肿瘤及其标志物课件.ppt

1 肿瘤及其标志物曾玲莉 2 恶性肿瘤发生与分类 定义 肿瘤 tumor 又称新生物 neoplasma 是机体在各种致瘤因素的作用下 组织和细胞在基因水平上失去了对其生长的正常调控 导致的异常生长和分化 即指失去了正常生物调控的异常生长 分化的细胞和组织 3 良性肿瘤 局部膨胀性生长 速度比较缓慢 常有较完整的包膜 压迫邻近组织器官 但不侵蚀破坏不向远处转移 危害性较小 特点 细胞增殖 分化异常出现恶性生长 失去细胞与细胞间及细胞与组织间的正常联系 侵袭周围正常组织并发生转移 根据肿瘤的生物学行为和临床表现可分为 恶性肿瘤 表现为细胞的无休止和无序的分裂 有侵袭性 向周围组织侵润 和转移性 危害性大 4 恶性肿瘤的分类 癌症 Carcinoma 起源于上皮细胞 约占恶性肿瘤的85 恶性肉瘤 Sarcoma 起源于组织细胞 如肌肉组织 骨骼及脂肪组织 约占肿瘤的6 左右 淋巴瘤和白血病 LymphomaandLeukemia 起源于白细胞的产生组织 如骨髓 淋巴腺等 可发生于各年龄段 约占恶性肿瘤的5 左右 其它恶性肿瘤 包括脑瘤及其它罕见的癌症 约占恶性肿瘤的4 左右 5 恶性肿瘤的发生的机制肿瘤是一种基因疾病 其发生是一个多因素 多阶段 多基因参与的复杂过程 癌变正常细胞癌变细胞细胞生物大分子 DNA RNA 蛋白质 结构与功能异常化学致癌剂环境因素致癌病毒放射线 引起细胞癌变外因通过内因起作用 6 细胞癌变的分子学基础 癌基因与抑癌基因其结构或表达异常细胞增殖生长调节系统 癌基因 正调节 促进增殖 抑制分化和凋亡 通过表达产物 生长因子发挥作用 抑癌基因 负调节 抑制增殖 促进分化 成熟 衰老 最后凋亡 当多个癌基因异常激活时或当抑癌基因缺失 突变或基因产物失活时可引起细胞癌变 7 正常肠上皮细胞癌基因的激活抑癌基因的丢失K ras的突变腺瘤 级遗传型AFP突变 级FAP丢失或息肉 级基因丢失P53基因丢失 占70 一部分人直接有息肉转变成癌C myc的过量表达大肠癌P53基因突变使细胞增殖加速 若同时其等位转移人大肠癌癌变的分子机理 8 细胞癌变的免疫监视学说 1 机体免疫活化性细胞 T细胞 NK细胞 K细胞和巨噬细胞等 有识别肿瘤细胞的作用 在早期杀灭异常细胞 当机体免疫功能低下或受抑制时 肿瘤的发生率高 2 肿瘤细胞有逃脱免疫监视的能力 妨碍机体的免疫监视的功能 9 一 肿瘤标志物定义 TumorMarkers TM 是指由恶性肿瘤细胞异常产生的或特征性存在于恶性肿瘤细胞的物质 或是宿主对肿瘤反应而产生的物质 当肿瘤发生 发展时 这些物质明显异常 标志肿瘤的存在 肿瘤标志物的概念 TM或是大分子的蛋白质 包括肽类激素和酶 或是小分子的脂类或氨基酸衍生物 存在于肿瘤细胞和组织中 存在于血液和其它体液 能利用化学 免疫和分子生物学等技术进行定性或定量的检测 10 理想的肿瘤标志物条件 特异性高 灵敏度高 器官特异性 可对肿瘤进行定位 肿瘤标志物浓度变化与肿瘤的大小 生长 消退 转移 恶性程度有直接的定性或定量的比例关系 易检测出 取材方便 检出方法简单灵敏 11 肿瘤标志物的研究概况肿瘤标志物的发展历史大体分为4个阶段 1846年 1928年 本周氏蛋白的发现 第1个发现的肿瘤标志物 