消癌胶囊质量标准研究

.消癌平胶囊质量标准研究消癌平胶囊是由凤尾草、青木香、莪术、三棱、金荞麦、体外培育牛黄、肿节风、白术、空心莲子草九味药组成，具有扶正祛邪、软坚散结、健脾益肾，调动巨噬细胞和幼噬细胞，选择性扼杀癌细胞促进未坏死和液化部分转变为正常组织的功效。研究处方中各药味的有效成分及其理化性质，有助于制定合理的制备工艺、完善的质量标准，从而保证制剂的质量。1.1药品原料（药材）的质量研究及文献资料凤尾草干燥全草主要有1个倍半萜苷和6个黄酮类化合物；莪术中含挥发油和姜黄素两大类成分，三陵化学成分主要为黄酮类、皂苷类、苯丙素类、挥发油等；肿节风药材为中国药典收录的常用中药,有显著的抑制肿瘤、抗菌消炎、抗血小板减少等药理作用,主要化学成分有萜类化合物、黄酮、香豆素和酚酸类物质等；白术主要含有挥发油、内酯类、多糖、氨基酸等成分；空心莲子草含有甜菜碱、焦谷氨酸、齐墩果酸、万寿菊素、硝酸钾；体外培育牛黄含胆酸5%11%，去氧胆酸约2%，鹅去氧胆酸0.6%1.7%及其盐类，胆红素（bilirubin）及其钙盐；并含胆甾醇、麦角甾醇、卵磷脂、脂肪酸、维生素D、水溶性肽类成分SMC、类胡萝卜素、丙氨酸、甘氨酸、牛磺酸、天门冬氨酸、精氨酸、亮氨酸、蛋氨酸等多种氨基酸。上述成分，既有水溶性成分、又有脂溶性成分，因此采用低温干燥，全部成粉，为减少有效成分的丢失，直接将粉末装在硬胶囊里，制成胶囊剂，便于服用及贮藏。1.1.1凤尾草为凤尾厥科植物凤尾草 Pteris multifida Poir.的干燥全草。有清热利湿、消肿解毒、凉血止血等功效，可治疗多种疾病。经检验，药材符合中华人民共和国药典1977年版第120页凤尾草项下有关规定1.1.2金荞麦 为蓼科植物金荞麦Fagopyrum dibotrys(D.Don)Hara的干燥根茎。金荞麦中含有红车轴草黄酮()、木犀草素7,4-二甲醚()、大黄素()、鼠李素()、3,6,3,4-四羟基-7-甲氧基黄酮()、-谷甾醇()、-胡萝卜苷()；多种成分。有清热解毒，排脓祛瘀的功效。用于肺痈吐脓，肺热 咳，乳蛾肿痛。经检验，药材符合中华人民共和国药典2015版一部218页金荞麦项下有关规定1.1.3莪术 为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang、温郁金Curcumawenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎。莪术中含挥发油和姜黄素两大类成分。有行气破血，消积止痛的功效。用于癥瘕痞块，瘀血经闭，胸痹心痛，食积胀痛。 经检验，药材符合中华人民共和国药典2015年版一部第274页莪术项下有关规定1.1.4三棱 为黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham的干燥块茎。含三陵化学成分主要为黄酮类、皂苷类、苯丙素类、挥发油等；有破血行气，消积止痛的功效，用于癥瘕痞块，痛经，瘀血经闭，胸痹心痛，食积胀痛。 经检验，药材符合中华人民共和国药典2015年版一部第13页三棱项下有关规定1.1.5肿节风 为金栗兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb.)Nakai的干燥全草。肿节风药材为中国药典收录的常用中药,有显著的抑制肿瘤、抗菌消炎、抗血小板减少等药理作用,主要化学成分有萜类化合物、黄酮、香豆素和酚酸类物质等。 经检验，药材符合中华人民共和国药典2015年版一部第223页肿节风项下有关规定1.1.6白术 为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎。白术主要含有挥发油、内酯类、多糖、氨基酸等成分；有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎的功效。用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。 经检验，药材符合中华人民共和国药典2015年版一部第103页白术项下有关规定1.1.7青木香 为马兜铃科植物马兜铃Aristolochia debilis Sieb. et Zucc的干燥根。金荞麦中含有红车轴草黄酮()、木犀草素7,4-二甲醚()、大黄素()、鼠李素()、3,6,3,4-四羟基-7-甲氧基黄酮()、-谷甾醇()、-胡萝卜苷()；多种成分。有平肝止痛，解毒消肿的功效。用于眩晕头痛，胸腹胀痛，痈肿疔疮，蛇虫咬伤。 