《二手烟对小白鼠肺部组织形态学生的影响》

二手烟对小白鼠肺部组织形态学生的影响1 研究背景烟草危害已成为当今世界最严重的公共问题之一，也是人类健康所面临的最大问题。目前，全球共有 11 亿吸烟者，每年导致近 500 万例本可避免的死亡。我国目前约有 3.5 亿吸烟者，居世界各国之首。每年死于吸烟相关疾病的人数近 100 万。大量的临床观察和动物实验证明吸烟能损害人体的各种组织器官，引起癌症、高血压、冠心病、脑中风、消化性溃疡、慢性支气管炎、肺气肿等多种疾病。而相对主动吸烟，被动吸烟产生的危害性更大。目前有关被动吸烟对身体产生影响的研究多数局限于临床的流行病学调查研究，而被动吸烟对身体各器官组织形态学上的影响研究的文献报道很少。吸烟危害健康已成为一个严重的社会问题第四次“烟草 1998 年 WHO 或健康工作会议”指出，在发达国家每年死于与吸烟相关疾病的人数几乎等于因酗酒、凶杀、自杀、吸毒、溺水、交通事故、工业事故和艾滋病死亡人数的总和。吸烟是一种不良的生活习惯，能诱发癌症，引起多种心、脑血管疾病特别是肺癌、慢性支气管炎和肺气肿等疾病的危险因素。调查结果显示目前，我国每年约有 100 万人死于与吸烟有关的疾病。在发达国家中，吸烟与肺癌死亡人数的 85%有关，与支气管炎及肺气肿总死亡人数的 75%有关，与心脏病总死亡人数的 25%有据关。据统计，英国平均每 4 个吸烟者中有 1 人死于肺癌，中年死亡者中 1/3 死于肺癌和吸烟引起的心脏病。研究显示全部癌症患者发病的 1/3 与吸烟有关。在我国引起肺癌的原因，男性约有 70%80%归因于吸烟，而女性约 30%归因于吸烟与被动吸烟。如果每天平均吸烟 20支，吸了 20 年的烟民患肺癌的危险性比不吸烟者高 20 倍。年龄小于 20 岁即开始吸烟者，死于肺癌的人数比不吸烟者高 28 倍。据美国科学家研究，吸烟者比不吸烟者平均要缩短寿命 20 年左右。 2 研究内容将分组的小白鼠按照实验方法进行实验，观察对比两组小白鼠的肺细支气管组织结构、肺终末细支气管组织结构、肺细支气管组织结构、肺终末细支气管组织结构、肺细支气管组织结构的变化。3 研究方法实验动物模型的建立及处理3.1 实验动物分组 60 只健康雄性小白鼠（4 week-old） ，随机分为 A、B、C 三组，每组 20 只。A 组为对照组（正常饲养，不进行染毒） ；B 组为中剂量染毒组（1 支烟次5 次天4 周） ；C 组为高剂量染毒组（2 支烟 次5 次天4 周） 。 3.2 被动吸烟染毒 采取静式染毒方式，将香烟点燃后，迅速把烟头部分放入自制通气管道管口处，以保证香烟烟雾第一时间进入染毒缸，同时把一注射器（无针头）插入烟蒂中，反复推拉， 使香烟充分燃尽。每日染毒 5 次，每次 10 分钟。每组染毒后充分通风，再进行下一组动物染毒。3.3 被动吸烟剂量 烟雾剂量(g) =香烟重量(香烟燃尽后灰烬+烟头) = l.0100.310 = 0.7，燃烧一支香烟时，被动吸烟箱中烟雾浓度为=0.70.036=19.44gm3 时，相应两支香烟燃烧时的烟雾浓度为 38.88g/m33.4 实验方法 每天早 8：00 通风换气，查看室内温度（室内温度保持在 18-22，相对湿度保持50-60。 ） ，清理鼠笼（每隔 2 天用酒精擦洗一次） ，清除粪便、垫干木屑，检查小鼠健康状况，称量前一天每组小白鼠的摄食量及饮水量，并记录，换上新的鼠粮及饮用水，剩料集中处理，每天的饲喂都是定时定量的，由小白鼠在实验过程中自由摄取。8：30 下午4： 30 之间为染毒时间，按照 B 组（1 支） 、C 组（2 支）的顺序和剂量依次将一组小白鼠均置入染毒缸中，持续 10 分钟，充分通风后再进行下一组的被动染毒。每周称量体重一次。持续 周后，每组各随机抽取 12 只，共 36 只，先用鼠眼眶后静脉丛采血法采血后，采用快速脱颈椎法处死小白鼠，取双侧睾丸、肾、肺、脾及部分空肠，然后将这些器官用石蜡切片法制作组织切片，H-E 染色，利用显微数字图像分析处理系统观察组织结构的变化；血样用沙利氏比色法测定血红蛋白含量。3.4.1 切片的制作及组织学观察玻片先于重铬酸钾浓硫酸溶液中浸泡 24 小时，再用洗洁净清洁后，自来水充分冲洗干净，置烤箱中干燥后，再浸于多聚-L-赖氨酸溶液中 1 分钟，室温下晾干，制成防脱片的玻片。所有组织蜡块沿器官长轴做连续切片，切片厚 5um，连续切片 68 张，置于 60烤箱烤干备用。固定好的组织块进行常规石蜡包埋、切片，行 H-E 染色，最后利用显微数字图像分析处理系统观察各器官的组织结构变化，进行常规组织病理学检查。3.4.2 测定项目及生物学统计方法本实验需每天测定采食量，饮水量，死亡率。每周测一次体重，处死后称量肺、肾、睾丸、肝的重量，对数据进行 t 检验，与对照组比较是否有显著性差异。4 预期研究结果烟草燃烧生成的烟雾是普遍存在的对个人和环境的污染物质,研究已证实,烟草燃烧生成的烟雾中含有 4000 多种物质,有害成分包括一氧化碳、生物碱、腈类、胺类、醇类、酚类、烯烃、烷烃、羰基化合物、氮氧化物、多环芳烃、杂环族化合物、重金属元素、有机农药等。这些有害成分中最主要的三种有害物质是烟焦油、尼古丁和一氧化碳。吸烟对机体存在着广泛的影响，表现为全身的毒性作用。本实验制作了被动吸烟小白鼠模型，来探讨被动吸烟对小白鼠部分器官组织形态学上的影响及其可能的影响机制。肺是呼吸系统的主要器官，其结构的改变与其功能有密切联系。排列于肺中支气管上的纤毛会将外来异物从肺组织上排除并将肺中的微粒扫入痰或粘液中，最后将其排出来，香烟烟雾中的烟焦油、尼古丁、CO、氰氢酸等有毒物质可损伤气道上皮细胞，尤其是烟焦油进入呼吸道后，能直接刺激气管使支气管粘膜的纤毛受损、变短，影响纤毛的清除功能。长期被动吸烟，使粘膜下腺体增生、肥大，粘液分泌增多，成分发生变化，使细支气管被阻塞。烟焦油被吸入肺后，产生酵素，刺激肺泡表面产生物理性和化学性的变化，在肺中浓缩成一种粘性物质，使肺泡壁受到损害，弹性消失，膨胀、破裂，形成肺气肿。