现已被确认为多发性骨髓瘤的标志 12 1929年 1962年 发现一些激素 酶及同工酶等在恶性肿瘤的应用价值 1930年Zondek发现人绒毛膜促性腺激素 HCG 可辅助诊断绒毛膜癌等1932年Cushing等报道了促肾上腺皮质激素 ACTH 对恶性肿瘤的辅助诊断价值 40年代报道了一些酶在肿瘤病人的血清中增高 成骨肉瘤血清中有碱性磷酸酶的升高 1959年Markert等发现恶性肿瘤患者体液中可出现异常变化的同工酶谱 13 1963年 1975年 现代肿瘤标志物研究以发现胚胎蛋白为标志物1963年Abelev发现甲胎蛋白 AFP 1965年Glod和Freeman发现癌胚抗原 CEA 14 1976年至今 其研究进展及应用主要表现以下三方面 第一 1975年Kohler和Milstein成功地创建了淋巴细胞杂交瘤技术 1979年Koprowski用结肠癌细胞制备单克隆抗体 识别糖类抗原 建立了一系列特异性较强的肿瘤标志和CA系列 第二 发现肿瘤的基因标志 1976年Bishop和Varmug等发现癌基因与肿瘤的发生关系 是使肿瘤标志的研究从分子水平提高到基因水平第三 肿瘤标志的检测技术的灵敏度和特异性大为提高 免疫定量技术由半定量或灵敏度较低的过渡到高灵敏度并能准确定量的放射免疫测定或酶联免疫吸附测定单克隆抗体技术的广泛应用 15 肿瘤标志物的分类 按肿瘤标志物本身的化学特性可分为以下7类 肿瘤胚胎性抗原标志物 酶类标志物 糖类标志物 激素类标志物 微球蛋白类标志物 基因类标志物 其它类标志物 16 肿瘤标志物检测及临床应用 17 一 肿瘤胚胎性抗原标志物 肿瘤胚胎性抗原是指癌瘤细胞重新表达某些在胚胎细胞才有的而在成人后逐渐下降 消失的蛋白质成分最常见的是AFPCEA 18 一 甲胎蛋白 fetoportein AFP 生化特性 是胎儿血中的主要蛋白质成分 主要由胚胎期的肝细胞和卵黄囊产生 妊娠6周开始合成 12 14周合成达高峰 血清浓度为1 3g L 出生后下降 出生时的脐带血含量约10 100mg L 一年后约为5 8 g L MW 70KD 由590氨基酸组成 含糖量为4 糖链主要由甘露糖 半乳糖 N 乙酰葡萄糖和唾液酸组成的寡糖 糖链结构不同的AFP称AFP分子的异质体 19 1 AFP与肝癌 诊断原发性肝癌 是目前公认早期诊断的主要标志物 以血清含量 400 g L作为诊断阈值 肝癌普查 但需注意AFP阴性不能排除HCC 临床应用 判断分化程度 用于病情监测 预后判断 AFP含量与肿瘤的大小呈正相关 动态观察AFP含量和ALT酶活性的变化鉴别诊断良性肝脏疾病 5 AFP异质体分析对AFP持续在50 200 g L的原发性肝癌和良性肝病有鉴别诊断意义 常以小扁豆凝集素LCA结合型AFP 25 作为原发性肝癌的诊断标准 20 2 AFP与生殖细胞瘤AFP与HCG同时检测有利于生殖细胞瘤的分型和分期AFPHCG睾丸癌 卵巢癌 绒毛膜上皮细胞癌 畸胎瘤 临床应用 21 二 癌胚抗原 carcinoembryonicantigen CEA 生化特性 1 于结肠癌的提取物中发现 因此抗原也出现在胚胎细胞上 故称癌胚抗原 2 CEA是一种结构复杂的可溶性酸性糖蛋白 含糖量约为45 55 CEA属细胞表面糖蛋白家族 不规则地分布于细胞表面 