广西地方标准《常见淡水养殖鱼类疾病诊治技术规范 第3部分：疾病防治用药药效检验》（征求意见稿）

52 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 5/T 2016 常见淡水养殖鱼类疾病诊治技术规范 第 3 部分：疾病防治用药药效检验 of 征求意见稿） 2016 - 布 2016 - 施 广西壮族自治区质量技术监督局 发布 2016 I 目 次 前言 . 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 试剂和材料 . 1 剂 . 1 菌生理盐水 . 1 溶剂 . 1 释剂 . 1 料 . 2 养基 . 2 株 . 2 鱼样品 . 2 幼样品 . 2 殖池水 . 2 物 . 2 4 仪器设备与器具 . 2 器设备 . 2 具 . 2 5 抗生素药效检验 . 2 养基制备 . 2 汤培养基 . 2 养琼脂 平板 . 2 倍母液制备 . 3 剂除菌 . 3 存液制备 . 3 存液定容 . 3 倍母液稀释 . 3 围筛选 . 3 度药液配备 . 3 悬液制备 . 3 液接种 . 3 育 . 3 果观察 . 4 定 . 4 菌圈测定 . 4 2016 菌板制备 . 4 液配置 . 4 敏试验 . 4 菌圈测量 . 4 定 . 4 6 消毒剂药效检验 . 4 物称量 . 4 液制备 . 4 验 . 5 殖用水消毒 . 5 菌培养 . 5 果观察 . 5 定 . 5 7 杀虫驱虫药药效检验 . 5 用杀虫药 . 5 物称量 . 5 液制备 . 5 液稀释 . 5 验 . 5 定 . 5 服驱虫药 . 5 鱼样品暂养 . 5 物称量 . 6 液制备 . 6 饵制作 . 6 饵投喂 . 6 定 . 6 8 水质改良剂药效检验 . 6 物称量 . 6 液制备 . 6 液稀释 . 6 定 . 6 9 免疫增强剂药效检验 . 6 龟样品暂养 . 6 物称量 . 7 液制备 . 7 饵制作 . 7 饵投喂 . 7 果观察 . 7 定 . 7 2016 0 记录 . 7 2016 言 1087 常见淡水养殖鱼类疾病诊治技术规范 分为三个部分 第 1 部分 资料记录、病因与病损度诊断及应对措施； 第 2 部分 疾病诊断与防治； 第 3 部分 疾病防治用药药效检验。 本部分为 1087 的第 3 部分。 本标准按照 2009 给出的 规则起草。 本标准由广西壮族自治区水产畜牧兽医局提出。 本标准起草单位 广西壮族自治区水产技术推广总站、广西大学。 本标准起草人 胡大胜、龙光华、黄钧、韩书煜 、黄艳华、梁静真。 2016 1 常见淡水养殖鱼类疾病诊治技术规范 第 3 部分：疾病防治用药药效检验 1 范围 本标准规定了常见淡水养殖鱼类疾病 防治用药药效检验的试剂与材料、仪器 设备与器具 、抗生素药效检验、消毒剂药效检验、杀虫驱虫药药效检验、水质改良剂药效检验、免疫增强剂药效检验与记录 。 本标准适用于广西境内常见淡水养殖鱼类疾病的诊断与防治。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 渔用抗菌药物药效试验技术规范 第 1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 试剂和材料 剂 菌生理盐水 精确称取 入 1 21高压灭菌 15 溶剂 二甲基甲酰胺 溶液 ， 氢氧化钠 溶液 ， 乙醇 。 各种药物的预溶剂见表 1。 表 1 各种抗生素的预溶剂 药物名称 预溶剂 药物名称 预溶剂 磺胺甲噁唑 氢氧化钠 硫酸新霉素 蒸馏水 氟苯尼考 二甲 基甲酰胺 盐酸多西环素 蒸馏水 甲砜霉素 二甲基甲酰胺 乳酸诺氟沙星 蒸馏水 磺胺二甲嘧啶 热乙醇 烟酸诺氟沙星 蒸馏水 磺胺嘧啶钠 蒸馏水 释剂 蒸馏水 ，质量符合 6682要求 。 2016 2 料 养基 营养琼脂 培养基，肉汤培养基。 株 嗜水气单胞菌标准菌株或确定耐药性消除的革兰氏阴性病原菌。 鱼样品 确诊感染 寄生虫 或水霉 的鱼种，数量 30尾，用于杀虫驱虫药药效检验。 幼 样品 精神萎靡不振 、 两眼暗淡无神 、活动迟缓的幼龟 ， 数量 30只，用于免疫增强剂药效检验。 殖 池 水 氨氮含 量 1 的养殖 池 水 200 L，用于水质改良剂药效检验。 