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1970年，有两位科学家 做了一个著名的实验： 人鼠细胞融合的实验， 以证明细胞膜上的蛋白 质分子是运动的。,人鼠细胞是怎样实现融合的？动物细胞融合有什么实践意义呢？,w,w,动物细胞融合与 单克隆抗体,一、动物细胞融合,有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。,思考2：细胞融合过程中使用的病毒不灭活行吗？,不灭活的病毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,思考1：为什么灭活的病毒能作诱导剂？,一、动物细胞融合,P52：生物资料卡,诱导动物细胞融合的过程：阅读书本图2-23,w,2、诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合.(常用灭活的仙台病毒诱导动物细胞融合）。 化学法：聚乙二醇（PEG）诱导融合. 物理法：电激融合,病毒颗粒黏 附细胞表面,细胞膜连接,细胞膜被 病毒颗粒穿通,细胞融合、形成杂种细胞,一、动物细胞融合（细胞杂交） （P52）,1.概念：,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,2.结果：,形成含有2或多个细胞遗传物质的单核杂交细胞,3.融合原理：,细胞膜的流动性,4.诱导方式,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（PEG),生物法：灭活的病毒,5.意义：,突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能 广泛应用多个领域 重要用途：制备单克隆抗体,w,二、单克隆抗体,回忆1：什么是抗体？,回忆2：抗体是怎么产生的？是主要分布在哪里？,回忆3：抗体有什么作用？,主要分布在：血清,凝聚或杀死相应的病原体,抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发 生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,二、单克隆抗体,阅读书本图p5253回答以下问题,1、获得抗体的传统方法是怎么样的？这种方法有什么缺点？,方法：把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。,缺点： 产量低，纯度低，特异性差。,每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。 如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体单克隆抗体。,问题： 怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？,光纯还不行,还要大量.怎么办? 但，有问题: 想想看，什么细胞能无限繁殖呢? 怎么获得能产生抗体又能无限增殖的细胞呢？,用单个B淋巴细胞进行动物细胞培养(克隆)就可以产生大量抗体了.,B淋巴细胞是不能无限繁殖的.怎么办?,癌细胞. 但它不能产生抗体.,癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体.B淋巴细胞能产生抗体,但不能大量繁殖.将两个细胞融合即可得到既能产生抗体又能无限增值的细胞,w,如何诱导融合？,用灭活的病毒或加入聚乙二醇（PEG）,如何得到B淋巴细胞？,制备单克隆抗体的过程P53，图2-24,注射特定的抗原蛋白,细胞两两融合后，有哪些类型？,B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤,（4）第二次刷选的结果（目的）是什么？,能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,（3）如何将杂交瘤细胞（B-瘤）刷选出来？,制备单克隆抗体的过程P53，图2-24,选择培养基选出杂交瘤细胞,（5)如何得到大量的单克隆抗体？,体内培养 体外培养,单克隆抗体的优点:,特异性强、灵敏度高,杂交瘤细胞（B-瘤细胞）,足量单一类型 杂交瘤细胞,单克隆抗体制备流程图,单克隆抗体的优点：,纯度高,特异性强,灵敏度高,产量大,选择性培养基,注射特定 抗原蛋白,图中B为_过程， 常用_作为诱导剂 ，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_ 。,1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案,该实验方案的 目是 ；,A是从小鼠的脾脏中取得_ ,该细胞能够产生 ；,制备单克隆抗体,B淋巴细胞,专一抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌专一抗体,无限增殖,4、单抗隆抗体的应用,作为诊断试剂,定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病,用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。,用于治疗疾病和运载药物,利用同位素标记单抗，在特定组织成像,制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。,单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。,w,动物细胞融合,单克隆 抗体制备,过程：,原理：细胞膜的流动性,意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能,应用：主要用于制备单克隆抗体,制备过程：,特点：特异性强,灵敏度高,产量大,应用：用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物,小结：,1只能使动物细胞融合的常用诱导方法（ ） APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心 2、“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单抗上连接抗癌药物,B,练习,D,3. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,C,5.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,制备单克隆抗体,不能，没有注射抗原，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。,(1)该实验方案的目的是：,(2)该方案能达到预期效果吗？为什么？,(3)A是从小鼠的脾脏中取得_ 该细胞能够产生_ 。,(4).图中B为_过程，常用_诱导，该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能_ _,又能_。,B淋巴细胞,抗体,细胞融合,灭活的病毒,分泌专一抗体,迅速大量增殖,
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