易被细胞分泌或脱落至血液或其它体液中 电泳位置于 球蛋白的位置 有5种互相不重叠的抗原决定族 分别命名为Gold1 5 其中1 3有很高的特异性 4 5有交叉反应 22 基因位于19号染色体上 由10个基因组成 可表达36种不同的糖蛋白 胚胎期主要由胎儿的消化道上皮 肝脏和胰细胞分泌 出生后消失 成人CEA主要是由结肠粘膜细胞分泌到粪便中 少量重吸收入血 健康成人血中CEA浓度小于2 5 g L 生化特性 23 临床应用 CEA是一种低器官特异性肿瘤标志物 不适合作某种恶性肿瘤的诊断和筛查 但对预后判断 疗效观察及辅助诊断是一个有效的监测指标 也是发现复发的理想指标 1 用于辅助诊断 肿瘤名称阳性率结肠癌70 90 胰腺癌 中晚期 88 91 肺癌76 乳腺癌70 2 检测胃液中的CEA对胃癌有一定的诊断意义 24 3 CEA比正常持续升高5 10倍 如 20 g L 往往提示有恶性肿瘤特别是肠癌的存在 4 注意排除非癌性CEA升高 良性疾病如吸烟者 酒精性肝硬化 肺气肿 结肠息肉 非特异性结肠炎 胰腺炎 良性乳腺疾病等也可引起CEA的上升 临床应用 25 二 酶类肿瘤标志物 恶性肿瘤患者酶活力改变原因 肿瘤细胞恶变时引起基因表达的改变 肿瘤细胞产生异常含量的酶 肿瘤细胞的破坏或通透性增加 导致细胞内酶释放入血 肿瘤特异的生长方式及代谢改变而导致酶的异常尤其是同工酶谱的改变 肿瘤组织压迫管腔使某些酶返流入血 肿瘤的存在或转移机体某些组织诱导并生成大量的酶 26 1 PAS是一种由前列腺上皮细胞分泌的单链糖蛋白2 具有酶活性 与精液液化有关 3 基因结构分析表明 PSA与激肽释放酶KLK1和KLK2高度同源 4 血中总的PSA t PSA 包括两种形式 游离型 f PSA 20 结合型 cPSA 80 一 前列腺特异性抗原 prostatespecificantigen PSA 生化特性 27 PSA ACT 1抗胰蛋白酶 复合物cPSA形式 2巨球蛋白 2MG 结合的复合物目前可以测定的是 f PSAACT cPSAt PSA f PSA ACT cPSA 28 PSA是前列腺癌的特异性标志物 临床应用 前列腺癌的筛查和早期诊断 一般以4 0 g L作为参考值的上限 t PSA 4 g L判断为阳性 应用血清中的f PSA t PSA比值来鉴别良 恶性前列腺肿瘤 f PSA t PSA比值为0 15可作为前列腺肥大和前列腺癌的鉴别要点 比值0 25 提示前列腺肥大 病情 疗效监测和预后判断 29 二 神经元特异性烯醇化酶 neuronspecificenolase NSE 生化特性 是烯醇化酶的一种同工酶有5种形式 即 二聚体是该酶的活性形 亚基主要存在于肝 肾等组织 亚基主要存在于骨骼肌和心肌组织中 亚基组成的同工酶 和 存在于神经元和神经内分泌组织中 故称为NSE 30 临床应用 NSE水平升高还可见于某些神经内分泌肿瘤如嗜铬细胞瘤 黑色素瘤 胰岛细胞瘤 甲状腺髓样瘤等 NSE是小细胞肺癌和神经母细胞瘤的标志物 NSE对小细胞肺癌敏感度为80 特异性为80 90 应用于疗效观察 预报复发及预后判断 NSE对儿童型的神经母细胞阳性率为90 31 AFU存在于多种细胞的溶酶体及体液中 为一种酸性糖蛋白 是水解糖蛋白或糖脂中 