甘油的检测方法汇总

甘油的检测方法汇总在发酵行业中，甘油作为底物，是发酵液中生物合成的直接前体， 会影响外源蛋白的启动 表达效率，其含量的上下直接影响产物的发酵单位， 是决定菌种取舍的重要指标，是提高工程 菌的发酵密度，提高产品生产率的关键。在生物柴油生产中，它是副产物，其含量直接影响生 物柴油的使用性能，是衡量生物柴油产品品质的重要指标之一。此外，甘油能与水结合以防止红细胞的冷冻损伤，能延长红细胞的保存期，被普遍用作细胞内冷冻保护剂等。由丁甘油用途 很广，因此其含量的测定具有非常重要的意义。目前国内外甘油含量的测定方法较多，主要有高碘酸氧化法、Cif +络合比色法、酶比色法法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、近红外光谱法以及原子吸收法 等。下面将对其进行简要概述：一、局碘酸法1. 原理：高碘酸氧化法是目前常见用丁甘油含量检测的方法，利用高碘酸与甘油发生氧化复原反响，剩余高碘酸及反响生成的碘酸与碘化钾反响生成碘，再用硫代硫酸钠进行滴定，根据消耗的硫代硫酸钠的量来计算甘油的含量。2. 操作步骤准确发酵液10ml 丁 100mL/b烧杯中，加少量水溶解，然后转移至 100mL容量瓶中，用水稀释 至标线，摇匀，静置。用移液管准确移取10mL述溶液丁碘量瓶中，参加20mL高碘酸钠溶液， 混合均匀后，丁黑暗中避光静置40min,然后参加碘化钾溶液和20就酸溶液各15mL调节pH 值在0.81.0之间，然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定， 近终点时，参加2mL淀粉指示剂溶液， 继续滴定至溶液蓝色消失。同时做试样空白。o、工百V2V1XCM me3. 计算：w=妇0010/50 4 1000式中：w样品中甘油的含量，;V1空白试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml；V2试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mLC一硫代硫酸钠标准溶液的浓度， mol/L; M甘油相对分子质量；二、酶比色法1. 原理：它是利用酶的特异性催化反响建立的测定甘油的一种酶学方法，是指甘油在甘油激酶作用下转化为3-磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，然后 过氧化氢和4-氨基安普比林、4-氯酚在过氧化物酶催化下反响生成紫兰色、能在 500 nm左右 有特征吸收峰的酿业胺，通过颜色深浅即吸光度的变化测定所生成的H2C2,甘油的含量与生成的JQ成正比，这样用比色法就可以测定甘油的含量。2. 操作步骤波长：500nm 480520nm反映温度：37C 比色杯光径：1cm取一定量R1参看R2瓶签参加1瓶R2中，溶解后即为工作液，工作液预先保温至测试温度。空白管校准管样品管工作液1ml1ml1ml蒸僻水0.01 |00标准品0.011样品000.01分别混合均匀，在反响温度保温10分钟，以试剂空白管校零，记录校准及样品ODfi3.计算： 甘油浓度=A样品/A校准X校准浓度mmol/L或mg/dl三、高效液相色谱法1. 原理：高效液相色谱法HPLC的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，利用色 谱柱对待测混合物先进行别离，然后再进行检测，从而实现对试样的分析，因而其测量的准确 性和精确度较高，目前已成为检测生化分子较常用的一种方法。2. 操作步骤1首先用水将发酵液稀释2.5倍，然后加HPO调pH至5.5,在转速8000r/min、温度4C下 离心10min，经微孔滤膜过滤用丁 HPLS析；2 将甘油标准系列溶液在最正确色谱条件下进行HPLC析,以峰面积外标法定量得到甘油标 准曲线；3 按照样品预处理方法处理后进样 5微升,记录峰面积，代入线性方程中，计算其测定值。将 计算值乘以稀释倍数后，即得发酵液中甘油的含量。四、气相色谱法1. 原理：气相色谱分析法是用丁别离分析复杂样品中的化合物的一种方法，其原理是一定量的气体或液体分析物被注入到柱一端的进样口中，在载气带动下通过色谱柱，分析物的分子会受到柱壁或柱中填料的吸附。由丁不同的样品具有不同的物理和化学性质，与特定的固定相有着不同的相互作用，使得每一种类型的分子都有自己的通过速率，因此，分析物中的各种不同组分就会在不同的时间到达柱的末端， 从而得到别离。当化合物从柱的末端流出时，它们被检测 器检测到，产生相应的信号，并被转化为电信号输出，从而确定每一个组分到达色谱柱末端的 时间顺序以及每一个组分的含量。2. 操作步骤1 标准溶液的配制 在7个25mL容量瓶中分别准确称入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5g甘油精确至0.1mg,再分别移入2mL内标贮备液，用混合溶剂定容并摇匀，作为标准 工作溶液。其中甘油质量浓度分别为 0、2、4、8、12、20g/L，内标质量浓度均为8g/L。2 样品的制备 在25mL容量瓶中参加5ml的发酵液样品，移入2mL内标贮备液，用混合溶 剂定容至刻度并摇匀。3GCM牛色谱柱：HP-5石英毛细管柱，30m柱长x 0.32mm内径X 0.25从m膜厚。柱温：初 始温度120C，保存5min,以20C/min升至290C，保存10min。进样口温度：280C ,进样 量：0.2从L,分流比：100： 1。检测器FID温度：300C,氢气流速：40mL/min,空气流速： 300mL/min。载气：氮气，流速：1mL/min,包流模式(4)进样，计算五、酶电极法1、检测原理利用生物酶只能催化一种或一类底物的性质， 将甘油氧化酶进行固定化处理，样本中的甘油在 甘油酶膜的作用下被催化生成过氧化氢，根据电化学的原理，过氧化氢的浓度与电压值正相关， 根据标准液、缓冲液的电压值响应值来确定样本中甘油浓度。电压值与浓度的相关性分析甘油浓度e/LH油分析枚电压值m V甘油浓度与电压值相关性分析2. 操作步骤按相关操作说明进行。整个检测过程不超过 45秒应用范围：发酵过程甘油浓度检测，食品中甘油检测， 西尔曼科技国内唯家有能力生产可以不用 预稀释样本就可以检测高达1甘油浓度的分析的制造商六、总结甘油的测定方法很多，最常用的是化学法。化学法测定甘油含量费用较低，但操作繁琐，试剂 用量大，耗时长，且有时误差极大。酶法测定甘油专一性强，只与溶液中的甘油特异性地反响，但所 需试剂昂贵，不利丁工业应用和大量样品的检测。测定游离甘油最灵敏的方法是气相色谱法、液相色谱法，精确度较高，但需对甘油进行硅烷化，操作麻烦，本钱也较高。由丁高碘量法受发酵液中的杂质糖类、多元醇影响大，特别是发酵中甘油含量低时，单用此方法检测根本不准确；高效液相色谱法检测准确，但发酵样品前处理工作量大，不适合产生 大量样品的。因此使用酶电极法测定发酵液中甘油含量，具有速度快、专一性强，由丁固定化 酶可以重复利用，单次检测相对丁酶比色法具有更低的本钱。