感染的诊断与防治课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细 菌 学 诊 断,标本的采集和送检六原则,细菌形态与结构检查方法,细菌分离培养与鉴定,病原菌抗原的检测,分子生物学技术,实验室质量控制,病原微生物感染的防治,一、,标本的采集和送检六原则,避免杂菌污染,不同期不同标本,用抗生素以前,采集病变明显部位,运送注意保存,标本必须新鲜,病原菌的检查程序,药物敏感试验,标本,直接涂片镜检,分离培养,生化试验,血清学试验,动物试验,明确诊断,初步诊断,分子生物学技术,其他检测技术,显微镜放大法,细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须借助显微镜（普通光学显微镜、电子显微镜）放大后才能观察。,二,、,细菌形态与结构检查方法,普通光学显微镜的分辨率为,0.25um,。,一般细菌都大于,0.25um,，,故可用普通光学显微镜观察。,普通光学显微镜,(light microscope),显微镜放大法,电子显微镜的分辨率为,1nm,。,不仅能看清细菌的外形，内部超微结构可一览无余。,电子显微镜,(electron microscope),肺炎链球菌荚膜,荚膜,显微镜放大法,标本处理：,1.,不染色,:,可观察细菌的生长和运动，常用悬滴法和压滴法,2.,染色法：可观察细菌形态、排列，也可通过染色反应性鉴别细菌,.,一般程序：,标本涂片 固定 染色 镜检（观察镜下特征：菌体形态、排列、染色性及特殊结构等）初步鉴定,注：对形态、结构、排列方式和染色性无特征的细菌，直接涂片染色镜检无意义,革兰染色法：,结晶紫 碘液,95%,乙醇 复红,抗酸染色：,石炭酸复红,3%,盐酸酒精 美兰,原理,:,见书,染色法,1min,1min,1min,脱色,5min,脱色,革兰阳性,革兰阴性,抗酸染色,革兰染色法：革兰阳性菌（紫色）,革兰阴性菌（红色）,抗酸染色法：抗酸阳性菌（红色）,抗酸阴性菌（蓝色）,特殊染色法：细菌荚膜、芽孢、鞭毛、,细胞壁、核质等染色,三 细菌分离培养与鉴定,培养基,(I),固体培养基,普通琼脂平板,血琼脂平板,选择鉴别琼脂平板：,SS,、,MacC,、,TCBS,等,巧克力琼脂平板,厌氧血琼脂平板,细菌的分离培养,1,、,培养基,(II),半固体培养基,双层培养基,液体培养基：普通肉汤培养基、糖发酵管等,接种,方法,(I),稀释法,(II),划线分离法,菌 落,接种法,(III),细菌培养法,普通培养,二氧化碳培养,微需氧培养,厌氧培养,2,、形态学鉴定,3,、生化试验鉴定,4,、血清学鉴定：利用已知的特异性抗体测定有无相应的细菌抗原，确定菌种或菌型。,玻片凝集反应,5,、药物敏感试验,6,、动物试验,体外抗菌药物敏感试验的目的：,1.,对其,敏感性不能预测的临床分离菌株,必须常规进行药敏试验以供临床选择治疗药物时参考。,2,.,临床因治疗的反应差而考虑,更换抗菌药物,史，应对拟选药物进行药敏试验。,3.,了解所在医院或地区,常见病原菌耐药性的变迁情况,，定期通报临床，有助于临床的经验治疗选药,4.,评价新抗菌药物,的抗菌谱和抗菌活性等药效学特性。,5.,对,细菌耐药谱,进行,分析和分型,有助于某些,菌种的鉴定,，并作为医院流行病学调查的手段之一。,抑菌试验,K-B,纸片琼脂扩散法,:,是目前各国临床微生物实验室广泛采用的标准纸片扩散法。,稀释法,E,实验,四、病原菌抗原的检测,用已知,Ab,检测待测,Ag,：,特点：特异性强、敏感性高，,Ag,的检出与病原菌的死活无关,常用于细菌学诊断的免疫学技术有：血清学诊断,沉淀反应、协同凝集试验、免疫荧光法、对流免疫电泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。,免疫检测技术,(I),基本原理,免疫检测技术,(II),ELISA,免疫检测技术,(III),免疫荧光法,免疫检测技术,(IV),凝集和沉淀,五、分子生物学技术,PCR,检测核酸,核酸杂交技术,基因芯片,六、实验室质量控制,室内质量控制,室间质量控制,质量控制：临床微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系,室内质量控制（一）,人员与组织管理,制定标准操作程序手册,培养基,商品化干粉培养基：按说明书,自制培养基：选原材料,按手册配制,外观、无菌试验、量、,Ph,、用,已知性能标准菌株进行性能试验,室内质量控制（二）,试剂、染料、诊断血清的质量控制,药敏试验的质量控制,培养基（,MH,培养基）,质控标准菌株种类,质控标准菌株来源：卫生部菌种保藏中心、,美国菌种保藏中心（,ATCC,）,质控标准菌株保存：一般保存法,冷冻干燥法,抑菌圈的质控范围,室间质量控制,各级临检中心、参考实验室对各实验室进行检查。,包括：,一般检查项目,熟练程度检察,盲点检察,质控结果分析与评价,七、病原微生物,感染的防治,将疫苗或类毒素接种于人体，使机体获得免疫力的一种防治微生物感染的措施。,人工主动免疫,主要生物制品,死疫苗,活疫苗,类毒素,亚单位疫苗,DNA,重组疫苗,核酸疫苗,治疗性疫苗,抗毒素,细胞免疫制剂,人工被动免疫,注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机体获得特异性免疫力,主要生物制品,抗菌血清,胎盘球蛋白,丙种球蛋白,人工主动免疫与人工被动免疫,区别要点,人工主动免疫,人工被动免疫,免疫物质,抗原,抗体或细胞因子等,免疫出现时间,慢，,24,周,快，立即,免疫维持时间,长，数年,数月,短，,23,周,主要用途,预防,治疗或紧急预防,比较,比较,死疫苗与活疫苗,区别点,死,疫苗,活,疫苗,制剂特点,死，强毒株,活减毒株,接种剂量与特点,量,较大，,23,次,量,较小，,1,次,保存及有效期,易,保存，约,1,年,不易保存，,4,数周,免疫效果,较低，,维持数月,2,年,较高，,维持,35,年甚至更长,