实验七-大肠杆菌检测ppt课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验七,大肠菌群的测定,实验七 大肠菌群的测定,1,一 实验目的,1、掌握大肠杆菌的鉴定和计数方法,2、巩固无菌操作技术,一 实验目的1、掌握大肠杆菌的鉴定和计数方法,2,二 大肠杆菌鉴定原理,大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否染肠道致病菌的可能。,样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大肠菌群最大可能数（MPN)表示。,二 大肠杆菌鉴定原理大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧,3,细 菌 学 检 验 程 序,样品,细菌总数,大肠菌群,水样稀释或不稀释,水样稀释或不稀释,第一步-初步发酵试验,倾注平板培养 （乳糖发酵）,37 24小时 37 24小时,菌落计数 第二步-平板分离培养,（取平均数报告）（转种鉴别培养基）,37 24小时,革兰染色镜检,第三步-乳糖复发酵试验,报告结果,细 菌 学,4,三、实验器材,1、恒温培养箱（361）、高压灭菌锅、天平、灭菌培养皿、试管。,2、培养基及试剂：,乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂平板（EMB）,三、实验器材,5,四、实验步骤大肠菌群的检测,检品,胆盐乳糖发酵管,伊红美兰平板,大肠杆菌菌落纯培养,乳糖复发酵管（-）乳糖复发酵管（,）,四、实验步骤大肠菌群的检测,6,1、检样稀释,以无菌操作将检样1mL放于含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。,用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。,另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液。,根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管，每支试管接种1ml。,1、检样稀释,7,2.乳糖发酵试验,将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用,双料乳糖胆盐发酵管,；1mL及1mL以下者，用,单料乳糖发酵管,。每一个稀释度接种3管，置36,1温箱内，培养24h2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行。,2.乳糖发酵试验,8,3.分离培养,将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36,1温箱内，培养18h24h，然后取出，观察菌落形态并做革兰氏染色和证实试验。,4.证实试验,在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落12个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36,1的温箱内培养24h2h，观察产气情况。,凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠菌群阳性。,5.报告,根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）食品中大肠菌群的MPN,值,。,3.分离培养,9,表1 大肠菌群最可能数（MPN）检索表,阳性管数,MPN,100mL(g）,95%可信限,1mL(g)3,0.1,mL(g),3,0.01,mL(g,)3,下限,上限,0,0,0,0,0,0,0,0,0,1,2,3,30,30,60,90,5,90,0,0,0,0,1,1,1,1,0,1,2,3,30,60,90,120,5,130,0,0,0,0,2,2,2,2,0,1,2,3,60,90,120,160,0,0,0,0,3,3,3,3,0,1,2,3,90,130,160,190,1,1,1,1,0,0,0,0,0,1,2,3,40,70,110,150,5,10,200,210,1,1,1,1,1,1,1,1,0,1,2,3,70,110,150,190,10,30,230,360,1,1,1,1,2,2,2,2,0,1,2,3,110,150,200,240,30,360,1,1,1,1,3,3,3,3,0,1,2,3,160,200,240,290,表1 大肠菌群最可能数（MPN）检索表,10,2,2,2,2,0,0,0,0,0,1,2,3,90,140,200,260,10,30,360,370,2,2,2,2,1,1,1,1,0,1,2,3,150,200,270,340,30,70,440,890,2,2,2,2,2,2,2,2,0,1,2,3,210,280,350,420,40,100,470,1500,2,2,2,2,3,3,3,3,0,1,2,3,290,360,440,530,3,3,3,3,0,0,0,0,0,1,2,3,230,390,640,950,40,70,150,1200,1300,3800,3,3,3,3,1,1,1,1,0,1,2,3,430,750,1200,1600,70,140,300,2100,2300,3800,3,3,3,3,2,2,2,2,0,1,2,3,930,1500,2100,2900,150,300,350,3800,4400,4700,3,3,3,3,3,3,3,3,0,1,2,3,2400,4600,11000,24000,360,710,1500,13000,24000,48000,2009010360 21015030440 220210,11,大肠菌群测定,挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落；,红色、粉红色菌落。,抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。,产酸判断：紫色培养液变成黄色,产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。,大肠菌群测定 挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落；抑制,12,实验七-大肠杆菌检测ppt课件,13,饮用,水、乳、冷饮食品卫生标准的细菌指标,指 标,细菌总数 大肠菌群,饮用,水 100个/ml 3个/L,消毒牛奶 30，000个/ml 40个/100ml,瓶装汽水、果味水,及果汁类饮料,品 种,100个/ml 5个/100ml,饮用水、乳、冷饮食品卫生标准的细,14,五、实验报告,（一）、列表记录并计算实验结果,（二）、思考题,1、怎样判断分离到的微生物是大肠杆菌？,2、接种了微生物的培养皿为什么要倒置培养？,五、实验报告（一）、列表记录并计算实验结果,15,实验准备（2个样品/组）,培养皿,：10套/组,无菌水：,10支（9毫升/支）,乳糖胆盐发酵培养基：,100ml 18支试管、5ml/支,伊红美蓝琼脂培养基（EMB）:,200ml 8-10个平板,实验准备（2个样品/组）培养皿：10套/组,16,下周实验,实验八,化学药剂对微生物生长的影响,下周实验实验八,17,