灭菌制剂与无菌制剂.ppt

第十章灭菌制剂与无菌制剂,教学内容,第一节概述第二节灭菌制剂与无菌制剂的相关技术和理论第三节注射剂第四节输液第五节注射用无菌粉末第六节眼用制剂,第一节概述,一、灭菌制剂与无菌制剂的定义和类型灭菌制剂：指采用某一物理、化学方法杀灭或除去所有活的微生物的一类药物制剂。无菌制剂：采用某一无菌操作方法或技术制备的不含任何活的微生物的一类药物制剂。,3、灭菌制剂和无菌制剂的分类注射用制剂：注射剂、输液、注射粉针等；眼用制剂：滴眼剂、眼用膜剂、软膏剂、凝胶剂等；植入型制剂：植入片等；局部用外用制剂：溃疡、烧伤及外伤用溶液、软膏剂、气雾剂等。手术用制剂：止血海绵剂和骨蜡等。,二、灭菌制剂与无菌制剂的质量要求,无菌无热原静脉注射、脊椎腔注射、一次用量超过5ml的注射剂可见异物和不溶性微粒，应符合药典规定。安全性非水溶剂和附加剂，须经动物实验证实无刺激性和毒性渗透压等渗和等张pH与血液和组织相近稳定性物理、化学和生物稳定性降压物质须符合规定,第二节灭菌制剂与无菌制剂的相关技术和理论,一、水处理技术概述制药用水包括：饮用水、纯化水、注射用水及注射用水各种水的来源和质量要求原水不能直接用于制药饮用水用于药材的漂洗、制药用具的粗洗纯化水用作配制普通制剂的溶剂或试验用水、灭菌或非灭菌制剂所用药材的提取溶剂、非灭菌制剂用器具的精洗。注射用水又称重蒸馏水灭菌注射用水无菌五热原。可直接用于临床。,三、原水处理技术,初滤和精滤石英砂滤、活性炭滤器及细过滤器而成的过滤器。电渗析法常用于原水处理。除去带电荷的某些离子或杂质，对不带电荷的物质除去能力差。常用于离子交换前的水处理。,依据：在电场作用下离子定向迁移及交换膜的选择性透过当原水含盐量高达3000mg/L时，不宜采用离子交换法制备纯化水，但电渗析法仍适用。它不用酸碱处理，较离子交换法经济。电渗析法常用于原水预处理，供离子交换法使用，以减轻离子交换树脂的负担。,反渗透法什么是反渗透？反渗透的结果是使水从浓溶液中分离出来有机物的排除率与其分子量有关，分子量大于300的化合物几乎全部除尽，故可除去热原。除去有机物微粒、胶体物质和微生物的原理，一般认为是机械过筛作用。耗能低、水质好、设备使用语保养方便,离子交换法：利用阳、阴离子树脂可以除去绝大部分阳、阴离子，对热原、细菌也有一定的清除作用。优点：水质化学纯度高，所需设备简单，耗能小，成本低。对热原、细菌也有一定的去除作用。缺点：除热原效果不可靠，树脂需定期更换或再生。离子交换法制得的离子交换水主要供蒸馏法制备注射用水使用，也可用于洗瓶，但不得用来配制注射液。,阳离子交换树脂：氢型：RSO3-H+钠型（稳定）Na+,阴离子交换树脂：氢氧型：RN+(CH3)3OH-氯型（稳定）：Cl-,阳床脱气塔（CO2）阴床混合床,大型离子设备图,1.蒸馏法制备注射有水最经典的方法。（1）蒸馏水器种类：塔式和亭式蒸馏水器、多效蒸馏水器和气压式蒸馏水器。构成：蒸发锅（塔）、隔沫装置和冷凝器缺点：耗能高，效率低。基本被淘汰。,四、注射用水的制备技术,多效蒸馏水机特点：耗能低、产量高、质量优。气压式蒸馏水器它是以输入部分外界能量而将低温热能转化为高温热能的原理来生产蒸馏水。,2.反渗透法(reverseosmosis)一般情况下，一级反渗透装置能除去一价离子90-95%，二价离子98-99%，同时能除去微生物和病毒，但除去氯离子的能力达不到药典要求；二级反渗透装置能彻底除去氯离子。,3、综合法制备注射用水,自来水,砂滤过器,活性碳过滤器,细滤过器,电渗析装置（或反渗透装置）,阳离子树脂床,脱气塔,阴离子树脂床,混合树脂床,蒸馏水机,热贮水器80C,注射用水,4.注射用水的收集保存,2009年GMP规定采用70保温循环。