免疫酶组织化学技术ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,免疫酶组织化学技术,聪明出于勤奋，天才在于积累,免疫酶组织化学技术免疫酶组织化学技术聪明出于勤奋，天才在于积累第三章,免疫酶组织化学技术,免疫酶组织化学技术,酶,辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶.,酶标记已知Ab(或Ag)+组织细胞内相应的Ag(或Ab),抗原抗体复合物(酶标),底物,有色沉淀,定位;,图像分析仪半定量,“和谐教育”课堂模式要求在教学过程中，教师和学生积极互动，共同发展。注重培养学生的独立性和自主性，引导学生质凝、调查、探究。同时教师应尊重学生的人格，关注个体差异，激发学生的学习积极性，使每个学生得到充分的发展。“和谐教育”的课堂模式应抓住以下三个环节。,一、和谐的课堂导入,课堂导入是创设优良教学情境的一个不可忽视的重要方面，课堂教学要体现“引人入胜”的艺术魅力，首先必须从引入教学开始。著名特级教师于漪说：“在课堂教学中要培养、激发学生的兴趣，首先应抓住导入新课的环节，开始就把学生牢牢地吸引住。”所以精心设计导入，为完成整堂教学作好准备是十分重要的。那么如何进入优质的课堂导入呢？,1.通过问题引入,一个好的问题引入要有艺术性、趣味性、启发性，能激发学生的思维兴趣。实践证明：疑问是思维的启动机，它可以让学生的求知欲望从潜伏状态转入活跃状态，有力地调动学生的思维兴趣。例如在教学端午的鸭蛋时，一开始便提问：祖国有哪些传统节日？这些节日都有些什么传统习俗？在学生畅所欲言之后，引入到本文今天大家学习的课文中作者就写了端午时节家乡的一些习俗。,2.以小故事形式引入,一个好的故事里应该有事、有趣、有理，使事、趣、理融为一体，具有艺术的感染力。学生比较喜欢，在引入教学时如应用得当，就能起到很好的效果。,3.创设教学情境引入,指教师在开始教学时采用多媒体等手段，从一开始就吸引学生的注意力，启发学生对课堂学习的积极情感和乐趣，如教学罗布泊，消逝的仙湖时，为了让学生对罗布泊有一个整体上的印象感知，在课件中首先为学生收集了一些罗布泊以前的图片，让学生感受到这一仙湖的美丽，也由此自然而然地引发学生对这一美丽仙湖消逝原因的思考。,二、和谐的教学过程,有了良好的教学引入，怎样保持学生高昂的学习热情，做到课堂教学过程的和谐统一，是决定一堂课成效的关键。,1.激励学生积极参与到教学中来,“和谐教学”是关注全体同学的教学，因此教学中要鼓励各个层次的学生积极参与使每个学生都有所获，德国著名教育家第斯多惠说得好：“我们认为教学的艺术不在于传授本领，而在于激励、唤醒、鼓舞。”课堂上教师激励学生参与，是创设教学高潮的重要手段，例如在课堂上多为下层次的学生创设回答问题的机会，在学生回答正确的情况下及时评点表扬，并多鼓励他们参与课堂活动。教学高潮的“胜”境，与主导者的激励、点拔、启导是分不开的，一个启发有方、善于激活学生思维的教师，总是能够抓住时机，创设出教学的高潮。,2.师生互动，情感交流,“和谐教育”的课堂，就像一列快乐的列车，驾驶员是教师，学生就是乘客。有一位作家说过：“感人的歌声留给人的记忆是长远的。”同样，教师在教学中感人的语言、感人的动作，留给学生的记忆将是长久的，甚至终身难忘，所以教师在和谐课堂上尽量多与学生进行情感交流，哪怕是一个小小的提示，一个小小的动作，都会拔动学生的心弦。