L岩藻糖苷键的酶 参与糖脂 糖蛋白 糖的代谢 临床意义 1 主要用于遗传性AFU缺乏引起的岩藻糖贮积病的诊断2 又可作为原发性肝癌又一敏感 特异的新标志物 三 L岩藻糖苷酶 AFU 生化特性 32 异常血清酶名称相关肿瘤 乙醇脱氢酶 Alcoholdehydrogenase 肝醛缩酶 Aldolase 肝碱性磷酸酶 ALP 骨 肝 白血病 肉瘤 卵巢等淀粉酶 Amylase 胰腺等肌酸激酶 CKBB 前列腺 小细胞肺癌 乳腺 结肠 卵巢 谷氨酰转肽酶 GT 肝乳酸脱氢酶 LD 肝 淋巴瘤 白血病神经元特异性烯醇化酶 NSE 小细胞肺癌 神母细胞瘤 类癌 黑色素瘤5 核苷酸酶 5 Nucleotidase 肝酸性磷酸酶 ACP 前列腺 L 岩藻糖苷酶 AFU 肝芳香硫酸酯酶结肠 乳腺 33 异常血清酶名称相关肿瘤 半乳糖转移酶 Galactosyltransferase 结肠 膀胱 胃肠 卵巢丙酮酸激酶 PyruvateKinase 肝 卵巢胸腺苷激酶 Terminaldeoxytransferase 淋巴瘤 白血病 小细胞肺癌亮氨酸氨基肽酶 Leucineaminopeptidase 胰腺 肝核糖核酸酶 Ribonuclease 卵巢 肺 乳癌 34 三 糖类抗原 Carbohydrateantigen CA 定义 是当正常细胞转化为恶性细胞时 细胞表面糖蛋白发生变异而形成的一种与正常细胞不同的特殊抗原物质 或是由肿瘤细胞分泌的含糖的复合物 命名 CA后面的数字代表的是制造该抗原的肿瘤细胞株的编号 分类 CA125 CA15 3 CA594 CA27 29是哺乳动上皮细胞分泌的大分子量粘蛋白 其中有些如CA15 3 CA549 CA27 29实际上是异构体 是乳癌的肿瘤标志物 CA19 9 CA50 CA72 2 CA242是唾液酸岩藻糖的衍生物 常是消化道肿瘤的标志物 35 一 卵巢 乳腺肿瘤标志物 1 CA125 生化特性 是用人类卵巢浆液性囊腺癌细胞系作抗原免疫小鼠通过淋巴细胞杂交而获得的单克隆抗体OC125识别而得名 主要在卵巢癌中 又称为卵巢相关抗原 CA125是一种分子量 200KD的高分子糖蛋白 主要存在于上皮性卵巢癌组织和病人的血清中 健康人群血清中CA125的含量很低 其上限为35KU L 36 临床意义 2 其他恶性肿瘤及其他妇科肿瘤CA125也可升高 胰腺癌 肺癌 乳腺癌 直肠癌及子宫内膜癌等3 鉴定良性和恶性骨盆肿块较好的标志物某些良性疾病如子宫内膜异位症 盆腔炎 卵巢囊肿等疾病也有不同程度升高 但阳性率较低 1 主要作为卵巢癌肿瘤标志 早期诊断卵巢癌可用于监查已诊断为卵巢癌病人 评价疗效果及预报肿瘤复发 37 2 CA15 3 是一种在乳腺癌细胞表面含量较高的细胞表面糖蛋白 是监测乳腺癌的重要抗原 对乳腺癌具有较高特异性 但灵敏度较差 不适用于早期诊断和肿瘤筛查 主要用于治疗评价 预后判断和转移 复发监测 被认为是诊断转移性乳腺癌的首选指标 期乳腺癌复发检测指标故是监测病程其他多种腺癌也有CA15 3升高 包括有胰腺癌 肺腺癌 卵巢癌 直肠癌 肝癌等 38 二 消化道肿瘤标志物 1 CA19 9 是一种大分子量的低聚糖类粘蛋白抗原用人结肠癌细胞株SW 1116制备的单克隆抗体116 NS 19 9识别糖类抗原CA19 