经检验，药材符合中华人民共和国药典2000版一部154页青木香项下有关规定1.1.8体外培育牛黄 以牛科动物牛Bos taurs domesticus Gmelin的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙制成。有清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒的功效，用于热病神昏，中风痰迷，惊痫抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。 经检验，药材符合中华人民共和国药典2015年版一部第173页体外培育牛黄项下有关规定1.1.9空心莲子草 为苋科植物空心莲子草Alternthera philoides（Mart.）Griseb.的地上部分，空心莲子草含有甜菜碱、焦谷氨酸、齐墩果酸、万寿菊素、硝酸钾等多种成分。有清热，凉血，解毒的功效。对于某些病毒感染性疾患有缩短病程与减轻中毒症状的作用。 经检验，药材符合中华人民共和国药典1977年版第376页空心莲子草项下有关规定1.2 影响制剂质量的制备工艺研究1.2.1 前处理方法对质量的影响 消癌平胶囊处方中药材成分复杂，白术、三棱等含有大量挥发油，其他药味既有水溶性成分，又有脂溶性成分，这些都是有效成分，为减少有效成分的丢失，所有原料药通过净选切制，低温干燥，成粉，得质量合格的产品，保证药效不被降低。1.2.2 半成品质量研究根据胶囊剂型特点,药材经过前处理，粉碎成120目的细粉，装入胶囊，可得到质量稳定，合格的消癌平胶囊。因此半成品粉末控制在120目。1.2.3 辅料对质量的影响 1.2.3.1本品为胶囊剂，全部药材成粉，除明胶空心胶囊外，没使用任何辅料。 1.2.3.2辅料的来源及质量标准：明胶空心胶囊质量标准收载于中国药典2015年版二部第1204页。1.3 成品的理化性质研究 再注册批件情况：消癌平胶囊再注册批件的批件号渝制再Z20080004，批准时间2008年12月19日，再注册批件中,对质量标准部分要求“在再注册批件有效期内继续完善质量标准，考察制剂稳定性，确保本制剂安全有效” 我公司委托重庆市药检所对质量标准进行提高，制定了肿节风的含量测定和青木风中马兜铃酸的含量限度，按再注册批件要求进行相关研究及资料整理，研究结果：采用高效液相色谱检测法研究处方中君药肿节风质量控制方法，测定异嗪皮啶的含量，根据多批产品含量检测结果，初步制定含量限度为本品每粒含肿节风以异嗪皮啶（C11H10O5）计，不得少于3g。并以该方法为基础进行了稳定性考察。本品质量标准制订参照中国药典2015年版四部胶囊剂制剂通则的规定，质量研究内容包括性状、鉴别、检查、含量测定等各项规定项目。制订了性状、鉴别、检查、含量测定等质量检验项目，以控制成品质量。1.3.1 性状 本品为九味药材制成的胶囊剂，由于药材中成分复杂。采用全部取粉，保留有效成分，装入胶囊，密闭贮藏。根据多个批次消癌平胶囊生产，其性状为本品为胶囊剂，内容物为浅褐黄色粉末；气香，味微苦、微辛。1.3.2 鉴别 鉴别项设立了贵重药材体外培育牛黄的鉴别。 体外培育牛黄为方中贵重药，具清心、豁痰、开窍、凉肝、息风、解毒，用于热病神昏，中风痰迷，惊痫抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮等，故设立本鉴别来控制本品中体外培育牛黄。体外培育牛黄主要成分为胆酸、去氧胆酸等。取本品内容物分别采取以下两种方法进行研究：(1)加氯仿，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取胆酸、去氧胆酸对照品加乙醇使溶解作为供照品溶液，以异辛烷一醋酸乙酯-冰醋酸(15：7：5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，供试品色谱中，在与胆酸对照品色谱相应的位置上，略显相同颜色的荧光斑点，但因有背景色带干扰使斑点不清晰；在与去氧胆酸对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的荧光斑点。(2)取本品加甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干残渣加氨试液溶解，并转移至分液漏斗中，用氯仿洗涤，弃去氧仿液，碱水液用盐酸调pH值到l，再用氯仿提取，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解作为供试品溶液。另取胆酸对照品加甲醇制成每Iml含Img的溶液作为对照品溶液。