2016医学检验技术本科盐水介质交叉配血.ppt

盐水介质交叉配血 盐水介质交叉配血 实验原理 交叉配血试验亦称血液相容性试验 受血者与供血者的交叉配血反应体系中 若血清存在针对红细胞膜上ABO血型或其他血型抗原的IgM抗体时 可直接在离心力作用和盐水介质条件下 抗原抗体结合而发生肉眼可见的凝集 亦可在补体参与下进一步引起溶血效应 盐水介质交叉配血 实验原理 生理盐水介质交叉配血试验包括主次侧 主侧检查受血者中是否存在破坏供血者红细胞的IgM类红细胞抗体或补体依赖性意外抗体 次侧检查供血者血清中是否存在破坏受血者红细胞的完全性红细胞抗体或补体依赖性意外抗体 盐水介质交叉配血 实验原理 生理盐水介质交叉配血试验包括主次侧 主侧检查受血者中是否存在破坏供血者红细胞的IgM类红细胞抗体或补体依赖性意外抗体 次侧检查供血者血清中是否存在破坏受血者红细胞的完全性红细胞抗体或补体依赖性意外抗体 盐水介质交叉配血 实验原理 由于人类ABO血型抗体是以IgM型为主 这种抗体可以结合多个盐水介质中悬浮的红细胞 导致红细胞凝集 也可以激活补体 导致红细胞膜损伤 出现溶血 此试验主要检查受血者或献血者血清中是否存在破坏对方红细胞的不规则完全性 IgM型 或补体依赖性红细胞抗体 并可以验证ABO血型鉴定是否正确 确保受血者和献血者血液相容 防止发生急性输血性溶血反应 盐水介质交叉配血 器材 试剂与标本 1 器材记号笔 试管 试管架 滴管 载玻片 离心机 显微镜 玻片 2 试剂生理盐水 3 标本2 4ml抗凝或不抗凝供血者及受血者血液标本 盐水介质交叉配血 操作步骤 1 离心供血者 受血者血液标本 使红细胞与血清分离 用生理盐水洗涤供血者及受血者红细胞3次 配成3 5 的生理盐水红细胞悬液 2 取洁净小试管2支 分别标记为主 次侧管 盐水介质交叉配血 操作步骤 3 在主侧管中加入受血者血浆或血清2滴及供血者红细胞悬液1滴 次侧管中加入供血者血浆或血清2滴及受血者红细胞悬液1滴 立即混匀 4 将2支试管放入离心机 以1000 g离心15s 盐水介质交叉配血 操作步骤 5 取出试管 首先肉眼观察上清液有无溶血现象 再轻轻摇动试管 直至红细胞成为均匀的混悬液 观察有无红细胞凝集 6 取1张载玻片 用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液各1滴 均匀滴放在载玻片上 用显微镜观察并记录结果 盐水介质交叉配血 操作步骤 盐水介质交叉配血 实验结果 1 主侧和 或 次侧管红细胞无凝集或无溶血 表示受血者和供血者两血盐水介质配血相容 供血者血液可以输注 2 若主侧和 或 次侧管或单独1管出现红细胞凝集和 或 溶血则表明两血不相容 献血者血液不可供受血者输注 谢谢 盐水介质交叉配血 临床意义 交叉配血试验是输血前检验的必备试验之一 用于综合性检测供 受者血液的不相容性 防止发生溶血性输血不良反应 盐水介质交叉配血 方法学评价 盐水介质交叉配血试验仅能检查IgM类完全性抗体参与的凝集或溶血反应 不适于IgG的检测 因此临床上不宜单独采用本法进行配血试验 盐水介质交叉配血 注意事项 1 盐水介质交叉配血试验是临床输血前最基本的相容试验 此试验灵敏度不高 特异性不强 仅能检测完全性 IgM型 红细胞血型抗体 不能检测不完全性 IgG型 抗体 在临床实际工作中 盐水介质交叉配血完成后 必须增加另外一种可以检测不完全抗体的配血方法 以保证输血安全 盐水介质交叉配血 注意事项 2 应用盐水介质交叉配血试验时 出现两血不相容 应当首先重新进行献血者和受血者ABO血型鉴定 排除ABO血型鉴定错误导致的两血不相容 