024 洁净区沉降菌检测标准操作规程

QB瑞阳制药有限公司企业标准 QB/RY.4.02.2061024 冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测标准操作规程2015-11-23颁发 2015-12-01实施瑞阳制药有限公司 粉针事业部综合办公室 颁发目 录1. 目的12. 主题内容与适用范围13. 定义14. 引用标准25. 操作规程26. 重点操作复核制147. 中间产品质量标准和控制规定158. 安全防火及劳动保护159. 异常情况的处理和报告1510. 设备维护及使用1611. 技术经济指标的计算1612. 度量衡的使用与校正1613. 相关记录1614. 附录16 文件编号QB/RY.4.02.2061024页码18/20版本04洁净区沉降菌检测标准操作规程1. 目的建立冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测标准操作规程，确保洁净区内沉降菌检测的操作符合质量要求。2. 主题内容与适用范围本规程规定了冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测的相关目的；相关定义及引用标准；规定了生产操作方法；重点操作复核；质量标准与控制；安全防火与劳动保护；异常情况的处理和报告；设备的维护及使用；技术经济指标的计算；度量衡器的使用与校正；以及相关记录和附录。本规程适用于冻干粉针剂车间（206）洁净区沉降菌检测的操作。3. 定义3.1 洁净室（区）：需要对环境中尘埃及微生物污染进行控制的房间（区域），其建筑结构、装备及其使用应当能够减少该区域内污染物的引入、产生和滞留。3.2 沉降菌：用医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。3.3 菌落： 细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集合体，称为菌落，简称CFU。通常用个数表示。3.4 动态：指生产设备按预定的工艺模式运行并有规定数量的操作人员在现场操作的状态。3.5 动态测试： 洁净室（区）已处于生产状态下的测试。3.6 警戒限度： 系统的关键参数超出正常范围，但未达到纠偏限度，需要引起警觉，可能需要采取纠正措施的限度标准。3.7 纠偏限度：系统的关键参数超出可接受标准，需要进行调查并采取纠正措施的限度标准。3.8 单向流：指空气朝着同一个方向，以稳定均匀的方式和足够的速率流动。单向流能够持续清除关键操作区域的颗粒。 3.9非单向流：具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。4. 引用标准药品生产质量管理规范（2010年修订）医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法生产工艺规程5. 操作规程5.1 工作原理沉降菌通过自然沉降原理，收集空气中的微生物粒子于胰蛋白胨大豆营养琼脂培养皿中，取样后放入32.52.5的恒温箱内倒置培养不少于48小时，让其繁殖到可见的菌落计数，以培养皿中的菌落数来判定洁净环境内活微生物数。5.2 检测频次及检测标准表1洁净级别检测频次检测标准A级连续检测1 cfu/4小时B级关键点连续检测5cfu/4小时非关键点在停产后再生产时、停产前最后一天以及正常生产过程中每周检测一次C级关键点停产后再生产时、停产前最后一天以及正常生产过程中每周检测一次50cfu/4小时非关键点停产后再生产时、停产前最后一天以及正常生产过程中每月检测一次D级所有点停产后再生产时、停产前最后一天以及正常生产过程中每月检测一次100cfu/4小时备注: 1. 当某一指标达到警戒限度应查找原因。2. 单个沉降菌碟的暴露时间可以少于4小时，少于4小时的标注采样时长并按4小时折算计(4*实际菌落个数/实际小时数)，在生产时间可预知的前提下，单个沉降菌碟的暴露时间少于4小时的，同一位置可使用多个沉降菌碟连续进行监测并累计计数。5.3 检测状态静态测试、动态测试5.4 检测人员A级区、B级区、C级区：车间质检员、岗位班组长D级区：岗位班组长5.5 检测条件5.5.1 温度和相对湿度表2洁净级别温度()相对湿度()B18263070C、D182630705.5.2 压差：相同洁净度级别的不同功能区域（操作间）之间应当保持适当的压差梯度，空气洁净度不同的洁净室之间压差10Pa，洁净区相对一般生产区10Pa。洁净区（室）空气与室外大气保持相对正压，其静压差大于10Pa，易产生粉尘的洁净区（室）与其相邻的洁净区（室）保持相对负压,其静压差大于5Pa。