,三、和谐的课堂结尾,一个引人入胜的新课导入，对于激发学生学习兴趣、提高求知欲有着十分重要的作用。而一个耐人寻味的结尾，对于帮助学生理清知识脉络、掌握知识重点更有意义。“和谐教育”的课堂结尾一定是耐人寻味，感人至深的。留下悬念，让人遐想，从而展现出教师高超精湛、挥洒自如的教学艺术和风格。,四、延伸式结课法,有些课文讲完后，把课尾作为课堂内外的纽带，引导学生向课外延伸，开辟第二课堂，引导学生去思考，加深对所学知识的理解和联系，理论联系实际，从生活中获取感受，这样课内指导课外，联系生活实际，既有利于培养学生分析问题、解决问题的能力，也有利于开阔学生的视野，激发浓厚的学习兴趣。,每一位教师都应从教学的实际需要出发，重视并进行课堂教学结课艺术的学习与研究，不断总结创造与运用课堂结课方式，创建“和谐教育”的课堂结构模式。,对农村初中学生而言，文言文学习是一大难点，老师和学生在平时教与学中都花了很多功夫，但初中生的文言文学习现状依然不尽如人意。学生背诵文言文困难，或者能背诵课文却不理解其意思；用现代汉语翻译文言句子，难以字字落实、准确到位；导致初三总复习时对文言文手忙脚乱。学生能大致知道一些常见实词虚词的义项，在课外文言文阅读的具体语境中却不知做何解释；能大致理解文言文内容却难以准确把握作者要表达的主旨，有些甚至连基本意思都看不懂。这样就导致学生在考试时无法下笔，失分严重。,初中生的文言文学习低效有主客观两方面的原因：客观方面是文言文与学生所处年代相隔较远，学生对古代文化、人物等不了解也不感兴趣；古代汉语与现代汉语相差较大。主观方面是农村初中生语言基础薄弱，积累量少，处于被动接受的状态。教师的文言文教学模式不理想，这些都在一定程度上造成了农村初中生文言文学习的低效。,培养农村初中生文言文自主学习的指导策略应包括以下几个方面。,（一）激发学生自主阅读兴趣,瑞士心理学家皮亚杰曾说：“所有智力方面的工作都要依赖于兴趣。”学生学习文言文也是如此，只有从内心对文言文学习产生了兴趣，才会以积极认真的态度去自主学习，才会想法设法努力解决学习中的疑难，取得良好的学习效果。,教师要加强自身的文学修养，经常组织学生开展文言诗文故事演讲、古诗文朗诵、文言文改写习作展示等活动。让学生感受到求知的乐趣，也能有机会展示自己的所得，得到同学、老师的赞许，得到成功的满足感。,（二）提高学生自主学习的意识,现在许多文言课堂老师讲解过多，留给学生思考的空间很少，且过高地估计了初中学生的接受能力。这样一来，学生的自主学习意识就会淡化。而且教师课堂上越“包办”，学生进步的可能性越小。我们要切实把学生作为学习的主体，真正将课堂还给学生，当学生理解有偏颇时，或“找”得不全面时，老师再适当引导一下。这样会更有效地推动学生的文言文学习。,（三）创设自主学习的环境,笔者在教学中曾在两个班尝试过不同的教学模式，一种是以带领学生逐字逐句翻译、讲解为主，一种则主要让学生自主翻译、解读，找出疑问后，先小组探讨解决，小组探讨后解决不了的，老师才带领全班一起探讨。显然后一种教学模式课堂气氛更活跃，学生学习积极性更高，尤其是对一些较长的文言课文还能缩短教学时间。而从学后的检测效果来看，后一种教学模式的效果要明显好过前一种，因为学生是主动自主学习质疑释疑的，印象深刻，也能为后续文言文学习打下良好基础。,（四）教给学生自主学习的方法,一是反复诵读培养语感。古人说“读书百遍，其义自见”，就是针对文言文的。