的可见光的光程差变成振幅差 从而提高了各种结构间的对比度 使各种结构变得清晰可见 在构造上 相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处 环形光阑 annulardiaphragm 位于光源与聚光器之间 相位板 annularphaseplate 物镜中加了涂有氟化镁的相位板 可将直射光或衍射光的相位推迟1 4 5 相差显微镜 Fourtypesoflightmicroscope Bright fieldmicroscope theimageobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughacellinculture Dark fieldmicroscope thecellappearsasabrightobjectagainstadarkbackground Phase contrastmicroscope visualizinglivingcells Differential interference contrastmicroscope visualizinglivingcells 普通光学显微镜的基本结构 普通光学显微镜的构造可分为两部分 一为机械装置 二为光学系统 机械装置由镜座 镜筒 物镜转换器 载物台 推动器 粗动螺旋和微动螺旋等组成 光学系统由目镜 物镜 聚光器 光源 滤光片 虹彩光圈等组成 显微镜的结构 普通光学显微镜基本构造 光学显微镜基本结构 1 照明灯 Lamp 2 聚光器 Condenser 3 载物台和切片夹 Mechanicalstageandspecimenretainer 4 推进器 Mechanicalstageadjustmentknob 5 物镜 Objectives 6 粗细螺旋 Courseandfinefocusknob 7 目镜 Oculars 8 照相机等接口 Connectiontocamera etc 1 物镜物镜 objective 是光学显微镜成像系统中决定其分辨率或叫分辨本领的最关键部件 物镜标识 2 目镜目镜的作用是把物镜放大的实象再放大一级 并把物象映入观察者的眼中 实质上目镜就是一个放大镜 显微镜的分辨率能力是由物镜的数值孔径所决定的 而目镜只是起放大作用 对于物镜不能分辨出的结构 目镜放的再大 也仍然不能分辨出 3 聚光镜聚光镜装在载物台的下方 小型的显微镜往往无聚光镜 在使用数值孔径0 40以上的物镜时 则必须具有聚光镜 聚光镜不仅可以弥补光量的不足和适当改变从光源射来的光的性质 而且将光线聚焦于被检物体上 以得到最好的照明效果 显微镜的光学原理 成像原理光路 光源 虹彩光圈 聚光镜 通光孔 标本 一定要透明 物镜 镜筒 目镜 眼 显微镜的放大倍数 四 实验器材 显微镜 擦镜纸 镊子 小剪 载玻片 盖玻片 解剖针 表面皿 吸水纸 碘液 清水 香柏油 二甲苯 洋葱鳞茎 棉花老根横切玻片标本 池塘水样 五 实验方法和步骤 一 显微镜的使用1 取镜和安放置显微镜于平稳的实验台上 镜座距实验台边沿约为3 4cm 镜检者姿势要端正 取 放显微镜时应一手握住镜臂 一手托住底座 使显微镜保持直立 平稳 切忌用单手拎提 且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察 以减少眼睛疲劳 也便于边观察边绘图或纪录 2 观察前的准备工作 1 观察者要养成显微镜镜检的工作习惯 观察时要双眼同时睁开 一边观察一边进行记录或描绘 2 观察时所用的材料 药品和各种器具要预先准备好 3 显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常 并对载物台 目镜 物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作 然后进行合轴调节 3 低倍镜的操作置显微镜于固定的桌上 接通电源 打开光源 将标本片放在载物台上 用标本夹夹住 调节标本移动螺旋 使观察的目的物处于物镜的正下方 调节粗调螺旋 使物镜 10 与标本靠近 眼睛在测向注视物镜 防止物镜和载玻片相碰 张开双眼向物镜里观察 如果见到目的物 但不十分清楚 可用细准焦螺旋 至目的物清晰为止 通过玻片夹推进器慢慢移动玻片 认真观察标本各部分 找到合适的目的物 仔细观察并记录所观察到的结果 4 高倍镜的操作使用高倍镜前 必须先用低倍镜观察 发现目的物后将它移至视野正中处 旋动转换器换高倍镜 如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动 这说明原来低倍镜并没有调准 目的物并没有真正找到 必须用低倍镜重新调节 如果高倍镜下观察目的物有点模糊 调节细准焦螺旋 