5.5.3 静态a测试时，对单向流洁净室（区），测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始。对非单向流洁净室（区），测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。在静态b测试时，对单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始；对非单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。5.5.4 在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。5.6 采样点的确定及计数标准5.6.1 最少采样点数目 NL=A洁净室或被控洁净区的面积，单位平方米（）NL最少采样点数(四舍五入取靠近的整数)；5.6.2 最少培养皿数表3洁净度级别所需90mm培养皿数（以沉降4h计）A级14B级2C级2D级25.6.3 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。5.6.4 平均菌落数的计算平均菌落数M =（M1M2Mn）/nM：平均菌落数 M1：1号培养皿菌落数 M2：2号培养皿菌落数 Mn：n号培养皿菌落数n：培养皿总数5.7 各洁净级别各岗位检测采样点数、位置以及检测周期、检测标准：表3 各房间沉降菌检测采样点列表房间编号采样区域洁净级别日常生产检测点数量关键点编号非关键点编号层流1整个层流1下A41-4层流2整个层流2下A41-4层流31#进料小车A21,2层流42#进料小车A21,2层流5出料小车A21,2层流6出料平台A11层流7工器具暂存层流A21,2层流8自动隔离出料系统A11层流9胶塞暂存架A11层流13大转盘处A11层流15铝塑组合盖暂存架前A11表3 各房间沉降菌检测采样点列表（续）房间编号采样区域洁净级别日常生产检测点数量关键点编号非关键点编号43穿无菌外衣间B1144气锁间B1148取无菌衣间B1149灌装间B91-950器具存放间B1151胶塞存放间B1153出料间B31-345B级走廊B1146气锁间B1152培养基暂存间B1154B级废弃物暂存间B1105C级脱衣间C1108发衣间C1115洗衣间C21,216配药间C21,210原辅料存放间C1113原辅料称量间C1114配炭间C1138C级穿衣间C1139气锁间C1140轧盖间C21,227D级穿衣间D1129D级走廊D21,230消毒剂配制间D1131工器具存放间D1132塞盖存放间D1133洗烘间D31-334D级废弃物暂存间D1136消毒间D41-4表4 各房间沉降菌采样点位置、检测频次、检测标准房间编号采样点编号位置是否为关键点检测频次警戒限（cfu/皿）纠偏限（cfu/皿）检测标准（cfu/4小时）层流11进瓶拨轮旁关键点连续监测0012胶塞加料斗旁关键点003转向齿轮旁关键点0041#理平台东北角关键点00层流21进瓶拨轮旁关键点002胶塞加料斗旁关键点003转向齿轮旁关键点0042#理平台东北角关键点00层流31对接口左侧关键点002对接口右侧关键点00层流41对接口左侧关键点002对接口右侧关键点00层流51对接口左侧关键点002对接口右侧关键点00层流61出料平台一侧关键点00层流71悬浮粒子检测旁关键点00层流81悬浮粒子检测旁关键点00层流91胶塞暂存架旁关键点00层流131大转盘层流下关键点00层流151铝塑组合盖存放层流下关键点00431层流衣橱旁关键点255441进B级走廊门口处关键点25481机动门口处关键点25表4（续） 各房间沉降菌采样点位置、检测频次、检测标准房间编号采样点编号位置是否为关键点检测频次警戒限（cfu/皿）纠偏限（cfu/皿）检测标准（cfu/4小时）4912#灌装机触摸屏前关键点连续检测25521#灌装机触摸屏前关键点2532#灌装机添加胶塞台旁关键点2541#灌装机添加胶塞台旁关键点255记录桌前关键点2562#出料平台控制面板前关键点2571#出料平台控制面板前关键点258传递窗旁关键点259进B级走廊门口处关键点25501机动门出口处关键点25511隔离自动出料系统前关键点25531记录桌前关键点252出料平台对接平台西侧关键点253出料平台输送带东侧关键点25451气锁间（44）出门口处非关键点每周一次255461进气锁间门口处非关键点25521培养箱旁边非关键点25541废弃物暂存间门口处非关键点25051传递窗门前关键点每周一次55050081传递窗口前关键点550151记录桌前关键点5502洗衣机前关键点550161操作台前关键点5502进原辅料称量间门口处关键点550表4 