物 质控药物：盐酸多西环素，含量 待检 药物： 抗生素、消毒剂、杀虫驱虫药、水质改良剂和免疫增强剂 。 4 仪器 设备 与器具 器 设备 生化培养箱，无菌操作台，生物显微镜， 高压灭菌锅， 精确度为 0.1 麦氏比色管 。 具 20 L 200 L、 100 L 1 000 000 L 5 000 30 L、 50 50 头 ， 刻度吸管，洗耳球，药勺， 1 500 玻璃棒 ，涂棒，培养皿，接种环 ， 酒精灯 ， 牛津杯 ，气泵 。 5 抗生素药效检验 养基制备 汤培养基 用干粉培养基制备成普通肉汤培养基 ， 压灭菌 20 4保存备用。 养琼脂 平板 用干粉培养基制备成普通营养琼脂平板 ， 压灭菌 20 4保存备用。 2016 3 倍 母液制备 剂除菌 预溶剂用 释剂高压灭菌除菌。 存液 制备 物称量 用 精确度 0.1 确称量 含有效成分 1 000 物，置于 1 。 示例 1： 某 厂家生产的某品牌含量 10%氟苯尼考 ，称量时，准确 称取 10 g， 置于 1 L 烧杯 中。 物预溶 按称量药物重量的 3倍加预溶剂到 烧杯 中，充分搅拌溶解。 存液 定容 向 加入容量瓶 加 入 蒸馏水 稀释，最后定容 1 000 过滤冷藏可储存 7 d。 倍 母液稀释 另取一个 500 加入 100 移液器精确吸出 10 用移液器精确吸取定容储存液 10 杯 充分混匀。 围筛选 度药液配备 参照 取 10支试管， 第 1管 加入 10 第 2 10管 分别 加入 4 第 1管 吸出 2 入 2 吸出 2 吸 4 管 混匀，再吸 4 管 混匀，以此类推到第 8管 ； 第 8管混匀后吸出 4 配置成 20 g/10 g/5 g/ g/ g/ g/ g/ g/第 9管和第 10管不加药物，第 9管作细菌生长对照，第 10管作无菌控制对照。 注： 配置磺胺类药物的梯度浓度时， 第 1管吸出 入 液 混匀， 吸出 2 吸 4 管 混匀，再吸 4 管 混匀，以此类推到第 8管 ； 第 8管混匀后吸出 4 配置成 512 g/56 g/128 g/64 g/32 g/16 g/8 g/ g/ 悬 液制备 取 经配套营养琼脂平板新鲜培养的 待检菌株 ， 用 菌生理盐水洗到 已灭菌 的试管中，加 菌生理盐水至菌液浓度为 108 液浓度用麦氏比色管校正。 液接种 菌液制备好后，应 在 15 9管试管中，第 10管不加。菌液接种后的最终浓度为 5 105 菌液浓度用麦氏比色管校正。 育 菌液接种后，于 28生化培养箱孵育 24 h。 2016 4 果观察 取出 试管观察 ： 试管中液体澄清为无菌生长、半浑浊为少量菌生长、 浑浊 为大量菌生长， 细菌生长对照 管 浑浊 、 无菌控制对照 管 澄清 。 记录 试管中液体澄清的最小药液浓度和半浑浊的药液浓度。 定 根据最小药液浓度和半浑浊的药液浓度配置梯度药液，按照 取并记录最小抑菌浓度（ 质控药物的 g/ g/验有效。 菌圈测定 板制备 取上述菌悬液 100 L，注入营养琼脂平板中，用三角涂棒 将菌悬液均匀涂抹于营养琼脂平板上。 液配置 按照 、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20倍浓度分别配置药液。 敏试验 无菌条件下 ，将 经酒精灯火焰 烧热一端 的 牛津杯 放置在 涂抹了菌悬液的营养琼脂平板上 ， 间距 3 个 培养基 平板 放置 5 个 。 将 配置好的各种浓度药液 加 入 牛津杯 杯体 中 ， 药液 加至满而不溢为止。将 营养琼脂平板 置 37生化培养箱 中培养 24 h。 菌圈测量 取出 营养琼脂平 板 ，测量 记录 抑菌圈直径 ，并按照美国临床实验室标准化委员会（ 新版的药敏试验标准判断各种浓度药液是否敏感。 定 抑菌圈测定 敏感 的最小 药物浓度 说明书 的 用药浓度， 判定该抗生素 有效。 6 消毒剂药效检验 物称量 按药物使用说明书用量的 1 000倍 ，用精确度为 0.1 于 1 。 示例 2： 某 厂家生产的某 品牌含量 8%二氧化氯，说明书治疗用量为每 667 体用 100 g 150 g。取最大用量 150 g，用药浓度为 。称量时，准确 称取 224.9 氧化 氯， 置于 1 000 量瓶 中。 