9分布于正常胎儿的胰腺 胆囊 肝 肠等组织中及正常人胰 胆管上皮处 在血清中以唾液粘蛋白的形式存在 是一种与胰腺癌 胆囊胆管癌 结肠癌 胃癌相关的肿瘤标志物 又称为胃肠癌相关抗原 消化系癌肿患者血清CA19 9明显增高 39 2 CA50 CA50是一种与CA19 9密切相关 以唾液酸脂和唾液酸糖蛋白为主要成分的糖类抗原遍布于结肠 胃肠道 肺 胰腺 肝脏 胆囊 脑膜等恶性肿瘤组织中 细胞正常代谢过程中不分泌CA50成分 可用结肠 直肠癌COCO205细胞制成的单克隆抗体CA50来进行检测 不同的方法测得血清CA50的正常参值不同 临床应用与CA19 9有良好的相关性 诊断胰腺癌 胆管癌 肝癌 胃癌 结直肠癌 肺癌 卵巢癌等亦有较高的价值 CA50和其它肿瘤标志物如CA19 9 CA242 CEA AFP等联合测定 可有效提高恶性肿瘤检测的特异性和敏感性 40 名称性质相关肿瘤常用单克隆抗体 CA125糖蛋白 分子量 200KD卵巢 子宫内膜癌OC125CA15 3糖蛋白 分子量400KD乳腺 卵巢癌DF3115D3CA549高分子量糖蛋白乳腺 卵巢癌BC4E549 BC4N154CA27 29高分子量糖蛋白乳腺癌B27 29CA19 9唾液酸化Lexa胰腺 胃肠 肝116NS19 9CA19 5唾液酸化Lea和Leag胰腺 卵巢 胃肠116NS19 5CA50唾液酸化Lea胰腺 胃 结肠Colo 50CA72 4唾液酸化Tn胰腺 直肠 胃肠道B27 3 CC49CA242唾液酸化CHO结肠 直肠 胰腺C242 常用糖类抗原标志物一览表 41 四 激素肿瘤标志物 激素类肿瘤标志物分类 原位激素 eutopicdhormone 具有分泌激素功能的细胞癌变导致其所分泌的激素量发生异常 这些异常的原位激素具有高度的腺体特异性 有助于该内分泌腺或内分泌细胞肿瘤的诊断 异位激素 ectopichormone 是指在正常情况下 不产生激素的细胞癌变后所生成的激素 这些激素几乎都是肽类激素 具有与原位激素相同或相似的结构 和天然激素有相同的免疫原性 可用天然激素的抗体检测出来 42 异位激素作为肿瘤标志物特点 1 许多产生异位激素的恶性肿瘤能分泌一种或多种激素或类激素 或者几种肿瘤可分泌同一种异位激素 2 恶性肿瘤异位激素分泌量少且不恒定的 激素类标志很少用于恶性肿瘤的诊断 3 最易产生异位激素的肿瘤是肺癌 特别是小细胞癌 最常见的异位激素是ACTH及其衍生物 43 人绒毛膜促性腺激素 humanchorionicgonadotrophin HCG 生化特性 HCG是由胎盘滋养层细胞所分泌的糖蛋白激素 由a和 两个亚基组成 每个亚基上有两条N 糖链 a亚基的生物特性与促黄体生成素 LH 促卵泡激素 FSH 促甲状腺激素 TSH 的a亚基氨基酸排列顺序基本相同 亚基决定了各类激素的免疫学性质和激素的特异性 现行的许多测定HCG的分析方法都是专为检验HCG分子的 链而设计 44 临床意义 1 用于早孕诊断及用于了解胚胎生长情况及随访观察 2 是睾丸肿瘤和胎盘肿瘤最基本的标志物 良性葡萄胎 恶性葡萄胎 绒癌患者血清HCG有不同程度增高 腺癌 前列腺癌 肺非小细胞癌 肝癌 白血病及淋巴瘤等其他肿瘤患者HCG也可见升高 45 激素相关肿瘤 