各房间沉降菌采样点位置、检测频次、检测标准房间编号采样点编号位置是否为关键点检测频次警戒限（cfu/皿）纠偏限（cfu/皿）检测标准（cfu/4小时）101传递窗门口前非关键点每月一次55050131进配药间门口处非关键点550141进配药间门口处非关键点550381穿衣间衣架旁关键点每周一次550391气锁间门口处关键点550401进门口左侧记录桌旁关键点5502传递窗门口处关键点550271进气锁间门口处关键点每月一次12100100291消毒间门口东侧关键点121002洗烘间门口南侧关键点12100301消毒剂配制罐附近关键点12100311工器具存放不锈钢架前关键点12100321塞盖存放不锈钢架前关键点121003311#洗瓶机清洗池西侧关键点121002记录桌前关键点1210031#洗瓶机清洗池西侧关键点12100341进D级走廊门口处关键点12100361脉动真空灭菌器前关键点121002清洗机附近关键点121003胶塞机附近关键点121004铝盖机附近关键点121005.8 各洁净级别各岗位验证期间采样点数、位置（如表5）按照附录中14.2.2附录A1图所示标志位置安放，验证期过后将趋势分析后可以略去位置点的标志去掉，即为日常沉降菌检测点位置：表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表房间编号房间名称洁净级别编号面积()采样点数（个）3C级穿衣间C级-11.2744气锁间C级-4.2935C级脱衣间C级-6.936C级走廊C级122.99527.2638发衣间C级-2.55210原辅料存放间C级-11.07411器具清洗间C级-6.987312器具存放间C级-6.27313原辅料称量间C级-7.98314配炭间C级-5.82315洗衣间C级-25.58616配药间C级-33.36617记录间C级-4.39318C级废弃物暂存间C级-2.14227D级穿衣间D级-8.21328气锁间D级-9.33429D级走廊D级131.05625.16330消毒剂配制间D级-13.25431工器具存放间D级-16.96532塞盖存放间D级-26.01633洗烘间D级115.22423.15232.16244.463517.31567.913718.445811.74490.812101.22234D级废弃物暂存间D级-3.782表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表（续）房间编号房间名称洁净级别编号面积()采样点数（个）36消毒间D级18.26325.083313.5445.673551.04864.553713.36484.88338C级穿衣间C级-10.83439气锁间C级-8.2340轧盖间C级12.122214.234321.85540.6250.4263.34270.6280.4293.342100.62110.42123.892130.152148.243150.532163.122170.76242穿无菌内衣间C级-19.32543穿无菌外衣间B级-17.64544气锁间B级-8.83345B级走廊B级-16.88546气锁间B级-6.45347脱无菌衣间C级-6.2348取无菌衣间B级-8.723表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表（续）房间编号房间名称洁净级别编号面积()采样点数（个）49灌装间B级17.98322.53233.27245.44359.334610.06477.48389.3491.192100.1721110.914126.453134.223140.722150.172166.833173.5321859.478196.173207.9332128.296226.1732311.0342451.5850器具存放间B级-7.64351胶塞存放间B级-10.24452培养基暂存间B级-3.83253出料间B级1214.21523.222310.36441.67252.68262.82254B级废弃物暂存间B级-4.773表5 各房间沉降菌验证期间检测采样点列表（续）房间编号房间名称洁净级别编号面积()采样点数（个）层流1灌装机1#层流A级16.581422.421433.111444.7214层流2灌装机2#层流A级16.641422.421433.941444.7214层流3进料小车1#层流A级-2.7314层流4进料小车2#层流A级-2.7314层流5出料小车层流A级-2.7314层流6出料平台层流A级13.391422.481431.5314层流7器具存放层流A级-1.2614层流8取胶塞层流A级-0.7214层流9胶塞存放层流A级-0.5814层流13轧盖机层流A级送风11.76223.75231.97240.48251.97260.48271.97280.482层流14取铝盖层流A级送风-0.722层流15铝盖存放层流A级送风-0.722层流19灌装高位罐层流1A级-0.4514层流20灌装高位罐层流2A级-0.45145.9检测方法5.9.1 