注射用水的贮藏和输送系统的清洁：80以上的注射用水在系统中循环0.5h以上，并同时开启各用水点及排放阀门3次以上，每次15s，一周一次。5.注射用水的检查,二、液体的过滤技术,（一）过滤是利用过滤介质截留液体中混悬的固体颗粒而达到固液分离的操作。（二）过滤机制与影响因素过滤机制介质过滤和滤饼过滤介质过滤过滤作用：依靠截介质的拦截作用过滤方式：表面过滤颗粒被截留在介质表面上深层过滤颗粒被截留在介质孔道内,滤饼过滤过滤时，固体粒子聚集在过滤介质表面形成滤饼。滤饼：起拦截作用过滤介质：支撑滤饼的作用目标物：滤饼层或滤液,影响过滤的因素过滤速度：单位时间通过单位面积的滤液量。V=Pr4t/8L影响滤速（vV/t）的因素：P，v；r，v；，v；L，v增加滤速的方法：介质上方加压或介质下方减压；升温；预滤；使杂质颗粒变粗等。,（三）过滤器和过滤装置,根据所施加的外加力分为重力过滤器、真空过滤器、压力过滤器根据操作方式分为间歇和连续过滤器根据过滤介质分为砂滤棒、垂熔玻璃、微孔滤膜、板框过滤器等。砂滤棒(硅藻土滤棒和多孔素瓷滤棒)特点：适于低粘度药液；价廉易得，但易脱砂，对药液的吸附性强，难清洗，适用于大生产中的脱炭。,垂熔玻璃滤器(垂熔玻璃漏斗、滤器和滤棒)使用完毕用水抽洗，并以1%-2%硝酸钠硫酸液浸泡处理。微孔滤膜过滤器理化性质：热稳定性和化学性能稳定。膜材质：醋酸纤维滤膜、硝酸纤维滤膜、聚酰胺滤膜、聚四氟乙烯滤膜等用途：注射剂精滤和除菌过滤优点：孔径小，截留能力强；孔径大小均匀，不易泄漏；滤速快；滤膜无介质的迁移；无交叉污染。缺点：易堵塞，有些滤膜化学性质不理想。规格：孔径0.220.450.8m应用：一般注射液的过滤：0.650.8m除菌过滤0.22m,其他过滤器如超滤装置、钛滤器、多孔聚乙烯烧管过滤器等。在注射液生产中，一般采用二级过滤：预滤(砂滤棒、垂熔玻璃漏斗、板框式压滤机或预滤膜)精滤(滤膜)。,板框式压滤机(多用于注射剂预滤),面积大，截留量多，可用于粘性大、滤饼可压缩的各种物料的过滤，特别适用于含少量微粒的待滤液，在注射剂生产中多用于预滤，缺点是装配和清洗麻烦，容易滴漏。,（四）常见的过滤方式,高位静压过滤适用于生产量不大、缺乏加压或减压设备的情况。压力稳定滤速慢减压过滤过滤介质下部减压的操作，称抽滤加压过滤压力稳定、滤速快、质量好、产量高，多用于药厂大量生产。,1.热原热原（pyrogens）：注射后能引起人体特殊致热反应的物质，是微生物产生的一种内毒素。产生来源：大多数细菌（革兰氏阴性杆菌致热能力最强）、霉菌、病毒。组成：热原=内毒素（endotoxin）=脂多糖(lipopolysaccharide)、磷脂、蛋白质致热反应：产生发冷、寒战、体温升高、恶心呕吐等不良反应，有时体温可升至40，严重者出现昏迷、虚脱，甚至有生命危险。,三、热原的去除技术,2.热原的性质,(1)耐热性601h无影响，100不降解，18034h、20060min、25030-45min或6501min可使热原彻底破坏。在通常注射剂的热压灭菌中不易被破坏。(2)滤过性体积15nm之间，一般滤器均不可通过，但活性炭可以吸附热原。(3)吸附性多孔性活性炭可吸附热原(4)水溶性磷脂结构上连接有多糖，热原可溶。(5)不挥发性热原本身不挥发，但在蒸馏时，可随水蒸汽雾滴带入蒸馏水。（6）其它能被强酸强碱、强氧化剂、某些表面活性剂、超声波破坏。,3.热原的主要污染途径,(1)注射用水：是热原污染的主要来源(蒸馏器结构不合理，操作不当，注射用水贮藏时间过长都会污染热原。)；(2)原辅料,如葡萄糖因贮存年久包装损坏致污染热原。