2019-2020年高中生物第1章微生物技术第3课时微生物数量的测定同步备课教学案北师大版选修1.doc

2019-2020年高中生物第1章微生物技术第3课时微生物数量的测定同步备课教学案北师大版选修1学习导航1.阅读教材P17内容，概述测定某种微生物数量的方法和步骤。2.结合教材P1517“测定土壤中微生物的数量”实验，掌握使用平板菌落计数法测定土壤中微生物的数量。重难点击1.掌握测定某种微生物数量的方法和步骤。2.学会使用平板菌落计数法测定土壤中微生物的数量。一、微生物数量测定的方法和原理微生物数量的测定也是重要的微生物技术之一，平板菌落计数法是一种应用广泛的微生物数量测定方法。1.平板菌落计数法的原理：根据微生物在高度稀释的条件下，固体培养基上所形成的单个菌落，是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表一个单细胞。2.计算方法：从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是：同一稀释度的菌落平均数0.2稀释度10。3.优缺点(1)优点：能测出样品的活菌数，可用于微生物的选种与育种、分离纯化及其他方面的测定。(2)缺点：操作烦琐、时间较长、测定值常受各种因素的影响。4.该方法统计的菌落数比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。1.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？答案土壤中各种微生物的数量是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离。2.平板菌落计数法(1)平板菌落计数法根据操作步骤的不同可分为哪两种？答案涂布平板法：用灭过菌的涂布器将一定量(一般为0.1 mL)的适当稀释过的菌液涂布在琼脂培养基的表面，然后保温培养直到菌落的出现。记录菌落的数目并换算成每毫升样品中的活细胞的数量。倒平板法：将已知体积(0.11 mL)的适当稀释过的菌液加到灭过菌的培养皿内，然后倒入溶化后冷却至45 的琼脂培养基，水平晃动混匀，待凝固后保温培养到出现菌落，然后与涂布平板法同样计数。(2)平板菌落计数法中换算样品的含菌数依据什么数据换算？答案依据稀释倍数、取样接种量和菌落数。(3)每隔多少小时统计一次菌落数目？应选取菌落数目何时(稳定时或不稳定时)的记录作为结果？答案每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。(4)统计菌落时，要求细菌和放线菌每皿的菌落数目范围是多少？霉菌每皿的菌落数目范围是多少？答案若测定细菌和放线菌，要求每皿以30300个菌落为宜，若是霉菌则以每皿10100个菌落为宜。归纳总结要使平板菌落计数法准确，需要掌握的关键步骤有：严格的无菌操作，否则容易被杂菌污染；稀释液要充分混匀，吸量准确，否则结果不准确；多做几个重复实验，减少误差。1.用平板菌落计数法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是()A.菌落数量最多的平板B.菌落数量最少的平板C.菌落数量适中的平板D.取若干个平板菌落数量的平均值答案D解析用平板菌落计数法对样品中活菌数目进行统计，只是一种估测，根据此方法的实验过程可知，在某一稀释度下涂布的平板菌体数具有一定的偶然性，并不是绝对均匀，所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌体数的真实值。2.若某一稀释度下，平板上生长的平均菌落数为80，涂布平板时所用的稀释液体积为0.1 mL，稀释液的稀释倍数为106，则每克样品中的活菌数约为()A.8108 B.8107C.8105 D.8106答案A解析每克样品中的活菌数(800.1)106。二、土壤中尿素分解菌数量的测定土壤中含有种类繁多的微生物，不同微生物的数量有差别，我们通过实验来测定土壤中尿素分解菌的数量。1.下面是土壤中尿素分解菌培养使用的培养基的配方，请分析：成分用量尿素20 g酵母粉0.1 g磷酸二氢钾9.1 g磷酸氢二钠9.5 g酚红0.01 g琼脂20 g加热溶解后，用1 mol/L NaOH溶液调pH至7.27.4，补加蒸馏水定容至1 000 mL(1)在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是酵母粉，提供氮源的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。(2)微生物要利用尿素需要分泌脲酶，不能分泌脲酶的微生物不能利用尿素。因此该培养基对微生物具有选择作用，其选择机制是只有能够分泌脲酶从而以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。(3)细菌合成的脲酶分解尿素产生了氨，使培养基的碱性增强，pH上升，使酚红变色，菌落周围变红。可用来鉴定选出的菌落是不是尿素分解菌。2.结合下图分析实验过程和注意事项步骤实验操作操作提示制备培养基分别配制牛肉膏蛋白胨培养基和以尿素为唯一氮源的选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用制备土壤样品稀释液称取土样10 g，放入盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的锥形瓶中，充分摇匀；吸取上清液1 mL，转移至盛有9 mL的生理盐水的无菌大试管中，按照上图流程进行样品的稀释，依次制成稀释度为101、102、103、104、105、106的稀释液应在火焰旁称取土样；要充分摇匀加样取10套无菌培养皿，取104、105和106不同稀释度分别做3个重复平板，留下一个平板做空白对照。每皿接种稀释菌液各0.2 mL实验时要对所用的平板、试管作好标记。如培养皿要注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等倒平板将菌液移入培养皿后立即倒入溶化并冷却至45 左右的尿素培养基(倒入量为15 mL)，平置，待凝倒平板时要晃动培养皿，使菌液和培养基混合均匀培养将涂布好的培养皿放在37 温度下培养在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，才说明选择培养基有选择作用计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目如果学生选取的是同一种土样，结果相差太远，教师需要引导学生一起分析产生差异的原因1.试写出测定土壤中尿素分解菌数量的实验流程。答案制备尿素固体培养基制备土壤样品稀释液加样倒平板培养统计菌落数计算样品中的菌数。2.甲、乙两位同学用平板菌落计数法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？答案不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下涂布3个平板，统计结果后计算平均值。(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？