A级洁净区沉降菌检测：车间质检员、灌装岗位班组长在取无菌衣间取出灭菌后在32.52.5的恒温培养箱内放置不超过72h且检查外观无异常的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，按A级洁净区沉降菌采样点布置图打开培养皿盖放置于工作台面上20cm处，培养基表面暴露4小时后，按照摆放先后顺序依次将培养皿盖上盖收集，边收集边放新的培养皿，收集完毕后将盛放培养皿的专用容器盖好盖，7#放入传递窗（206-103）。车间质检员将传递窗内培养皿取出，放入恒温培养箱内32.52.5倒置培养48小时。培养皿进入A级层流 需用无菌抹布蘸取75%乙醇溶液擦拭外表面一遍晾干后，放在A级区指定位置。5.9.2 B级洁净区沉降菌检测：车间质检员、班组质检员按照B级洁净区更衣标准操作规程（文件编号：QB/RY.4.02.2061014，XX）更衣进入B级洁净区，将32.52.5的电热恒温培养箱内放置不超过72h且检查外观无异常的胰酪胨大豆胨琼脂培养基做好标记，打开皿盖后，按B级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.81.5m处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控整个生产过程，如果四小时生产未结束，将原来的收起后，重新摆放），按照摆放先后顺序依次将培养皿盖上盖倒置收集，经7#传递窗（206-103）传至质检室，置于电热恒温培养箱内32.52.5倒置培养48小时。5.9.3 C级洁净区沉降菌检测：轧盖岗位：车间质检员、班组长按C级洁净区更衣标准操作规程（文件编号：QB/RY.4.02.2061013，XX）更衣，取出由B级洁净区人员经10#（206-106）、2#（206-098）传递窗传至C级洁净区的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，打开培养后，按C级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.81.5m处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控工作期间后四小时），再将培养皿盖上盖倒置收集，经8#传递窗（206-104）传至质检室内，置于电热恒温培养箱内32.52.5倒置培养48小时。洗衣岗位、配药岗位：车间质检员、班组质检员按C级洁净区更衣标准操作规程（文件编号：QB/RY.4.02.2061013，XX）更衣，取出由B级洁净区人员6#经传递窗（206-102）传至C级洁净区的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，打开皿盖后，按C级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.81.5m处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控工作期间后四小时），再将培养皿盖上盖倒置收集，经3#传递窗（206-099）传至质检室内，置于电热恒温培养箱内32.52.5倒置培养48小时。5.9.4 D级洁净区沉降菌检测：班组质检员按D级洁净区更衣标准操作规程（文件编号：QB/RY.4.02.2061046，XX）更衣， B级洁净区人员经10#传递窗（206-106）传至D级洁净区，传入D级洁净区的胰酪胨大豆胨琼脂培养基并做好标记，打开皿盖后，按D级洁净区沉降菌采样点布置图置于洁净区离地0.81.5m（采样架高度）处，使其略高于工作面，使培养基表面暴露4小时后（监控工作期间后四小时），再将培养皿盖上盖倒置收集，经9#传递窗（209-105）传至质检室，置于电热恒温培养箱内32.52.5倒置培养48小时。5.10 培养基使用完毕后处理程序。5.11 采样过程填写沉降菌采样记录；菌落计数过程填写培养皿查看记录。6. 重点操作复核制6.1 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染，每批选定3支培养皿作对照培养。