3 溶血标本不得用于交叉配血试验 盐水介质交叉配血 注意事项 4 冬季实验室温度较低时出现红细胞凝集时 应当排除受血者存在自身冷凝集素 为排除冷冷凝集素的干扰 可以把主次侧试管放置在37 水浴箱内升温一定时间 轻轻摇动试管 取出试管后立即吸取试管内红细胞悬液放置显微镜下观察结果 亦可将反应并离心后的主次侧试管用预温至37 生理盐水洗涤3次 重新离心后观察结果 盐水介质交叉配血 注意事项 5 进行盐水介质交叉配血试验时 红细胞悬液加入血清后 采用立即离心法 即刻观察试验结果 不宜在室温下放置 以免影响试验结果 盐水介质交叉配血 思考题 1 盐水介质交叉配血试验的优缺点有哪些 2 影响盐水介质交叉配血试验的因素及可能的消除方法是什么 微柱凝胶介质交叉配血试验 试验原理将供血者 受血者红细胞和血浆 清 分别按照交叉配血的试验要求加入到含有抗人球蛋白试剂的微柱凝胶柱主侧和次侧管的反应室中 置37 孵育器中孵育一定时间 如果血浆 清 中存在有针对红细胞抗原的IgG或IgM型血型抗体 经孵育和离心后红细胞将发生凝集 并形成红细胞凝集团块 凝胶柱中的凝胶具有分子筛的作用 从而阻止凝集的红细胞下沉 而留在微柱的表面 如血清中不含有针对红细胞抗原的抗体 经过孵育 离心后 红细胞仍以单个分散细胞形式存在 经离心力作用顺利通过凝胶分子筛 下沉到微柱管的底部而形成红细胞扣 标本 试剂与器材1 标本采用2人ABO同型的EDTA抗凝血各3ml 2 试剂用于交叉配血试验的抗人球蛋白微柱凝胶试验卡 红细胞稀释液 3 器材移液器 试管架 37 专用孵育器 微柱凝胶试验卡 专用离心机 微柱凝胶试验卡 操作步骤1 离心受血者 供血者血液标本 使血浆和红细胞分离 用生理盐水洗涤受血者红细胞3次 再用凝胶卡配套的红细胞稀释液配成1 红细胞悬液 2 取出交叉配血试验的微住凝胶抗人球卡并标记好主侧和次侧孔 撕去铝箔纸 垂直放置卡槽内 3 主侧孔内加入供血者1 红细胞悬液50ul和受血者血浆25ul 次侧加入受血者1 红细胞悬液50ul和供血者血浆25ul 先加红细胞悬液后加血浆 4 将加样后的微住凝胶卡卡置于专用孵育器37 孵育15分钟 5 取出试剂卡 将孵育好的试剂卡置于专用离心机离心10分钟 6 取出试剂卡 肉眼观察结果 试验结果1 阴性结果若主侧和次侧管内红细胞均完全沉降与凝胶管底部 表明受血者与供血者血液相容 供血者血液可以输给受血者 2 阳性结果若主侧和次侧管或单独一侧试管内红细胞凝集快位于凝胶表面或凝胶中 和 或 出现溶血 提示受血者与供血者血液不相容 注意事项1 凝胶介质交叉配血试验采用凝胶微柱技术 通过凝胶分子筛作用可以提高交叉配血试验的特异性和灵敏度 可同时检出IgG型和IgM型红细胞血型抗体 因此在临床输血检验中 可以不做盐水介质交叉配血试验 2 由于抗球蛋白试剂在装配试剂过程中已经加入到凝胶微柱内 进行离心时血清蛋白成分和红细胞因其各自的重力加速度不同而以不同的速度通过凝胶微柱 从而消除了血清中未结合的球蛋白与抗球蛋白试剂结合的可能性 因此使用凝胶微柱进行交叉配血试验时 红细胞可不洗涤 且对于阴性的交叉配血试验结果也不再需要加入IgG型血型抗体致敏的阳性对照细胞验证阴性结果的有效性 3 试验结果易判定且可靠 直观4 试验结果易于保存 也可以使用数码照相留取实验结果存档备用 5 凝胶介质交叉配血试验的操作容易标准化 因此能减少不同人员在操作上的差异 保证试验的准确性 也可以使用全自动化仪器进行交叉配血试验 6 不能使用溶血标本进行交叉配血试验 7 凝胶卡使用前要仔细检查凝胶中有无气泡 凝胶表面液体是否干涸 凝胶卡外观正常时才能使用 谢谢