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免疫酶斑点试验,Dot-ELISA,1,实验目的,2.了解免疫酶斑点技术的用途。,1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法；,2,免疫斑点酶技术的原理,硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力, 在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。,将免疫物质吸附于纤维素膜后，可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。,3,包被未知抗原,NC,酶标抗体,底物,直接法Dot-ELISA,4,包被抗原,NC,待检抗体,酶标抗体,底物,间接法Dot-ELISA,5,免疫酶斑点技术的特点,1）特异性强，假阳性较少； 2）敏感性高，NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯， 检出抗原的敏感性较常规ELISA法高68倍； 3）试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍； 4）检测结果可长期保存，便于复查。,6,1. 小组为单位,实验方法及注意事项,2. 膜片、抗原、洗涤液、吸水纸在实验台上,3. 酶标抗体放置在冰箱，使用前取出,4. 底物临用前配置,5. 震荡器全班一台, 调整好频率后不要乱动,7,方法 (直接法),1. 取硝酸纤维素膜片, 用笔做好标记方便加样;,2. 将稀释的抗原液2-5l加于相应格内,室温自然干燥!,3. 将膜片放入封闭液中震荡封闭15分钟;,4. 用洗涤液震荡洗涤3次, 每次1分钟, 吸干;,5. 将膜片放入稀释好的酶标抗体液体中，震荡15分钟, 吸干;,6. 将膜片放入洗涤液中, 震荡涤洗3次1分钟, 吸干;,7. 将膜片放入底物液中, 震荡15分钟左右观察。,明显棕色斑点者为阳性,8,实验结果,9,免疫酶斑点技术的应用,1. 微量抗原的检查;,2. 抗体分泌细胞、细胞因子产生细胞的 筛选;,3. 自身抗体的检查。,10,
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