药理学实验基本知识.ppt

主讲老师胡建平 药理学实验基本知识 第一章药理学实验须知第二章药理学实验常用仪器及技术第三章实验数据的简单统计学 该次课的内容安排 第一章药理学实验须知 一药理学实验的重要性药理学实验是药理学教学的一个重要的部分 用来验证一些药理学理论部分内容 二药理学实验课程的目的选做一些经典 实用的实验 使得学生熟悉药理学实验的基本操作方法和技能 了解新药评价和开发临床前的一些药效学和毒理学的一些基本技能 培养学生独立思考 操作 分析 解决问题的能力 第一章药理学实验须知 三药理学实验课前 课中 课后的要求 一 实验前仔细阅读实验指导 了解实验的目的 要求 步骤和操作程序 结合实验内容复习有关理论 做到充分理解 预测实验应得到的结果 写出预习实验报告 自己随意写 对自己做实验有用就好 二 实验时实验器材安放整齐 清洁有序 按照实验步骤 以严肃认真的态度循序操作 不得进行与实验无关的活动 注意保护实验动物 以免影响实验结果 爱护实验器材和节约药品 仔细观察实验过程出现的现象 随时纪录实验数据 联系理论进行思考 发生什么 为何这样 生理意义 三 实验后把实验用具整理就绪 如有损坏短缺 应向教师报告 整理实验数据 认真书写实验报告 按时上交评阅 四实验报告的书写 药理学实验报告姓名 班级 组别 日期 实验题目 实验目的 实验对象 实验步骤 实验结果 分析与讨论 结论 实验结果的描述文字上力求从简 最好用图表表示 填写实验结果时 要坚持真实性和科学性 在分析讨论中 可以结合理论部分进行分析 或对实验得到的规律性的东西进行分析讨论 提出见解 避免抄书 结论部分的东西是本次实验获得的最为基本的规律性内容 文字务必简明扼要 不可凭空想象加入一些本实验没有证实的内容 五实验室规则1遵守学习纪律 准时上下课 实验期间不得借故外出或早退 特殊情况下 需要请假 2必须认真地进行实验操作 观察实验结果 实验期间要保持安静 不得进行任何与实验无关的活动 3实验数据及实验纪录 必须经过教师审核 否则不能结束实验 4各组的仪器 用品 由本组使用 不得与别组调换 以免混乱 如遇到仪器损坏或丢失 应报请教师处理 5爱护公共财物 注意节约各种实验用品 实验动物按组发给 如需要补充使用 须经教师同意之后才能补领 6保持实验室清洁整齐 随时清除污物 实验完毕后 应将实验器材 用具收拾妥当 将手术器械擦洗干净 清点数量 放回原处 经教师检查之后才能离开实验室 一分光光度计二离心作用三动物的捉持四动物的给药方法五动物的取血方法六动物的处死方法 第二章药理学实验常用仪器及技术 一分光光度计 仪器介绍分光光度计有几个部件 其中包括光源 提供选择波长的的单色器 可变狭缝 样品架 光探测器和仪表 不同的光谱区要使用不同的光源 在可见区 400nm 700nm 和紫外区 200nm 400nm 分别使用钨灯和氘灯 在这些区域的光波长是由分光光度计中的单色器选择的 单色器是由棱镜或衍射光栅构成的 在可见区和紫外区给出窄带波长的光 光由可控制光强的可调狭缝进入样品 然后由光电管探测透过的光 并被电流计所测量 下图为分光光度计的部件原理图 紫外和可见光谱的应用紫外和可见光谱最为主要的应用是 测量溶液中物质的浓度 其基本原理是 光吸收值和吸光物质的浓度成正比 二离心作用离心作用是装有固体颗粒悬浮液的容器迅速旋转的过程 显著增加的重力场使颗粒沉降 离心力或引力与角速度的平方 2 乘以距转动中心的径向距离r cm 成正比 角速度以每分钟的转速 rpm 来表示 离心力由下式给出 F 1 12 10 5 2 r 从上式可以看出 对于径向距离为7cm的转子 若角速度为10000rpm 则离心力为8000g 成功的离心作用取决于两个因素 1 离心时间和 2 发挥的g值 如下表 表1在离心场中沉降生物颗粒所需的重力和时间的比较 所以使用不同的g力 不同的离心t的差速离心法可用来分离细胞组分 三动物的提持 限小鼠和家兔 1小鼠的提持 2种方法 双手提斥法右手提起鼠尾 放在鼠笼 或其他粗糙面 上 向后轻拉其尾 小鼠即固定于鼠笼上 迅速用左手拇指和食指捏住小鼠头颈部皮肤 并以左手小指 无名指压其尾部于手掌尺侧 单手提持法只用左手 先用食指和拇指抓住小鼠尾巴后用手掌尺侧和小指夹住尾根部 