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ABO血型鉴定、Rh血型鉴定,临床检验基础与输血教研室,唾液中HAB血型物质测定,实验一 ABO、Rh血型鉴定 目的：掌握ABO正反定型的原理、方法及Rh血型鉴定 原理：通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定ABO血型。 正定型是用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B、抗-D等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原； 反定型是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。,器材:小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、载玻片、记号笔、显微镜。 试剂: 1. ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体： 抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。 235A型、B型及O型试剂红细胞。 3. 生理盐水。 标本:抗凝静脉血,操作（试管法） (1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明A、B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc、Oc。 (2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，2500r/min离心3分钟，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。 (3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。 （4）离心：3000rmin离心15秒（1000g）。 (5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。,操作：玻片法(鉴定纸板) (1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标A、B，分别用滴管滴加A、B试剂1滴，再加受检者35红细胞悬液l滴，混匀。 (2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。 (3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充分混匀连续约2min，肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。,表l ABO血型正反定型结果,注意事项 1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染 作业 简述ABO血型鉴定正反不一致的原因,4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 mf 混合凝集外观（mixed field）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。,红细胞凝集强度判断标准,目的 掌握Rh血型鉴定的原理、方法。 原理 Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红细胞抗原。 在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。,二 、 Rh血型鉴定,器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、载玻片、显微镜、离心机。 试剂 1.Rh抗血清：常用的为IgM抗D。 2.己知Rh阳性和阴性的5红细胞悬液各1份 3.盐水溶液。 标本 静脉血。,操作(盐水试管测试法) 1.取单克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e试剂各1滴到5支试管中。 2.每管各加1滴35待检红细胞悬液。 3.充分混匀，以1000 g离心15秒。 4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集。 5.判定结果,注意事项 1如临床上只检查是否为Rh阳性，只需用抗D血清进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查排除Du型。 2因抗e血清难以得到，故临床上常用四种Rh抗血清来定型。 3Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇。 4如鉴定结果只与抗D血清起反应，而与抗C、-c、-E、-e都不凝集，则受检者为Rh缺失型，以-D-表示。,唾液中HAB血型物质测定,【目的】 了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法。 【原理】 HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中HAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利用凝集抑制试验，可测定唾液中HAB血型物质，它有助于ABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定,【器材】 小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机 【试剂】 1. A、B和O型红细胞盐水悬液。 2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清） 【标本】受检者唾液,1.被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取的唾液1000g离心，取上清液置于大试管中，煮沸10min，再离心10min，留取上清液备用。 2.排列试管3支，分别标明-A、-B、-H，3管各加唾液1滴，每管加相应标化血清1滴。 3.混匀，置室温，中和10min。 4.每管加相应悬红1滴. 5. 混匀，离心15秒，观察结果.,标化血清,1.标记试管：3排18支，分别抗A、抗B及抗H。每排再标2、4、8、16 .稀释：每管加盐水50l。每排第1管对应加抗A抗B及抗H血清50l，倍量稀释成2、4、8、16稀释液。 .加3悬红：每排各管对应加悬红50l，振摇混匀，1000g，离心15秒。 .结果：以+为标化血清的最适稀释度。,操作步骤,结果判定,6.取试管两支分别作阳性及阴性对照管，各加分泌型和非分泌型唾液l滴再加抗H最适稀释度血清l 滴，以30型红细胞作指示，同时进行试验，阳性对照应不凝集，阴性对照应凝集。,【注意事项】 1如果加热前不离心并除去沉淀，任何可能存在的细胞可释放H物质，使非分泌导致假阳性。 2欲得到清晰的不含粘液的液体，最好的办法是将唾液冰冻保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰冻唾液的活性可保留几年。 3可用5%白蛋白代替盐水标化。 .为防止弱分泌型漏检，同时盐水对照试验，比较二者凝集强度。,思考题,请列表比较红细胞血型系统中的主要抗原及产生抗体的异同点 简述正反定型不一致的原因,
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