以环己烷一醋酸乙酯一醋酸一甲醇(20：25：2：3)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰，R1值较好。故将方法(2)收入正文。 用薄层色谱法检查消癌平胶囊中体外培育牛黄，实验证明，成品与标准品在相应位置均有相同颜色的斑点，缺阴性样品色谱相应的位置无干扰，方法可靠，重现性好。1.3.3 检查 进行了水分、装量差异、崩解时限、微生物限度等检查研究，与临床前研究一致，重金属及砷盐含量，由于含量甚微，暂不列入质量标准草案。此次检查项目增加了马兜铃酸的限量检查：关于马兜铃酸限量说明国家食品药品监督管理局于2004年8月5日在网上发布“关于加强广防己等6种药材及其制剂监管管理的通知”。为保证人民群众用药安全，根据对含马兜铃酸药材及其制剂不良反应的报道以及毒副作用研究和结果的分析，决定加强对含马兜铃酸药材及其制剂的监督管理，但是第九条中规定：抗艾滋病病毒和用于诊断，预防艾滋病的新药，治疗恶性肿瘤、罕见病等的新药以及治疗尚无有效医疗手段的疾病新药等特殊情况除外（见附件） 根据含有马兜铃酸的药材及中成药严加管理控制，虽然对我们治疗癌症的圣百草院内制剂的申报、审批开了绿灯，但为了圣百草既能够发挥药效治疗癌症，使癌症病人重新获得新生，同时不至于由于马兜铃酸的不良反应和毒副作用，使病人肾功能受到损害。我们分析圣百草的组成，对其进行了测定和研究，表1 两种中成药的比较药品名称药物成分所占比例马兜铃酸含量备注消癌平胶囊青木香0.05%0.00%治疗药，短期使用龙胆泻肝丸关木通7.20%0.26% 表2 5批消癌平胶囊和药材中马兜铃酸含量名称批号马兜铃酸测定结果备注青木香对照药材201205253.60%青木香201212103.40%消癌平胶囊130100119mg/kg消癌平胶囊130200221mg/kg消癌平胶囊130200320.1mg/kg消癌平胶囊130300419.2mg/kg消癌平胶囊130300518.2mg/kg 从表1中可以看出“消癌平胶囊”中青木香的用药量为0.05%，马兜铃酸含量为0.0018%（约为20mg/kg）。我们从中国药典2005版一部428页“龙胆泻肝丸”中成药中含关木通的量作了比较，“龙胆泻肝丸”比消癌平胶囊中马兜铃酸含量高150倍。 从表2中看出百草胶囊所检测的批次中马兜铃酸的含量都在20mg/kg范围内，考虑到生产过程的批次差异性问题，分析测定中不同条件，不同对照品和人为因素影响，设定限量值比测定平均值大0.25倍作为限量值（即25mg/kg或每粒小于0.01mg）是可行的。这个限量值是根据消癌平胶囊中马兜铃酸的实际情况作出来的这个水平值，应该是安全的。1.3.4含量测定 异嗪皮啶含量测定，指标和方法确定 异嗪皮啶是肿节风的重要活性成分，故选择肿节风为含量测定的指标成分。临床前研究对成品中异嗪皮啶未做含量测定，在含量检测研究工作中，随着检测技术的进步，高效液相色谱法快速、简便、精确、灵敏并且重现性好，较少受人为因素影响。在之前的实际生产过程中，连续进行了5批次配制的样品含量检测，采用高效液相色谱测定异嗪皮啶的含量，积累5批次含量测定结果结合稳定性试验三批测定异嗪皮啶的含量结果，初步制定含量限度为每1粒胶囊含异嗪皮啶(C11H10O5)不得少于3g。见表2表2五批样品测定结果批 号异嗪皮啶含量（ug/粒）130100123130200225130200322.51303004261303005241.4稳定性研究 采用三批中试生产消癌平胶囊的样品（批号：1408001、1408002、1408003），用口服固体药用聚乙烯瓶密封包装（市售包装），从2014年9月开始进行6个月加速稳定性试验和24个月室温留样稳定性试验。 结果表明，消癌平胶囊性状、鉴别、水分、崩解时限、含量在24个月后与初始值比较都无显著变化，卫生学检查合格，各项检查均符合拟采用的消癌平胶囊质量标准要求，表明消癌平胶囊质量稳定。暂定有效期为24个月。1.5影响成品质量的直接接触药品的包装材料研究 直接接触药品包装材料的性质与消癌平胶囊的质量关系很大。口服固体药用高密度聚乙烯瓶具有重量轻，不易破碎，密封性好的优点。通过加速稳定性试验、长期稳定性试验研究，口服固体药用高密度聚乙烯瓶包装能保证消癌平胶囊质量在有效期内稳定。主 要 参 考 文 献1 李仪奎,姜名瑛主编中药药理学北京；中国中医药出版社，19922 江苏新医学院编中药大辞典上海；上海科学技术出版社， 19953 国家医药管理局中草药情报中心站编植物有效成分手册北京；人民卫生出版社，19864任仁安主编中药鉴定学上海；上海科学技术出版社，1989.