然后用左手拇指和食指捏住头颈部皮肤2家兔的提持一只手抓住兔颈背部皮肤 将兔轻轻提起 另一只手托住臀部 使兔呈蹲坐姿势 切不可用手握持双耳提起兔子 1灌胃方法2皮下注射方法3肌内注射方法4腹腔注射方法5静脉注射方法 四动物的给药方法 限小鼠和家兔 动物给药方式一 灌胃方法 小鼠的灌胃方法左手捉持小鼠 腹部朝向操作者 右手持灌胃管 经口角插入口腔 使灌胃管与食管成一直线 将灌胃管沿上腭壁缓慢插入食管2cm 3cm 灌胃管的前端即达膈肌部位 此时操作者可有抵抗感 如动物安静 呼吸无异常 即可将药液注入 操作宜轻柔 防止损伤食管 如遇阻力应抽出灌胃管重新插入 若将药液误注气管 动物立即死亡 家兔的灌胃方法给兔灌胃需两人合作 一人坐好将兔躯体夹于两腿之间 左手抓住双耳 固定其头部 左手抓住两前肢 使兔头稍向后仰 另一人将开口器横放于兔口中 慢慢旋转开口器 将兔舌压住 并固定之 将8号导尿管经开口器中央孔 沿上腭壁慢慢插入食管15cm 18cm 为避免误入气管 可将导尿管的外口端放入清水中 无气泡逸出方可注入药液 再用少量清水冲洗管内残存药液 灌毕 慢慢拔出导尿管 取出开口器 小鼠的皮下注射方法一般需要两个人合作 一人左手捏小鼠头部皮肤 右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定 另一人左手提起背部皮肤 右手持注射器将针头刺入皮下 稍稍摆动针头 若容易摆动则表明针尖确实位于皮下 此时注入药液 拔针时 右手捏住针刺部位片刻 以防止药液逸出 也可一人操作 将小鼠放在粗糙的平面上 左手拉小鼠尾巴 趁小鼠向前爬动时 右手持注射器迅速将针头刺入小鼠背部皮下 推注药液 家兔的皮下注射方法通常选择背颈部皮下注射 操作者左手拇指 食指和中指提起背颈部皮肤 使其折成三角体 右手持注射器自皱折下方刺入皮下 松开皮肤注入药液 动物给药方式二 皮下注射方法 小鼠的肌内注射方法需两人合作 一人左手捏小鼠头部皮肤 右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定 另一人左手固定注射侧后肢 右手持注射器 将针头刺入外侧股部肌内 小鼠肌肉较少 肌内注射不常用 家兔的肌内注射方法注射部位为臀部和股部肌肉 动物给药方式三 肌内注射方法 小鼠的腹腔注射方法左手捉持小鼠 将腹部朝上 头部下倾 右手持注射器在下腹左侧或右侧 避开膀胱 向头端穿刺 针头与皮肤呈30 刺入腹腔 有落空感 注入药液 注意针头不要刺入太深 太靠上 以免刺破肝脏 家兔的腹腔注射方法方法几乎与小鼠相同 动物给药方式四 腹腔注射方法 小鼠的静脉注射 多用尾静脉注射 将小鼠固定在一铁丝笼或特制筒内 使小鼠尾露在外面 用75 乙醇溶液涂擦尾巴或在45 左右温水中侵泡30s 使尾静脉充血 注射时 左手拇指和食指捏持鼠尾 右手持注射器 选择尾巴两侧静脉 使针头与鼠尾成3 5 几乎平行 进行静脉穿刺 如推注药液无阻力 局部皮肤发白则表明针头未刺入血管 退出针头重新穿刺 注意静脉穿刺时应从远端 近尾尖 开始 不仅容易穿刺 而且还可向近端多次穿刺 注射完毕 用棉球按压穿刺口止血 家兔的静脉注射 多用耳缘静脉 注射部位去毛并用酒精棉球涂擦 用左手拇指和中指捏住兔耳尖部 以食指垫于耳下 右手持注射器 从静脉远端将针头刺入血管 将药液推入 如推注时有阻力 局部出现肿胀 表明针头不在血管内 应立即拔针重新穿刺 注毕要用棉球压迫针眼几分钟止血 动物给药方式五 静脉注射方法 小鼠剪尾采血将小鼠固定在铁丝笼或特别筒内 使鼠尾露在外面 剪掉鼠尾1mm 2mm 用拇指和食指由尾根向尾尖按捏 血液即从尾尖流出 小鼠每次可采血0 1ml 注意 只剪去尾尖 如剪去过多组织 反而流血少 下次采血时 只需将尾尖血痂jia剪掉就可以了 家兔心脏采血将家兔被部固定 剪去左侧胸部相当于心脏部位的被毛 用碘酒和酒精消毒皮肤 选择心脏跳动最明显处穿刺 一般由胸骨左缘外3mm处刺入兔的第三肋间隙 穿刺时 最好用左手触诊心脏 以作配合 当针头接近心脏时 就会感到心脏的跳动 这是需将针头再向里穿刺 便可进入心室 由于心脏的搏动 血液会自然进入注射器 如认为针头已经进入心脏 但抽不出血液 可将针头稍微退出或进入一点 一般来讲 心脏采血经6 7天后 可以重复进行 采血量大约20ml 30ml 