(3)由于室内卫生条件差，操作时间长，装置不密闭，均增加污染细菌的机会，而可能产生热原；(4)从容器、用具、管道和装置等带入，因此在生产中对这些容器用具等物要认真处理，合格后方能使用。(5)有时输液本身不含热原，但仍发现热原反应。这往往是由于输液器具(如输液吊瓶、胶皮管等)污染所致。,4.热原的去除方法,1.高温法：根据热原的热不稳定性。对于注射用的针筒或其他玻璃器皿，在洗涤干燥后，于250加热30分钟以上，可以破坏热原2.酸碱法：玻璃容器、用具还可用重铬酸钾硫酸清洁液或稀氢氧化钠处理，可将热原破坏3.吸附法：常用的吸附剂有活性炭，活性炭对热原有较强的吸附作用，同时有助滤脱色作用，故在注射剂中使用较广。常用量0.1%0.5%;还可用活性炭与白陶土合用除去热原4.蒸馏法利用热原的不挥发性。,5.离子交换法：可靠性不强。国内有用#301弱碱性阴离子交换树脂10%与#122弱酸性阳离子交换树脂8%成功地除去丙种胎盘球蛋白注射液中的热原.6.凝胶过滤法：国内有用二乙氨基乙基葡聚糖凝胶(分子筛)制备无热原去离子水7.反渗透法：通过三醋酸纤维膜除去热原.我国该技术还不成熟，只能用于原水处理。8.超滤法；3.015nm超滤膜。9.其他方法如二次以上湿热灭菌，或适当提高灭菌温度和时间，以及微波等。,四、渗透压调节技术,1.等渗与等张的概念(1)等渗溶液(isoosmoticsolution)：系指与血浆渗透压相等的溶液，属于物理化学概念。注入机体内的液体一般要求等渗，否则易产生刺激性或溶血等。低渗溶液红细胞破裂，溶血现象高渗溶液红细胞萎缩肌内注射可耐受0.53个等渗度的溶液，静脉输液要求等渗，脊髓腔内注射必须调节至等渗。,(2)等张溶液(isotonicsolution)：系指渗透压与红细胞膜张力相等的溶液，属于生物学概念。在等张溶液中既不会发生红细胞体积改变，更不会发生溶血。等渗溶液不一定等张，等张溶液不一定等渗。在新产品的试制中，即使所配的溶液为等渗溶液，为了安全用药，亦应进行溶血试验，必要时加入氯化钠、葡萄糖等调节成等张溶液。,2.渗透压的调节方法,常用的渗透压调节方法：冰点降低数据法和氯化钠等渗当量法。(1)冰点降低数据法一般情况下，血浆冰点值为-0.52，根据物理化学原理，任何溶液的冰点降到-0.52，即与血浆等渗。W=(0.52-a)/b式中，W为配制等渗溶液需加入等渗调节剂的百分含量；a为药物溶液的冰点下降度数；b为用以调节的等渗剂1%溶液的冰点下降度数。,例1配制2%的盐酸普鲁卡因溶液100ml，用氯化钠调节等渗，求所需氯化钠的加入量。查表可知，2%的盐酸普鲁卡因溶液的冰点下降度数a=0.122=0.24；1%氯化钠溶液的冰点下降度数b=0.58，代入上式得：W=(0.52-0.24)/0.58=0.48%即配制2%的盐酸普鲁卡因溶液100ml，需加入氯化钠0.48g调节等渗。,例3下列处方欲制成等渗溶液需加多少NaCl?氯霉素20gNaCl适量注射用水加至1000ml(已知：1%（g/ml）氯霉素水溶液的冰点下降值为0.06),例4配制2盐酸普鲁卡因溶液500ml,用氯化钠调节等渗，求所需氯化钠的加入量。（已知1普鲁卡因溶液的冰点下降度为0.12）,例5配制含2盐酸普鲁卡因和1利多卡因溶液500ml,用氯化钠调节等渗，求所需氯化钠的加入量。（已知1普鲁卡因溶液的冰点下降度为0.12，1利多卡因溶液的冰点下降度为0.15）,(2)氯化钠等渗当量法系指与1g药物呈等渗的氯化钠质量。例配制2%的盐酸麻黄碱溶液200ml，欲使其等渗，求需加入的氯化钠或葡萄糖的量。查表可知，1g盐酸麻黄碱的氯化钠等渗当量0.28；无水葡萄糖的氯化钠等渗当量0.18，则：氯化钠的量=（0.9-0.282）200/100=0.68g葡萄糖的量=0.68/0.18=3.78g,或=(5%/0.9%)0.68=3.78g即配制2%的的盐酸麻黄碱溶液200ml，需加入氯化钠0.68g或无水葡萄糖3.78g调节等渗。