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实验十五 石蜡切片法（四） 染色、封藏 一、实验原理 1. 染色：细胞和组织的不同结构之所以能被染成各 种不同的颜色，是由于染料对它们所起的物理与化学 综合作用的结果。 (1) 物理作用：如渗透作用、吸收作用、吸附作用等。 (2) 化学作用：是因为细胞内含有酸性和碱性物质可 分别与染料中的阳离子和阴离子互相结合，这种反应 使组织细胞染上颜色。,1,以常用的苏木精-伊红对染法为例：细胞核内含有酸 性物质，易与碱性染料苏木精中有染色作用的阳离子结 合，细胞核被染上蓝色。细胞质含有碱性物质，易与酸 性染料伊红中有染色作用的阴离子结合，细胞质被伊红 染上粉红色。,2,2封藏：封藏是使已经透明的材料保存在适合折光率 的封藏剂中，使材料能在显微镜下清晰的显示出来， 并能长期保存。,3,二、试剂与器材 1.试剂：各级酒精（50%、 70%、 85%、 95%、 100%）、1/2二甲+1/2无水乙醇、二甲苯、 埃利希氏苏木精染液、1%曙红水溶液、 中性树胶. 2.器材： 镊子、 解剖针、 染色缸、显微镜。,4,三、实验程序 1. 染色的一般方法 由于要染的切片包在石蜡之中，而所用的染色剂又 常常为水溶液，因此在染色之前，必须再度复水，石 蜡切片在二甲苯中溶去石蜡，经过各级酒精，下降至 水，经染色后需再脱水，上升到二甲苯透明然后封藏。,5,苏 木 精伊 红 （简称 H.E）对染法 (1) 二甲苯脱蜡5-10min。 (2) 二甲苯与纯酒精等量混液5min。 (3) 纯酒精，95%、85%、70%、50%酒精各2min。 (4) 蒸馏水2min。 (5) 埃利希氏苏木精染色液20-30min。 (6) 水洗(换几次，共约5min)。 (7) 1%盐酸酒精分化数秒钟(如染色合适，此步可取消)。 (8) 自来水洗数秒至1min。 (9) 氨水中“蓝化”34s。,6,(10) 蒸馏中漂洗5min(换一次)。 (11) 1%伊红水溶液15min。 (12) 70%酒精数秒。 (13) 80%、95%、纯酒精(2次）各2min。 (14) 纯酒精与二甲苯等量混合液5min。 (15) 二甲苯510min。 (16) 封藏: 封藏于中性树胶中。,7,2. 封藏的方法 在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从 二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在 切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再 进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧， 稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下， 避免产生气泡。,8,四、注意事项 1、脱蜡应彻底； 2、水洗时水流不能太急； 3、“分色”、“蓝化”时间要掌握好； 4、脱水要彻底； 5、适量滴加封藏剂。,9,五、实验结果 细胞核蓝色，细胞质粉红色。,10,六、思考题 在染色、封藏过程中容易出现哪些不正常现象？ 应如何解决？,11,附：冰冻切片法 冰冻切片法具有制片速度快并能完整保存细 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的优 点，常用于临床上的病理快速诊断及细胞化学的 制片。,12,一、操 作 程 序 1. 取 材：取新鲜的组织。 2. 固 定：组织固定于10%中性福尔马林,冰冻切片。 3. 切 片： (1) 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度，调整切片角度，安装切片刀。 (2) 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 (3) 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移 近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出 后染色观察。,13,4. 染色显示脂类的苏丹黑B法： (1)组织固定于10%中性福尔马林或10%钙福尔马林液， 冰冻切片。 (2) 于70%酒精略洗。 (3) 苏丹黑B染液5-15分钟。 (4) 70%酒精洗去多余染料。 (5) 稍水洗。 (6) 甘油明胶或阿拉伯糖胶封盖。 结果：脂滴染为蓝至黑色。,14,
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