五动物的取血方法 限小鼠和家兔 家兔耳缘静脉采血拔去耳缘被毛 用灯泡照射加热耳朵或75 酒精涂擦局部 使静脉扩张 再用石蜡油涂擦耳缘 防止血液凝固 耳受热之后用小血管夹夹紧耳根部 用粗号针头逆静脉回流方向刺破静脉或用刀片切开静脉 血液可自动流出 一般可采血2ml 3ml 取血后棉球压迫止血 家兔耳中央动脉采血将兔子置于兔固定箱内 用酒精棉球擦揉兔耳片刻 使其充血 在兔耳中央有一条纵行 较粗 颜色鲜红的中央动脉 左手固定兔耳 右手持注射器 一般用6号针筒 不可太细 在中央动脉的末端 沿动脉平行地向心方向刺入动脉 慢慢回抽针筒 动脉血立即进入针筒 一次可取血15ml 因耳中央动脉容易发生痉挛收缩 容易导致采血无法进行 因此必须要先让兔耳充分充血 并在痉挛前迅速完成抽血 抽血后棉球压迫止血 五动物的取血方法 限小鼠和家兔 六动物的处死方法 限小鼠和家兔 小鼠的处死 常采用颈椎脱臼法 用左手拇指和食指将其头部紧紧按在硬的物体上 右手捏住鼠尾 用力向后上方牵拉 使颈椎脱位 小鼠可瞬间死亡 家兔的处死 常采用空气栓注法 用50ml 100ml的注射器 往家兔的耳缘静脉内注射20ml 40ml的空气量 使之发生栓塞而死亡 一均数二标准差 SD 三标准误和t检验 第三章实验数据的简单统计学 实验数据的统计的意义 药理学实验所得的数据一般都需要经过统计学处理 以便通过分析样本 推断总体 透过偶然 找出规律 统计处理数据资料的系统知识比较丰富 这里仅仅对处理药理学实验结果的需要 对实验结果的均数 标准差 标准误以及计量资料的显著性测定做一个简单的介绍 以供学生对实验结果作出正确的判断 一均数 均数也就是算术平均值 统计学上用表示 均数是分析计量数据最基本的指标 它表示一套变量值的集中趋势 平均水平 不仅可以给人一个简明概括的印象 并可用来作事物间的比较 均数的计算公式为 其中为总和 x1 x2 xn等为各次的测定值 变量 n为变量的个数 即样本容量 而为各变量的总和 二标准差 SD 均数只是集中趋势的指标 不能反映一组数据与均数的离散程度 特别是数据不符常态分布时 更是如此 而标准差是最为常用的 最能完整地反映全套变量值离散程度的统计指标 一般用SD表示 而计算SD的公式为 式子中x为每一个变量值 为均数 n为变量的个数 例1根据某年级12名女学生收缩压的数据 见下表 求其均数和标准差 表一12名女学生收缩压数据 表一12名女学生收缩压数据 表一12名女学生收缩压数据 解 将有关数据带入公式 1 求出均数代入公式 2 求出标准差所以可以得到 从上面的例子也可以看出 标准差反映了各变量离开均数的分布情况 在均数与单位相同的情况下 标准差越大 则表示各变量离开均数越远 诸变量离散程度也越高 反之 标准差越小 则表示离均数越近 离散程度越低 偏差小 精密度高 三标准误 SE 和t检验 标准误和标准差不同 它表示的是多次测定的均数与总体均数的离散程度 也就是总体中各样本的均数的标准差 计算公式如下 其中 SE为标准误 SD为标准差 n为样本数 值得注意是 SE的目的主要是为了用于两个均数差别的显著性检验之中 t检验的定义 在抽样研究中 经常遇到两个样本均数的有所差别 对于两个均数的差别不可以仅看表面数值的不同而匆忙推论出其本质的差异 必须考虑到引起这种差别有两种可能性 1 差别仅仅又抽样误差所引起 它们之间没有本质上的误差 2 差别已经超出了抽样误差所引起的范围 它们之间有本质差异 除t值之外 在得到组间差异的概率之前还需要知道自由度 上述例子的自由度为 通过t值和自由度f值可以从t 分布表上找到组间差异的概率P 两者差别不大且接受抽样误差的概率 其中t值的判断标准 表二 和t 分布表 表三 如下 例题 为了研究老年慢性支气管炎患者24小时尿中17 酮类固醇的排出量与正常人有无差别 分别调查了60 69岁患者14人与健康者11人 测的结果如表四 问患者尿中17 酮类固醇排出量与正常人有无不同 解 将上表数据代入公式 4 得到t 1 82 由于f 11 1 14 1 23 我们通过查表三 我们可以看到t0 05 23 2 069 t0 01 23 2 807 所以t0 05 可以得到结论 健康人和支气管炎患者的尿中17 酮类固醇含量的误差由抽样误差导致 两者相差不大 谢谢同学们的聆听