答案不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果不一致的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地舍弃后进行计数。(3)某同学在三种稀释度下吸取0.1 mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算1 g样品的活菌数。平板稀释度平板1平板2平板3103320360356104212234287105212318答案104的稀释度下取0.1 mL涂布的三个平板上的菌落数在30300之间，计算其平均值为(212234287)/3244。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为2440.1104102.44108。(4)为什么统计的菌落数比活菌的实际数目低？答案当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。3.微生物数量测定的实验设计(1)如果平板上长出的菌落不是均匀分散的，而是集中在一起，可能的原因有哪些？答案菌体密度太大；倒平板后没有立即摇匀；平板冷凝水太多。(2)同一个稀释度的3个平板上的细菌的数目应该比较接近，如果长出的菌落数差别较大，可能的原因有哪些？答案取样不准确；稀释不均匀；倒平板操作时培养基温度差别较大等。(3)实验中的无菌操作主要有哪些？答案培养基、锥形瓶、试管、铲子、信封等，需要进行灭菌。称取土壤要在火焰旁进行。稀释土壤溶液的每一步操作都要在火焰旁进行。归纳总结分离尿素分解菌操作中的注意事项(1)在实验操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防培养基被污染，影响实验效果。(2)样品稀释液的最佳浓度为获得每个平板上有30300个菌落，这个稀释度细菌一般为104、105、106倍稀释液，放线菌一般为103、104、105倍稀释液，真菌一般为102、103、104倍稀释液。(3)为排除非测试因素(培养基)的干扰，实验需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行空白对照。(4)每一稀释倍数的菌液都至少要涂布3个平板，作为重复实验，求其平均值，若其中有菌落数与其他平板悬殊过大的，需要对该平板重新制作。3.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析下列叙述正确的是()A.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数一定恰为5号的10倍B.5号试管的结果表明每克该土壤中的菌株数目为1.7108个C.在用移液管吸取菌液进行梯度稀释时，可用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与无菌水充分混匀D.某一稀释度下至少涂布3个平板，该实验方法统计得到的结果常会比实际活菌数目高答案C4.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。(1)实验步骤制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。为了得到更加准确的结果，应选用_法接种样品。适宜温度下培养。(2)结果分析测定大肠杆菌数目时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，与事实更加接近的是_。A.一个平板，统计的菌落数是230B.两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240C.三个平板，统计的菌落数分别是400、212和256，取平均值289D.四个平板，统计的菌落数分别是210、260、240和250，取平均值240一同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上菌落数的平均值为212，那么每克样品中的活菌数约是(涂布平板时所用的稀释液体积为0.2 mL)_。用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量_(填“多”或“少”)，因为_。问题导析(1)因为题中操作的目的是对大肠杆菌进行数量的测定，所以接种的方法是涂布分离法。(2)测定活菌数量时，选择的平板越多误差越小，且选择的平板要能形成30300个菌落。(3)所做的多个平板中，如果其中一个平板中菌落的数目明显多于或少于其他几个平板，则说明该平板不符合要求，应重做或舍弃。答案(1)涂布分离(2)D1.06109个多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落解析(1)若对大肠杆菌进行计数，则需要用涂布分离法接种样品。(2)应选取多个菌落数相差不大的平板进行计数，取其平均值。2120.21061.06109(个)。因为一个菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。一题多变(1)如果某同学的稀释倍数仅为104，则测定的数值要比题中测定的数值高还是低？为什么？答案低。因为稀释倍数太低，则大部分菌落是由多个细菌繁殖而成，所以测定的菌落的数值要偏低。(2)第(2)问第小题C项中菌落数为400的平板不符合要求，试分析该平板中菌落数目多于其他平板的可能的原因。答案培养基被污染，一些菌落是由杂菌繁殖而成的；接种过程中由于操作不当感染了杂菌；取菌液时没有摇晃，导致所取菌液中细菌个体浓度偏大等。方法链接用平板菌落计数法计数微生物的方法(1)涂布分离法操作要求：按照平行重复的原则，每一稀释度的菌液涂布3个或3个以上的平板。(2)计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。(3)选择可用于计数的平板：选择菌落数在30300之间的平板(相同稀释度的平板均符合该特点)进行计数，然后取平均值。1.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是()A.菌落 B.细菌形态C.细菌体积 D.细菌结构答案A解析细菌个体非常小，不易直接观察，不同细菌菌落的形态特征不同，而且可以用肉眼观察，因此常作为鉴定菌种的依据。2.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水答案A3.请选出下列正确的操作步骤()土壤取样称取10 g土壤，取出放入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL土壤溶液进行平板涂布依次制成101、102、103、104、105、106稀释度的稀释液A. B.C. D.答案C4.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的是()A.将土壤用无菌水稀释，制备103106土壤稀释液B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上C.