直到视野清晰 调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系 防止镜头与载玻片强力接触 损坏镜头或载玻片 5 油镜的操作如果用高倍镜目的物未能看清 可用油镜 先用低倍镜和高倍镜检查标本片 将目的物移到视野正中 在载玻片上滴一滴香柏油 将油镜移至正中 缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中 刚好贴近载玻片 然后再用细准焦螺旋微微向上调 切忌不用粗准焦螺旋 即可 油镜观察完毕 用油镜纸将镜头上的油揩净 另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头 再用擦镜纸揩干 应特别注意不要因在下降镜头时用力过猛 或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片 6 换片观察完一个标本后 如果想要再观察另一标本时 需先将高倍物镜 或油竟镜 转回到低倍物镜 取出标本 按放片的方法换上新片 即可观察 千万不可在高倍物镜 或油镜 下换片 以防损坏镜头 7显微镜使用后的整理观察结束后 调节光源到最小再关掉电源开关 调节粗调螺旋 使载物台下降到最低 取下玻片 擦干净镜体 罩上防尘罩 然后放回原处 六 洋葱鳞叶内表皮细胞临时装片制作 取一片干净的载玻片 用滴管在其中央滴一滴蒸馏水 取洋葱鳞茎 把它切成八瓣 剥下一片新鲜的肉质鳞叶 用刀片在其内表面划一个边长为5mm的正方形 然后用镊子撕下正方形块内表皮 将其置于载玻片上的水滴中 注意表皮的外面应朝上 如果内表皮发生卷曲 应细心用解剖针将其展平 盖上盖玻片 注意加盖玻片时 应该用镊子夹住盖玻片一侧 使盖玻片另一侧边缘与水滴边缘相接触 然后慢慢放下 直到放平为止 这样可使盖玻片下的空气逐渐被水挤出 以免产生气泡 影响观察 如果水太多浸出盖玻片外 可用吸水纸将多余的水吸去把装好的片子放在显微镜载物台上 先用低倍接物镜观察 再换用高倍接物镜观察细胞的详细结构 七 池塘水样中微小生物的观察 到绿色池塘中取出水样 取一洁净的载玻片 在其中央滴一小滴池塘水样 盖上盖玻片 把装好的片子放在显微镜载物台上 先用低倍接物镜观察 再换用高倍接物镜观察微小生物的形态和细胞结构 八 显微结构图的绘制 生物绘图中绘出的图要清楚 并正确的表示出形态构造的特点 绘图注意事项如下 1 绘图要用黑色硬铅笔 不要用软铅笔或有色铅笔 一般用2H铅笔为宜 2 图的大小及在纸上分布的位置要适当 一般画在靠近中央稍偏左方 并向右方引出注明各部名称的线条 各引出线条要整齐平列 各部名称写在线条右边 3 画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓 再依照轮廓一笔画出与物象相符的线条 线条要清晰 比例要准确 较长的线条要向顺手的方向运笔 或把纸转动再画 同一线条粗细相同 中间不要有断线或开叉痕迹 线条也不要涂抹 4 绘出的图要正确 观察时要把混杂物 破损 重叠等现象区别清楚 不要把这些现象绘上 5 图的明暗及浓淡 应用细点表示 不要采用涂抹方法 点细点时 要点成圆点 不要点成小撇 6 整个图要美观 整洁 还要特别注意准确性 九 显微镜的保养及注意事项 1 油镜使用完毕 先用擦镜纸擦去镜头上的油 再取一张擦镜纸 滴上少量的二甲苯擦拭 然后再取另一张新擦镜纸将镜头上残留的二甲苯擦净 否则粘固透镜的胶质会被二甲苯溶解 日久镜片易移位脱落 2 下降聚光器 打开虹彩光圈 使反光镜垂直于镜座 以免积聚灰尘 3 用绸布将镜身擦拭干净 切不可用手擦拭 除去灰尘 油污 水汽 以免生锈长霉 4 使显微镜的各部件恢复回原位 下降镜筒 使物镜呈 八 字形置于载物台上 然后将显微镜送回镜箱中 5 显微镜应存放在干燥阴凉的地方 不要放在强烈的日光下暴晒 霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂 硅胶 如长时间不用 则光学部分应卸下放在干燥器中 以免受潮生霉 6 显微镜应严禁与挥发性药品或腐蚀性药品放在一起 如碘片 盐酸 硫酸等药品 八 实验报告及思考题 实验报告结果部分要求分别绘出你在显微镜下观察到的洋葱表皮细胞的结构 并注明细胞壁 细胞质 细胞核 液泡 思考题与练习1 显微镜的构造分哪几部分 各部分有什么作用 2 反复练习使用低倍镜及高倍接物镜观察切片 使用时应特别注意什么问题 3 如何计算显微镜的放大倍数 你现在所用的显微镜可以放大多少倍 4 使用显微镜过程中 应做好哪些保养工作 显微镜下看到的洋葱内表皮细胞及示意图 实验报告格式 一 实验项目名称二 实验目的三 实验基本原理四 主要仪器设备及耗材五 实验步骤六 实验数据及处理结果七 思考讨论题或体会或对改进实验的建议