儿茶酚胺类 CA 嗜铬细胞瘤促肾上腺皮质激素 ACTH 肺小细胞癌 胰岛癌 胸腺癌生长激素 GH 垂体腺瘤 肺癌 肾癌抗利尿素 ADH 肺小细胞 肾上腺皮质瘤 胰腺癌5 羟色胺 5 HT 原发性类癌降钙素 CT 甲状腺髓样癌 肺小细胞癌 嗜铬细胞瘤绒毛膜促性腺激素 hCG 绒毛膜癌 睾丸癌 肺癌 乳腺癌 肝母细胞瘤人胎盘催乳素 HPL 滋养层细胞癌 性腺腺瘤 肺癌 乳腺癌甲状旁腺素 PTH 肺癌 肾癌 乳腺癌 肝癌 卵巢癌促红细胞生成素肝癌 子宫癌胰高血糖素肾癌 激素与肿瘤关系一览表 46 五 微球蛋白肿瘤标志物 一 铁蛋白 Ft 结构 核心 结晶状的氢氧化高铁 外壳 去铁蛋白 呈球状 由24亚基组成 其亚基分为H和L两类 心铁蛋白主要为H亚基 肝铁蛋白主要为L亚基 胎儿和癌组织中以H型为主 作用 贮铁和供铁 47 1 衡量有无严重铁代谢失调和体内铁贮存水平 正常人铁蛋白300 g L为增多指标 SF是诊断体内缺铁最敏感 最特异的指标 也是铁负荷过多性疾病的诊断和鉴别诊断2 是一种新的肿瘤标志物急性白血病患者SF显著升高 其它的恶性肿瘤的患者如霍奇金病 肝癌 胰腺癌 乳腺癌肺癌 卵巢癌等SF含量升高 升高的程度与肿瘤的活动及临床床分期有关 应用 48 二 2微球蛋白 2 microglobulin 2 M 2 M是一种分子量为11 8KD的单链多肽 存在于除成熟红细胞和胎盘滋养层细胞以外的几乎所有有核细胞表面 特别是淋巴细胞表面尤其丰富 血清 2 M 2 5mg L 尿平均值为98 g L 上限为320 g L 应用 1 评估肾功能2 监测肿瘤病情变化淋巴细胞增生性肿瘤如多发性骨髓瘤 慢性淋巴性白血病等病人血清中 2 M浓度可明显增高 在确诊的肝癌病人血清 2 M与AFP有良好的相关性 49 三 角蛋白 cytokeratin CK 细胞角蛋白是一类分子量为40 70KD的细胞结构蛋白应用双向电泳可将角蛋白分离出20条区带 分别命名为CK1 CK20 肿瘤细胞中最丰富的是CK18和CK19 CYFRA21 1 是指的单层上皮细胞癌变时 可释放CK19的片段进入血循环 此可溶性的片段称为CYFRA21 1 CYFRA21 1水平测定是磷状上皮细胞肺癌患者诊断和疗效观察的首选指标 CYFRA21 1和NSE组合测定可提高诊断肺癌的灵敏度而不降低特异性 50 六 肿瘤基因标志 癌基因的激活实质 结构异常 表达异常癌基因的激活途径 抑癌基因的失活 一是抑癌基因的缺失或突变二是抑癌基因产物失活 51 52 癌基因相关肿瘤 C myc乳腺癌 胃癌 肺癌 巨细胞型 急性粒细胞白血病 结肠癌N myc神经 视网膜母细胞瘤 肺癌 小细胞 C erb 2胃癌 肾癌 乳腺癌N ras胃腺癌H ras黑色瘤 膀胱癌 皮肤鳞癌K ras结肠癌 骨肉瘤 膀胱癌 胰腺癌 卵巢癌 常见癌基因类肿瘤标志物 53 抑癌基因相关肿瘤 RB视网膜母细胞瘤 骨肉瘤 乳腺癌 肺癌P53肺癌 结肠癌 胃癌WT1Wilms肿瘤NF 1神经纤维瘤Erb B 2乳腺癌 常见抑癌基因类肿瘤标志物 54 肿瘤基因标志检测方法 1 定量病理学 原位图像分析 确定细胞中总DNA含量 细胞测量学方法 用于研究小肿瘤 2 免疫组织化学法 利用单克隆抗体检测其相关的蛋白质以检测癌基因和抑癌基因的产物 