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植物生理学实验课件丙二喉是膝脂过氧化景重要的产物 之一。植物在逆境下遭癸伤毒与活性氧 我累诱发的膜质过氧化作用卷切相关。理植物在逆境下遭受伤害(或衰老)与活性氧积累诱发的膜脂过氧 化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有:烯桅合物、脂类过氧化 物、内二醛、乙烷等。其中内二醛(MDA： Malondialdehyde) 是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂 过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5,三甲基恶唾2,4二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。1. 分光光度计：2. 研钵：3. 剪刀；4. 恒温水浴；5. 试管：20 mLx46. 离心机。1.2.3.5 %三氯醋酸；0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）；0.05 mol - L-1磷酸缓冲液,pH 7.8o正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。YVxW1 .取小麦植株上不同叶位的叶片35片，洗净擦干，剪 成。.5 cm长的小段，混匀。2 .称取叶片切段。.3 g,放入冰浴的研钵中，加入少许 石英砂和2 mL 0.05 mol - L-1磷酸缓冲液，研磨成 匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol - L-L磷酸缓冲液，分二次冲洗研钵，合并提取液。3 .在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇 匀O4 .将试管放入沸水浴中煮沸1。min,（自试管内溶液 中出现小气泡开始计时）。至IJ时间后，立即将试管取出 并放入冷水浴中。5 .待试管内溶液冷却后，3000xg离心15 min,取上清 液并量其体积。以。.5 %硫代巴工匕妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消先彳直 4r算结果MDA( mmol g FW)= 6.452 x(D532- D6(X)- 0.559 x D45() x 1.可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 rlm 也有吸收（最大吸收在450 nm）,当植物处 于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会 增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。2.低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色 反应，当植物组织M铁离子浓度过低时应补充Fe3+ （最终浓度为0.5 nmol L-1）3.如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间,最好使用低温离心机离心。.
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