,例1已知1普鲁卡因溶液的氯化钠等渗当量为0.18，配制2普鲁卡因溶液500ml,需加入多少克氯化钠？（1g盐酸普鲁卡因=0.18gNaCl，0.9%NaCl=血浆渗透压）w=(0.92*0.18)*500/100=(0.90.36)*5,基本概念：灭菌与无菌制剂：主要是指直接注入体内或直接接触创伤面、粘膜等的一类制剂。灭菌(sterilization)：应用物理或化学等方法杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽孢的手段。无菌(sterility)：指在任一指定的物体、介质或环境中，不得存在任何活的微生物。,五、灭菌与无菌技术,无菌操作法(aseptictechnique)：指在整个操作过程中利用或控制一定的条件，使产品避免被微生物污染的一种操作方法或技术。防腐(antisepsis)：用物理或化学方法抑制微生物的生长与繁殖的手段，亦称抑菌。对微生物的生长与繁殖具有抑制作用的物质称防腐剂或抑菌剂。消毒(disinfection)：用物理或化学方法杀灭或除去病原微生物的手段。对病原微生物具有杀灭或除去作用的物质消毒剂。,热力灭菌法包括干热和湿热灭菌法。1）、干热灭菌法（熟悉）火焰灭菌法：指用火焰直接灼烧灭菌的方法。适用范围：此法灭菌迅速、可靠、简便，适用于耐火焰材质(如金属、玻璃及瓷器等)的物品与用具，不适合于药物的灭菌。,（一）物理灭菌法,干热空气灭菌法：指用高温干热空气灭菌的方法。(1)干热灭菌条件：一般规定为160-170，2-4h；170-180，1h以上或250灭菌45min（从灭菌物品全达到特定温度后开始计时）。(2)适用范围：耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿气穿透的油脂类(如油性软膏基质、注射用油等)和耐高温的粉末化学药品等的灭菌。(3)缺点：在干燥状态下，热穿透力弱，温度不易均匀，由于灭菌温度过高，不适用橡胶、塑料及大部分药品。,2）、湿热灭菌法,定义：指用在高温高湿环境中灭菌的方法。如，利用饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法。优点：由于蒸气比热大，穿透力强，容易使蛋白变性，同时还有灭菌效率高，操作简便等优点，湿热灭菌法是应用最广泛的一种灭菌方法。类别：包括热压灭菌法、流通蒸气灭菌法、煮沸灭菌法和低温间歇灭菌等方法，根据药品性质进行选用合适的方法。,（1）热压灭菌法（掌握）定义：指用高压饱和水蒸汽加热杀灭微生物的方法。本法一般公认为最可靠的湿热灭菌法。灭菌条件：热压灭菌所需的温度及与温度相当的压力及时间如下:1)116，1.7atm(67kPa，7.1kg/cm2)，40min；2)121，2.0atm(97kPa，11kg/cm2)，30min；3)126，2.4atm(139kPa，14.1kg/cm2)，15min。适用范围：耐高温和耐高压蒸气的所有药物制剂、玻璃和金属容器、瓷器、橡皮塞、滤膜过滤器等。,（2）流通蒸气灭菌法定义：指在常压下，采用100流通蒸气加热杀灭微生物的方法。灭菌条件：常压下（1.0atm），100流通蒸气，时间30-60min。适用范围：用于消毒及不耐高热制剂的灭菌。缺点：不能保证杀灭所有的芽孢，如破伤风等厌气性菌的芽孢，是非可靠的灭菌法。一般作为不耐热无菌产品的辅助灭菌手段。制备过程中要尽可能避免污染，这点必须充分注意。目前我国药厂生产注射剂，特别是1-2ml注射剂及不耐高热的品种，可考虑采用这种灭菌法。