6.2 取样检测过程中应防止样本的人为污染，采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染应剔除。6.3 一般布局在距离地面0.8m-1.5m之间或操作平台的高度，应离开尘粒较集中的回风口1.2m处。6.4 培养基灭菌后在30-35的环境中暂存。6.5菌落计数：用肉眼观察每个培养皿中的菌落数。然后用510倍放大镜检查，是否有遗漏；若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。对培养皿中的菌落要仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。6.6 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。6.7 车间目前发现的菌经质检处鉴别为葡萄球菌和链球菌，若发现新菌群，车间应立即停产并及时送质检处进行鉴别，并进行消毒剂效力验证，确定消毒剂对此菌的消毒效果，如使用的消毒剂效力验证合格车间继续生产，若验证不合格车间进行厂房清洁和消毒后进行生产。6.8 每批培养基必须在配制后72h内使用完毕。6.9 动态检测时，应记录生产开始的时间、检测时间及该区域测试人员数。6.10 在检测之前及检测完成后，必须保持培养皿处于倒置状态。6.11 对于非每天、每班次和连续检测的点，需要在停产后再生产时、停产前最后一天进行沉降菌检测。6.12 当菌落检测结果超过警戒限时，岗位人员应及时告知QA、车间负责人并填写异常情况处理记录，QA、车间负责人对其进行原因调查分析。当菌落检测结果超过纠偏限时，应做偏差分析并报废产品。7. 中间产品质量标准和控制规定_8. 安全防火及劳动保护8.1 操作人员上岗操作必须按更衣程序要求穿戴好工作服、鞋、帽并注意防滑。8.2 岗位严禁烟火。8.3 所有电源插座，严禁接触潮湿物品，清场时，要切断机器的总电源以防触电。9. 异常情况的处理和报告出现异常情况时，应按照以下方法立即处理：表6编号异常情况可能发生异常的原因异常情况对策1进入岗位人员更衣错误1、人员培训不到位，不熟悉操作流程 2、人员质量意识淡薄，未按要求进行更衣。1、加强人员培训，熟悉更衣流程，提高人员的质量意识。10. 设备维护及使用 _11. 技术经济指标的计算 _12. 度量衡的使用与校正 _13. 相关记录 _14. 附录14.1 图纸14.1.1 附录A：洗衣工序沉降菌检测记录 每周14.1.1 附录B:洁净区沉降菌检测图14.1.2 附录C:洁净区沉降菌检测图 (验证专用)14.2相关状态标识 _14.3规程变更历史版次文件编号生效日期变更原因01QB/RY.4.02.20610242013年11月23日首次发布02QB/RY.4.02.20610242014年07月01日通过对洁净区微生物历史监测数据进行趋势分析及风险评估，将监测频率进行修订；03QB/RY.4.02.20610242015年01月01日公司管理标准升级；SOP附录记录中增加QA签名栏；04QB/RY.4.02.2061024因公司管理文件升级,添加,将文件修订如下:1、撤销需要添加至主批记录和主批包装记录中的记录，同时修订相关记录；2、将文件由03版升级为04版文件编号QB/RY.4.02.2061024页码21/20版本04洁净区沉降菌检测标准操作规程附录A 洗衣工序沉降菌检测记录 记录编号：JL206-075产品名称 产品规格 产品批号上次采样日期 年 月 日 生产日期 年 月 日开始生产时间时 分 采样日期 年 月 日 培养基批号检测人采样过程： 时 分，取制备好的沉降菌培养皿 个，经1#传递窗（设备编号：206-097）传入洗衣岗位，依次将沉降菌培养皿使用记号笔在培养皿底部做好标记。 时 分，对脱衣间、发衣间、洗衣间的区域进行检测。 时 分，待检查完毕后，依次将培养皿盖盖好，将所有培养皿传出培养。培养过程： 月 日 时 分，将采样后的培养皿倒置放入恒温培养箱（206-058 206-059 206-060 206-061）中32.52.5培养48小时。每批取3个培养皿作空白对照培养，检查培养基本身是否受污染。 月 日 时 分，取出恒温培养箱内的培养皿，检查每个培养皿中的菌落数，并记录。菌落数 平皿区域编号结果/警戒线（cfu/皿）结 论编号结果/警戒线（cfu/皿）结 论菌落形态鉴别脱衣间（05）1/5合格 不合格发衣间（08）1/5合格 不合格洗衣间（15）1/5合格 不合格2/5合格 不合格评定标准C级洁净区平均数50cfu/4小时检查结论合格 不合格检查人QA备注： 1.如有异常情况，及时在异常情况处理记录中记录。附录B 洁净区沉降菌采样点分布图附录C 洁净区沉降菌采样点分布图(验证专用)