3 分子生物学方法 聚合酶链反应 PCR 技术 PCR ASO法 PCR SSCP PCR RFLP 直接测序法 55 一 癌基因肿瘤标志物 1 ras基因家族与肿瘤的关系2 myc基因家族成员与肿瘤的关系 二 抑癌基因 1 RB基因2 P53基因 56 肿瘤类型临床意义 乳腺癌c Ha ras基因mRNA水平升高结直肠癌50 的肿瘤出现c Ki ras基因点突变肺癌20 30 肿瘤出现ras基因家族成员点突变 其中c Ki ras基因突变与预后不良相关胰腺癌90 左右的肿瘤出现c Ki ras基因点突变胃癌p21表达水平明显升高 c Ha ras基因编码的12位氨基酸突变与肿瘤的转移及预后不良有关髓性白血病10 50 的肿瘤出现c N ras基因突变膀胱癌部分病例可出现c Ha ras基因点突变及P21蛋白表达过度 ras基因家族与肿瘤的关系 57 肿瘤类型临床意义 神经母细胞瘤在20 肿瘤中有N myc基因扩增 是预后的预测因子乳腺癌6 57 的肿瘤中可见c myc基因扩增 c myc基因mRNA水平升高与预后不良有关结直肠癌10 20 的肿瘤中可见c myc基因扩增小细胞癌30 的肿瘤可见L myc基因过度表达宫颈癌c myc过度表达与预后不良有关胶质母细胞瘤均见N myc基因扩增Burkitti淋巴瘤几乎100 的病人均有c myc基因异位 myc基因家族成员与肿瘤的关系 58 二 抑癌基因 1 RB基因 retinoblatoma RB 基因产物为P105蛋白 P105磷酸化修饰对细胞的生长 分化起重要的调节作用 非磷酸化的P105能促进细胞分化 抑制细胞增殖 RB基因失活见于成视肉膜细胞瘤 骨肉瘤 小细胞肺癌 乳腺癌 膀胱癌等许多肿瘤 59 基因产物 53KD蛋白功能 野生型的P53蛋白维持细胞正常生长 时刻监控基因的完整性 基因卫士 抑制恶性增殖检测 应用多种P53的单克隆 多克隆抗体来检测野生型 突变型P53蛋白 一般测得的只是突变型P53蛋白 2 P53基因 60 肿瘤临床意义 结肠癌50 80 表现P53突变肺癌45 70 P53水平升高 57 的小细胞癌过度表达P53肝癌50 的有P53点突变膀胱癌61 有P53基因突变乳腺癌40 有P53突变 9 的病人血清有P53蛋白卵巢癌50 的肿瘤有P53基因的突变食管癌35 44 有P53突变骨肉瘤33 76 的肿瘤有P53基因的突变胃癌37 有P53基因突变神经纤维瘤30 肿瘤有P53基因突变非霍奇金淋巴瘤61 有P53蛋白增加甲状腺癌24 肿瘤有P53基因突变 P53基因与肿瘤的关系 61 七 其它肿瘤标志物 唾液酸 多胺 羟脯氨酸 假尿嘧啶核苷 新蝶呤等低分子量的生化物质也被作为肿瘤标志物 归类于其它肿瘤标志物 一 肿瘤标志物的评价指标 表15 9 62 第三节恶性肿瘤标志物实验室诊断 一 肿瘤标志物临床判断值确定 一 常见的评估肿瘤标志物的指标 二 ROC工作曲线确定肿瘤标志物判断值 二 检验方法和质量控制 一 肿瘤标志研究及检测的常用技术 二 质量控制 三 常用肿瘤标志物的联合应用 63 评价指标计算公式 敏感度 真阳性数 所有肿瘤病人数即真阳性 假阴性 100 特异性 真阴性数 所有非肿瘤病人数即真阴性 假阳性 100 阳性预测值PV 真阳性数 