,（3）煮沸灭菌法定义：指将待灭菌物置沸水中加热灭菌的方法。灭菌条件：沸水，时间30-60min。适用范围：常用于安瓿、注射器、注射针头等器皿的消毒。缺点：此法灭菌效果差，必要时加入抑菌剂，如三氯叔丁醇、甲酚等。,（4）低温间歇灭菌法定义：指将待灭菌物置60-80的水或流通蒸汽中加热60min，杀灭微生物繁殖体后，在室温条件下放置24h，让待灭菌物中的芽孢发育成繁殖体，再次加热灭菌、放置，反复多次，直至杀灭所有芽孢。适用范围：适合于不耐高温、热敏感物料和制剂。缺点：费时、工效低、灭菌效果低。加适量抑菌剂，以增加灭菌效力。应用本法灭菌的制剂或药品，除本身具有抑菌能力者外，须加适量抑菌剂，以增加灭菌效力。,5）影响湿热灭菌的因素1)微生物的种类和数量：芽孢繁殖体衰老体每个容器的细菌数，控制在10个以内为宜；最初菌数愈少，达到灭菌时间愈短。整个生产过程应尽可能避免微生物污染，尽可能缩短生产过程，并力求在灌封后立即菌。2)蒸气性质：蒸气有饱和、湿饱和、过热三种。,3)灭菌时间与温度：灭菌温度增高，化学反应速度增加；灭菌时间愈长，起反应的药物愈多。因此，灭菌需要考虑杀死细菌和保证药物有效性两个方面。在能达到灭菌的前提下，尽可能降低灭菌温度和缩短灭菌时间。4)介质pH：药液pH对细菌的活性也有影响：一般微生物在中性液中耐热性最大，在碱性溶液中次之，酸性不利于微生物的发育。所以，一般在生物碱盐类的注射液，因pH较低，用流通蒸气灭菌即可。,定义：指采用过滤法除去微生物的方法。即药物溶液通过无菌的除菌过滤器，除去活的或死的微生物而得到不含微生物的滤液。属于机械除菌方法。滤膜的材质分亲水性和疏水性两种，根据过滤物品的性质及过滤目的来选材质。适用范围：适于对热不稳定的药物溶液、气体、水等物品的灭菌。,2、过滤除菌,定义：采用辐射、微波和紫外线杀灭微生物和芽孢的方法。（1）紫外线灭菌法定义：采用紫外线（能量）照射杀灭微生物和芽孢的方法。属于表面灭菌。灭菌条件：一般用于灭菌的紫外线波长是200-300nm，灭菌力最强的是波长为254nm的紫外线。适用范围：紫外线进行直线传播，其强度与距离平方成比例地减弱，并可被不同的表面反射。适合于照射物表面灭菌、无菌室空气及蒸馏水的灭菌；不适合于药液的灭菌及固体物料深部的灭菌。,3、射线灭菌法,普通玻璃可吸收紫外线，因此安瓿中药物不能用此法灭菌。紫外线对人体如照射过久，能产生结合膜炎及皮肤烧灼等现象。一般均在操作前开启紫外线灯约半小时至一小时，然后进行操作。,（2）微波灭菌法定义：系采用微波(频率为300MHz-300kMHz)照射产生的热能杀灭微生物和芽孢的方法。适用范围：适合于液体和固体物料，对固体物料具有干燥作用。特点：微波能穿透到介质和物料的深部，表里加热一致，且具有低温、常压、高效、快速(2-3min)、低能耗、无污染、易操作、易维护，产品保质期长(可延长1/3以上)等。,（3）辐射灭菌法定义：系采用放射性同位素(60Co和137Cs)放射的射线杀灭微生物和芽孢的方法。适用范围：适合于热敏物料和制剂，常用于维生素、抗生素、激素、生物制品、中药材和中药制剂、医疗器械、药用包装材料及药用高分子材料等物质的灭菌。特点：不升高产品温度，穿透力强，灭菌效率高，但设备贵，有潜在危险性，对某些药物(特别是溶液型)可能产生药效降低或产生毒性物质和发热物质等。,定义：是指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法，同时不应损害制品的质量。杀菌剂：对微生物具有触杀作用的化学药品。分为气体杀菌剂和液体杀菌剂。不能杀死芽孢，仅对繁殖体有效。影响杀菌效果的因素：微生物的种类与数量、物体表面状况、杀菌剂的性质。