第二十一章基因诊断与基因治疗-第二十一章

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,PPT,文档演模板,Office,PPT,29 十一月 2024,第二十一章基因诊断与基因治疗-第二十一章,本章内容,概述,基因与疾病,第一节 基因诊断(,gene diagnosis,),第二节 基因治疗(,gene therapy,),教学要求,掌握,基因诊断,概念和特点；熟悉,基因诊断,的常用技术方法；了解基因诊断的应用。,掌握,基因治疗,的概念；了解,基因治疗的基本程序和基因治疗的应用,。,基因变异致病类型,内源基因的变异,基因结构突变,基因表达异常,外源基因的入侵,第 一 节 基 因 诊 断,Genetic Diagnosis,特点,针对性强,特异性强,灵敏度高,适应性强,一、基因诊断的概念和特点,定义,利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。,二、基因诊断常用技术方法,限制性内切酶谱分析法,DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RLFP)分析,等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide,ASO),（一）核酸分子杂交技术,Mst,酶切位点,(GCTNAGG),5,3,正常基因,5,3,突变基因,1.15kb,1.35kb,镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析,+,0.2kb,1.15kb,1.35kb,正常人,突变携带着,患者,镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析,放射自显影照片,RLFP,分析法,甲型血友病的基因诊断（连锁分析1）,5,3,引物1,引物,2,99 bp,43 bp,Bcl,I,因子VIII 基因142 bp 片段,甲型血友病的基因诊断（连锁分析2）,142 bp,99 bp,43 bp,异常带,先证者,胎儿,点突变（C to,T,）,5,3,3,5,G,5,3,引物1,引物,2,探针1,探针2,A,等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）,（二）聚合酶链反应（PCR）,PCR/单链构象多态性分析,(single strand conformation polymorphism,SSCP),PCR产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确定致病基因的存在。,正常人,纯合突变,杂合突变,Leber 病患者 PCR/SSCP分析,+,DNA链末端合成终止法,（三）基因测序,DNA自动测序,采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。,DNA自动测序结果举例,（四）基因芯片技术,基因点突变分析,三、基因诊断的应用,遗传疾病,肿瘤,感染性疾病，传染性流行病,判断个体疾病易感性,器官移植组织配型,法医学中个体识别、亲子鉴定,第 二 节 基 因 治 疗,Gene Therapy,定义,早期,是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。,目前,广义上来讲是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法。,一、基因治疗的概念,基因治疗的基本方法,基因矫正(,gene correction,),基因置换(,gene replacement,),基因增补(,gene augmentation,),基因失活(,gene inactivation,),几种常见的基因失活技术,反义核酸技术,核酶技术,三链技术,干扰RNA技术,基因治疗的其他方法：,如“自杀基因”的应用，基因疫苗等,二、基因治疗的基本程序,间接体内疗法（,ex vivo,）,治疗性基因的选择,基因载体的选择,靶细胞的选择,基因转移,外源基因表达的筛选,利用在体中的标记基因,回输体内,病毒载体,非病毒载体,体细胞,生殖细胞,间接体内疗法,直接体内疗法,基因治疗应用的,条件,单基因缺陷的疾病,仅限于体细胞的基因治疗,靶细胞可从病人机体获取、培养，并进行遗传操作后回输病人体内,治疗效果大过对病人的危害,表达水平无需严格控制即可改善疾病，并且无副作用,人体的基因治疗计划必须经过证明符合严格的安全标准,