液制备 向 容量瓶 加入蒸馏水 溶解、 稀释 ，充分 搅匀 ， 最后定容 1 000 2016 5 验 殖用水消毒 取 30 0 然后从容器中准确取出 20 0 混匀 静置 消毒 2 h。 菌培养 分别取养殖用水和消毒 2 00 L，在 无菌条件下 ，分别 涂布于无菌平板上 ， 28培养 24 h。 果观察 培养 24 出 平板观察菌落生长情况 。 定 涂布 养殖用水 平板长菌 ， 涂布 消毒 2 板 不 长菌 ，判定 该 消毒剂有效。 7 杀虫 驱虫 药药 效检验 用杀虫药 物称量 按药物使用说明书用量的 1 000倍，用精确度为 0.1 于 1 。 示例 3： 如 1 包 200 g 的杀虫药可用于 8 亩 1 m 水深池塘，即每 667 体用 25 g，用药浓度为 。称量时，准确 称取 37.5 虫药， 置于 1 000 量瓶 中。 液制备 向 加入容量瓶 加入蒸馏水 溶解、 稀释 ，充分搅匀 ， 最后定容 1 000 液稀释 取 50个，分别 加入 40 后 分别 从容器中准确 移 出 40 0 ， 充分搅匀 。 再取 50个， 加入 40 作为对照。 验 向 4个容器分别 放 6尾 8尾 确诊感染 寄生虫的鱼 种入稀释 母液 的容器 ， 30 生物显微镜 逐一检查鱼体 表或鳃 上寄生虫 的 脱落或死亡 情况 。 定 2 检验组 鱼体表或鳃上寄生虫 大部分 脱落或死亡 ， 对照组鱼体表或鳃上寄生虫没有 脱落 ， 判定 该杀虫药 有效。 服驱虫药 鱼样品 暂养 取 250 个， 3个为检验组， 1个为对照组； 分别 加入养殖用水 150 L， 各 放养 确诊感染 体内寄生虫 的鱼种 7尾 8尾， 不间断充气增氧，投喂饲料 1次 /d，吸污 1次 /d。 鱼种放养前称量总 重。 2016 6 物称量 根据暂养鱼种总 重 和 药物使用说明书 ，计算出鱼种用药 总 量， 按 鱼种用药 总 量 的 1 000倍精确度称量药物，置于 1 。 液制备 向 容量瓶 加入蒸馏水 溶解、 稀释 ，充分搅匀， 最后定容 1 000 饵制作 根据鱼种总重，按 投 率 算出饲料日投喂量。 准确 吸取 1 ， 用蒸馏水稀释 5倍 10倍，均匀拌入饲料中，静置 15 饵投喂 按说明书 给检验组的鱼 投喂 药饵 1个 疗程， 1次 /d；对照组投喂饲料 1次 /d。 定 投喂 药饵 1个 疗程 后 次日 ， 逐一解剖鱼， 检查体内 寄 生虫 ， 检验组鱼无 寄生虫 的 ， 对照组鱼有 寄生虫 的 ， 判定该驱虫药有效 。 8 水质改良剂药效检验 物称量 根据 药物使用说明书 计算出 10 按 10 1 000倍，精确称量药物，置于 30 。 液制备 向塑料容器加入蒸馏水，充分搅匀，最后定容 10 L。 液稀释 取 250 00 水， 用快速水质监测仪检测水体的氨氮 ，确定 氨氮含量 1 ；然后从容器中准确取出 2 ， 充分搅匀 ， 静置 1 定 用药前水质 的氨氮 含量 1 ，用药 1 0.3 ， 判定该 水质改良剂 有效。 9 免疫增强剂药效检验 龟样品 暂养 取 50 个， 3个为检验组， 1个为对照组；分别加入养殖池 水 20 L，放养 精神萎靡不振 、 两眼暗淡无神 、活动迟缓的幼龟 7只 8只，投喂饲料 1次 /d，换水 1次 /d。幼龟放养前称量总 重。 2016 7 物称量 根据暂养幼龟总重和 药物使用说明书 计算出幼龟用药 总 量， 按 幼龟用药 总 量 的 1 000倍 精确称量药物，置于 1 000 。 液制备 向 容量瓶 加入蒸馏水 溶解、 稀释 ，充分搅匀，最后定容 1 000 饵制作 根据幼龟总重，按 投 率 算出饲料 日 投喂 量 。 准确 吸取 1 ， 用蒸馏水稀释 5 10倍，均匀拌入饲料中，静置 15 饵投喂 给检验组的幼龟 投喂 药饵 1次 /d，连续 3d。 对照组投喂饲料 1次 /d。 果观察 连续 投喂 药饵 3 观察幼龟的精神状态和活动。 定 检验组的幼龟， 精神 状态逐渐好转， 两眼 转为有 神 发亮， 活动迟缓 明显改善 ；对照组的幼龟仍维持原来的精神状态， 判定该 免疫增强剂 有效。 10 记录 记录药效检验的试剂与材料、仪器 设备与器具 、抗生素药效检验、消毒剂药效检验、杀虫驱虫药药效检验 、水质改良剂药效检验、免疫增强剂药效检验的整个过程，保存为纸质版和电子版。 _