化学杀菌的目的：减少微生物的数目以控制一定的无菌状态。常用的方法：（1）气体灭菌法和（2）药液灭菌法。,（二）化学灭菌法,(1)气体灭菌法定义：指采用气态杀菌剂进行灭菌的方法。适用范围：适合环境消毒以及不耐加热灭菌的医用器具、设备和设施等的消毒，粉末注射剂。应注意杀菌剂的残留量和与药物的相互作用。品种：环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸等,1)环氧乙烷性质：沸点10.9，室温下为气体，水中溶解度为1ml水中可溶195ml(20，760mmHg)，易穿透塑料，纸板及固体粉末。暴露于空气中，环氧乙烷就可从这些物质消散，对大多数固体呈惰性。杀菌作用：由于其为烷化剂的性质，使菌体蛋白的-COOH、-NH2、-SH、-OH的H，被-CH2-CH2-OH所取代，从而变性失活。,适用范围：可用于塑料容器、对热敏感的固体药物、纸或塑料包装的药物、橡胶制品、注射筒、注射针头、衣着敷料及器械等的灭菌。但是，一些塑料、皮革及橡胶与环氧乙烷有强亲和力，故需长达12-24h通空气驱除。环氧乙烷具可燃可爆，用时需用惰性气体二氧化碳或氟利昂稀释。环氧乙烷的吸入毒性较大，与氨相近，但无氨样的剌激嗅味，损害皮肤及眼粘膜，可产生水泡或结膜炎，故应用时要注意。,2)甲醛加热熏蒸甲醛溶液，每立方米空间用40甲醛溶液30m1，室内相对湿度宜高，以增进甲醛气体灭菌效果。3)丙二醇丙二醇用于室内空气灭菌具有不挥发性和无引火性等特点，灭菌用量为1ml/m3。4)乳酸灭菌用量为2ml/m3，杀菌力不及甲醛，但对人无害。5)过氧乙酸过氧乙酸用于车间灭菌，效力比相同浓度的甲醛大两倍半，对粘膜，眼部无剌激性，对木制品、金属制品、医疗器械均无影响。,(2)药液灭菌法定义：指采用杀菌剂溶液进行灭菌的方法。适用范围：常应用于其他灭菌法的辅助措施，适合于皮肤、无菌器具和设备的消毒。常用品种：0.1-0.2新洁尔灭溶液、75乙醇、1聚维酮碘溶液、酚或煤酚皂溶液等。使用注意：由于化学杀菌剂常施用于物体表面，也要注意其浓度不要过高，以防其化学腐蚀作用。,定义：指整个过程控制在无菌条件下进行的一种操作方法，该方法在技术上并非灭菌操作。适用范围：适用于一些不耐热药物的注射剂、眼用制剂、皮试液、海绵剂和创伤制剂的制备。避箘操作：尽量避免微生物污染。,（三）无菌操作法,(1)无菌操作室的灭菌,无菌操作室的灭菌采用灭菌和除菌相结合的方式流动空气：采用过滤介质除菌法静止环境空气：采用气体和液体灭菌法、紫外线空气灭菌法。甲醛溶液加热熏蒸法气体灭菌法之一紫外线灭菌法用于间歇和连续操作过程。液体灭菌法辅助灭菌方法臭氧灭菌法GMP验证指南推荐的方法。特点：1.不增加消毒设备；2.可使臭氧迅速扩散到每个角落；3.杀灭空气净化系统滋生的霉菌；4.灭菌时间短、操作简便、效果好。,(2)无菌操作,无菌操作场所：无菌操作室层流洁净工作台无菌操作柜无菌操作室要求达到100级空气净化的条件。无菌操作所用的一切用具、材料以及环境均需按前述灭菌法灭菌。操作人员进入操作之前要洗澡并换上已经灭菌的工作服和清洁的鞋子，不使头发等露出来，以免造成污染机会。,(3)无菌检查,药剂或药品经灭菌或无菌操作法处理后，需经无菌检验证实已无微生物生存，方能使用。灭菌效果，应以杀死芽孢为标准(细菌的芽孢具有较强的抗热力，不易杀死)。法定的无菌检查法：包括试管接种法和薄膜过滤法。,灭菌效力？主要原因：灭菌温度多是测量灭菌器内的温度，不是灭菌物体内的温度；无菌检验方法也在局限性，难以用现行的无菌检验法检出微量的微生物。,（四）灭菌效力的检查方法和F0值,1、D值（单位：时间）D值：在一定温度下杀死被灭菌物品中90微生物所需的灭菌时间；也可定义为降低微生物一个十位数或一个对数值（如log100降低到log10）所需的时间。