真阳性例数 假阳性例数 100 阴性预测值PV 真阴性数 真阴性例数 假阴性例数 100 准确率 有效率 真阳性 真阴性 总例数 100 64 二 ROC工作曲线确定肿瘤标志物判断值 TM临界值的决定 根据金标准确定患者和对照组二组例数相似的人群 并测出各组的实验数据 使用该实验数据的不同的域值来区分阳性和阴性的不同分界点 并分别计算其灵敏度和特异性 绘制受试者工作曲线 receiveroperatingcharacteristiccurve ROC曲线 以接近左上角的点即为最佳诊断临界值 65 乳癌时CA15 3的ROC曲线 66 前列腺癌PSA试验和PAP试验的ROC曲线比较 67 PSA的ROC曲线 68 二 检验方法和质量控制 一 肿瘤标志研究及检测的常用技术 1 免疫学技术主要是三大技术 放射性免疫测定 RIA 酶联免疫测定 EIR 荧光素标记的荧光免疫测定 FIA 使免疫学抗原抗体反应的特异性与标记物的敏感性相结合具有特异 敏感 快速等优点 且试剂标准化 操作简便 可定性 定量 69 3 免疫组织化学技术从形态上详细阐明细胞分化 增殖和功能变化的情况 确定肿瘤组织的类型以及临床特征的分析 4 肿瘤免疫显像技术确定肿瘤的生长部位 在外科手术中发现放射性标记物抗体的积蓄的细胞 组织和器官 5 基因诊断技术分子探针 DNA重组技术 分析基因结构和功能的变化 2 生物化学技术常用方法包括电泳法 酶生物学活性法等 70 1 标本 1 常用的标本 血清 但阳性率有一定的局限性 2 其它标本 直接收集肿瘤组织或胃液 肠液 胰液 胸水 乳汁 3 标本采集除少量的酶外 一般无严格的时间要求但应注意各种影响因素 4 标本的保存 一般肿瘤标志物在室温下比较稳定近期测定 离心后保存在4 冰箱中 长期保存 建议于 20 2 3个月 或 70 保存待测 二 质量控制 71 2 质控质控物 阴性 低阳性浓度和高阳性浓度三种最好能自已准备质控物应用肿瘤标志物进行治疗监测时 检测方法 仪器 试剂应保持一致 72 3 肿瘤标志物测定结果的影响因素 体内影响TM浓度因素 某些良性疾患可产生的测定值升高 强烈的治疗 手术 放疗 化疗 连续的细胞死亡肿瘤本身状态 大小 供血状况 扩散及扩散程度 药物的影响 73 标本污染 同一患者 同一标本使用不同的试剂盒有时结果差异极大 其它干扰因素 钩状现象 hookeffect 即待测标本中抗原浓度过高 出现抗原不能全部与抗体结合 免疫反应被明显抑制 出现错误的低读数 嗜异性抗体 heterophilicantibodies 的影响可导致TM的假性高值 体外影响因素包括有 74 恶性肿瘤主要标志其它标志 原发性肝癌AFP GT ALP CEA AFU胰腺癌CA19 9CEA CA50 CA242胃癌CA72 4CEA CA19 9 SA结直肠癌CEACA19 9 CA 50 NSE小细胞肺癌NSECEA CA50 ACTH CT非小细胞肺癌CYFRA21 1CEASCCANSE TSA乳腺癌CA15 3CEA CA549 CA72 4卵巢癌CA125CA72 4 CA19 9 CEA子宫颈癌SCCACEA HCG前列腺癌PSAf PSA PAP ALP CEA白血病ALP 2M 铁蛋白 常见肿瘤标志物在主要肿瘤中的联合应用