用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株答案C解析从土壤中分离以尿素为氮源的细菌时，将土壤用无菌水稀释，制备土壤稀释液，将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上，用加入酚红指示剂的鉴别培养基可以鉴别分解尿素的细菌；从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株。5.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 g葡萄糖10 g尿素1 g琼脂15 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL(1)此培养基能否用于植物组织培养？_，理由是_。(2)培养基中加入尿素的目的是筛选_，这种培养基属于_培养基(依据用途划分)。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_和_，实验需要振荡培养，原因是_。(4)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：_。答案(1)否缺少植物激素(或缺少植物需要的各种营养)(2)目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH增高，使酚红指示剂变红解析配制培养基需要根据培养生物的营养需求情况，确定其成分及比例。植物组织培养需要有满足植物细胞生长所必需的营养和植物激素等条件，题目所给培养基中缺少植物激素，不能用于植物组织培养。培养基中加入尿素是为了能够筛选出能分解尿素的细菌，依据用途划分，此培养基属于选择培养基。尿素提供氮源，葡萄糖提供碳源。在实验中振荡培养可增加培养液中的氧含量，为培养的目的菌提供必需的氧气。课时作业基础过关1.土壤中分解尿素的微生物所需氮源为()A.硝酸 B.氨C.尿素 D.蛋白胨答案C解析只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源，使其生长、发育及繁殖受到抑制。2.土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种()A.尿素酶 B.脲酶C.蛋白酶 D.肽酶答案B解析能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用。3.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()A.一个细菌、液体培养基B.许多细菌、液体培养基C.一个细菌、固体培养基D.许多细菌、固体培养基答案C解析在液体培养基中生活的细菌，无论是一个还是许多，肉眼都是看不见的。在固体培养基上的细菌，当数目较少时是看不见的。当固体培养基上有许多细菌并且集中在较小范围内时，肉眼可见。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态，因为这许多细菌第一可能不是同一种细菌，第二可能不在培养基的同一个点上。4.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生的原因不可能是()A.由于土样不同 B.由于培养基污染C.由于操作失误 D.没有设置对照答案D解析实验结论是否正确与是否设置对照有直接关系，但实验结果与是否设置对照无关。5.下面对“从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌”的理解，不正确的是()A.防止杂菌污染B.消灭全部微生物C.稀释土壤溶液的过程必须在火焰旁操作D.灭菌必须在接种前进行答案B6.用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A.未接种的选择培养基B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D.接种了的选择培养基答案C解析将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，应选牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的是单一变量原则，所以与选择培养基一样接种、培养。7.测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍的稀释液，其原因是()A.细菌个体小，真菌个体大B.细菌易稀释，真菌不易稀释C.细菌在土壤中数量比真菌多D.随机的，没有原因答案C解析土壤中的微生物大约70%90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30300之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。能力提升8.在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中，以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是()从土壤中分离出能够分解尿素的细菌从土壤中分离出能够分解氨的细菌统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌A. B.C. D.答案A解析从土壤中分离分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌株数(C/V)M”进行推测，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。9.给无氮培养基接种土壤稀泥浆的正确方法是()A.打开培养皿盖，取一根接种环沾取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上B.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，略微打开培养皿盖，在培养基的表面轻点C.打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点D.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，略微打开培养皿盖，在培养基的表面轻点答案D解析接种过程中要防止外来杂菌的入侵，右手将接种环在火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，左手将培养皿打开一条缝隙，在培养基的表面轻点，用未冷却的接种环沾取稀泥浆会杀灭菌种。10.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是()A.链霉素能阻止结核杆菌的生长B.链霉素对结核杆菌比对霍乱菌更有效C.链霉素对结核杆菌比对伤寒菌更有效D.链霉素可以用于治疗伤寒病人答案D解析从图中可以看出，这是含有链霉素的选择培养基，接种的三种细菌中，霍乱菌和结核杆菌都可以被杀灭，并且链霉素对结核杆菌杀灭的有效程度大于霍乱菌，而伤寒菌照常生长不受影响，所以选项D错。11.