杀灭微生物速度-时间过程符合一级动力学过程：dN/dt=-kt，即lgNt=lgN0-kt/2.303令D=2.303/kt/（lgN0-lgNt）当lgN0-lgNtlg100-lg101时，D=t/(lg100-lg10)D值因待灭微生物的种类、药液的配方及性质、用作生物指示剂的微生物种类；微生物所接触的表面的性质、灭菌工序（如温度）等不同而各异。,2、Z值（单位温度）Z值：为D值降低一个对数值所需升高的温度数，即灭菌时间减少到原来的1/10时所需升高的温度或在相同灭菌时间内，杀灭90%的微生物所需要提高的温度。灭菌温度升高，速度常数k值增大，D值减少。Z=(T2-T1)/(lgD2-lgD1)即D2/D1=10(T2-T1)/Z当lgD2-lgD11时，即ZT2-T1在不同温度下对特定的微生物在特定介质或环境中求得D值后，再计算Z值。Z值通常在湿热灭菌时取10，在干热灭菌时取20。,3、F值与F0值F(或F0)值可作用验证灭菌效果的参数。(1)F值F为在一定温度(T)，给定Z值所产生的灭菌效果与参比温度(T0)给定Z值所产生的灭菌效果相同时，T0温度下所相当的时间(equivalenttime)，以分钟为单位。即整个灭菌过程的效果相当于T0温度下F时间的灭菌效果。数学表达式：F=t10(T-T0)/Zt是测量被灭菌物温度的时间间隔，一般为0.5-1min，T是每个时间间隔t所测量被灭菌物的温度，T0是参比温度。干热灭菌中，Z常取20，T0取170。,(2)F0值F0值为在一定灭菌温度(T)、Z值为10所产生的灭菌效果与121，Z值为10所产生的灭菌效果相同时所相当的时间(min)。物理F0=t10(T-121)/Z即F0是将灭菌过程（升温、恒温、冷却）中各种灭菌温度使微生物的致死效力转换为灭菌物品完全暴露于121使微生物致死的效力。,F0值的计算对于验证灭菌效果极为有用，当产品以121湿热灭菌时，灭菌器内的温度虽能迅速升到121，而被灭菌物品内部则不然。由于包装材料性能及其他因素影响而使升温度各异，温度即使很小的差别(如0.1-1)将对F0值产生显著的影响。同时要求测定灭菌物品内的实际温度，故用F0来监测灭菌效果有重要的意义。由于F0是将不同灭菌温度折算到相当于121湿热灭菌时的效力，故F0值可作为灭菌过程的比较参数。,为了确保灭菌效果，还应注意两个问题：根据F0=D121(logNo-logNt)，若N0越大，即被灭菌物中微生物越多，则灭菌时间越长，故生产过程中应尽量减少微生物的污染，应采取各种措施使每个容器的含菌数控制在10以下。其次计算F0时，应适当考虑增加安全因素，一般增加50，如规定F0为8分，则实际操作应控制F0为12分。,六、空气净化技术,(一)概述空气净化分工业净化(尘埃粒子)和生物净化(尘埃粒子和微生物)。(二)洁净室的净化标准A级：高风险操作区如，灌装区、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域，相当于静态100级净化。B级：A级区所处的背景区域，相当于动态100级。C级：相当于10万级净化，对无菌要求不太严的洁净区。D级：生产无菌药品过程中重要程度较差的洁净操作区。,(三)空气净化技术,空气的过滤采用空气过滤器对空气进行净化。初效过滤器主要滤除粒径大于5um的粉尘，又称预过滤器。中效过滤器主要滤除粒径大于1um的粉尘，与初效过滤器相似，主要区别是滤材。亚高效过滤器主要滤除粒径小于1um的尘埃，常采用叠式过滤器高效过滤器主要滤除粒径小于1um的尘埃，主要采用折叠式空气过滤器过滤器的组合,