通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B.取104、105的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上C.将培养皿倒置，37 恒温培养2448 hD.选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数答案D解析检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106稀释度的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448 h，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30300的平板进行计数。12.以下关于分解尿素的细菌的说法，正确的是()A.能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶B.以尿素作为唯一的碳源C.环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D.以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基培养该菌后不会使酚红指示剂变红答案D解析A项：酶有专一性，分解尿素的细菌之所以能分解尿素是因为能合成分泌脲酶。B项：该菌能以葡萄糖作为碳源。C项：环境中含有大量的尿素对分解尿素的性状起了选择作用而非诱导作用。D项：该菌产生脲酶把尿素分解为氨后，使pH升高，进一步使酚红指示剂变红，但添加酸碱缓冲剂后，阻止了pH的升高，因此培养基不再使酚红指示剂变红。13.下表为土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题使用的培养基，分析培养基配方，回答下面的问题：KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 g葡萄糖10.0 g尿素1.0 g琼脂15.0 g用蒸馏水定容到1 000 mL(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_。(2)按物理性质划分，该培养基属于_培养基，理由是培养基中含有_；该类培养基常用于微生物的_等。(3)由于_，所以该培养基只能用于能够合成_的微生物的培养。用此培养基培养土壤浸出液能够从土壤中筛选出_的细菌。(4)在微生物学中，将_的培养基，称作选择培养基。答案(1)葡萄糖和尿素(2)固体琼脂纯化、分离、计数(3)培养基中只有尿素一种氮源脲酶分解尿素(4)允许特定种类的微生物生长，并能抑制或阻止其他种类微生物生长解析根据培养基的成分，可以推断培养基的类型以及适于培养的微生物的代谢类型。含有琼脂、明胶等凝固剂的培养基为固体培养基；不含凝固剂的为液体培养基。不含碳源的培养基适于自养微生物的培养，不含氮源的培养基适于固氮微生物的培养等。固体培养基常用于菌种的纯化、分离、计数等；液体培养基常用于菌种的扩大培养和工业化生产。14.土壤中有一种细菌，能利用O2氧化NH3为亚硝酸和硝酸，利用氧化过程中放出的能量，将CO2和H2O合成为有机物，我们称它为硝化细菌。以下是从土壤中分离这种细菌的实验，请回答有关问题：(1)配制培养基：分离硝化细菌的培养基和分离大肠杆菌的培养基不同点在于分离硝化细菌的培养基中_。(2)培养基灭菌：灭菌后冷却至适宜温度倒平板。(3)采集菌种：从果园取土壤10 g，浸入90 mL蒸馏水中，搅拌、过滤。(4)接种：取1 mL浸出液用_法或_法接种在平板上，作为实验组，另一份平板不接种，作为对照组。(5)培养：在适宜_条件下培养，并保证空气的充分供应。培养时培养皿的放置方法是_。(6)观察：若对照组无菌落，实验组出现菌落，则该菌落一定是_；若对照组也出现菌落，则说明_，其差错可能出在配制培养基、灭菌、培养过程等各个环节，从该菌的代谢特点来看差错最可能出在_。(7)从培养基的功能来看，该培养基为_，若从培养基外观的物理状态来看，该培养基应为_。(8)从生态系统的成分划分，我们分离得到的这种细菌为_。答案(1)NH3是唯一氮源，无碳源(或不含任何有机物)(4)平板划线分离涂布分离(5)温度倒置(6)硝化细菌培养基中混入了碳源和其他氮源配制培养基的过程中(7)选择培养基固体培养基(8)生产者解析由题干信息可知，硝化细菌为自养、需氧型细菌，能氧化NH3为其自养提供能量，因此在分离该种菌的选择培养基上NH3既是氮源，又是能源，碳源是空气中的CO2，因此培养基中不应有有机物和其他含氮物质。此培养基为固体选择培养基。若配制培养基时混入了碳源和其他氮源，则非硝化细菌也可在其上生长，因此会出现杂菌污染。15.急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题。(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为_。如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是_。(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？_。为什么？_。(3)如分别取0.1 mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为_。(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？_。答案(1)平板菌落计数法D(2)需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(3)5.6108(4)通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37 恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌解析测定大肠杆菌数量的方法平板菌落计数法。删除偏差太大的数据，对剩下的多个培养数据进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可以进行无氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。真题体验16.(xx四川，10)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。请据图回答下列问题：(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源；鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较_。(3)现有一菌株产生的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示的位置增加了70个核苷酸，使图乙序列出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为_，突变基因表达的蛋白质含_个氨基酸。答案(1)尿素酚红红(2)涂布分离法1.75少(3)UGA115