所以应重视指导学生一些文言文朗读技巧，让学生能在反复诵读中读准字音、读清停顿、读通思路、读出情感。学生在反复的朗读中，渐渐培养起文言语感，而且熟读后能加深对内容的理解和把握。,二是利用工具书进行自学。笔者让每个学生准备一本古汉语常用字字典，先教会他们使用，以后他们遇到不认识不理解的字词不再等着老师来解说，能自行查阅工具书，而自主寻求答案的快感又推动了他们文言文学习的积极性。,三是梳理归纳文言知识。文言文学习中文章是一篇一篇地教，知识点是一个一个地积累，但学生脑子里的文言知识还是零散的，一些基础薄弱的农村初中生脑子里更是如一团乱麻。笔者在教学中，运用计算机培训中学习的画思维导图的方法，将文言文课文中纷乱的知识点清晰地梳理归纳，成倍地提高了学习效率，还增进了学生的理解和记忆能力。,四是鼓励学生进行多形式的文言创作和互相评测。笔者在教学中喜欢让学生选择一些简短的文言文进行扩写、续写或改写，并要求学生写好后互评互改，然后挑一些全班展示。从他们的习作中看，可以发现学生的想象力真是丰富，习作展现的似乎是一幕幕电影场景，哪怕是基础很薄弱的一些学生，也扩写得有模有样，可知学生不仅理解了文言语义，文章的主旨也理解透了。这类的学习活动能真正提高学生文言文阅读兴趣和能力，也能提高作文水平，可谓一举两得。,为学中说：“天下事有难易乎，为之，则难者亦易矣；不为，则易者亦难矣。”虽然目前文言文学习现状不尽如人意，但笔者相信通过师生的共同努力，教学相长，农村中学生文言文学习也会迎来它的春天的！,免疫酶组织化学技术聪明出于勤奋，天才在于积累免疫酶组织化学技,1,第三章,免疫酶组织化学技术,第三章,2,免疫酶组织化学技术,酶,辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶.,酶标记已知Ab(或Ag)+组织细胞内相应的Ag(或Ab),抗原抗体复合物(酶标),底物,有色沉淀,定位;,图像分析仪半定量,免疫酶组织化学技术,3,免疫组化方法,酶标抗体免疫组织化学,直接法,间接法,非酶标抗体免疫组织化学,酶桥法,PAP法、APAAP法,免疫组化方法,4,酶标抗体免疫组织化学染色法,(一)原理直接法和间接法,直接法,是将酶标记在第一抗体上,直接检测细胞内特异性抗原。,间接法一两步法,抗:是细胞组织内抗原的特异性抗体;,二抗:是抗一抗的抗体,并且已用酶标记,(注意:第二抗体与第一抗体须是不同种属动物制备的,因,为第二抗体往往是用第一种动物的IgG所制备。),酶标抗体免疫组织化学染色法,5,酶标抗体法-直接法,原理:将酶直接标记在一抗上,过氧化粉,然后直接与相应抗原特异地结合。,形成抗原一抗体_酶复合物,最后,用底物显色剂显色,第一体,优点:简便、快速、特异性强,非特异性背景反应低,缺点:浪费抗体、敏感性极低,围1兔组化直法,依靠化学连接(共价键)对酶及,抗体活性有影响。,每种抗原必须分别用其抗体的酶,标记物。,酶标抗体法-直接法,6,酶标抗体法-间接法,二抗,原理:将酶标记在二抗上,先将,一抗与相应的抗原结合,形成抗,过化原抗体复合物,再用二抗(酶标抗,体)与复合物中的特异抗体结合,第一抗,形成抗原-抗体-酶标抗体复合物,最后用底物显色剂显色,优点:只需一种酶标抗体即可。,一mE块:教感性低,但优于直接法,围22免疫组化国接法,依靠化学连接对酶及抗体活性有,影响。,酶标抗体法-间接法,7,令免疫酶组织化学方法最终的生成物是带有酶标记,的抗原抗体复合物,再依据酶与底物作用生成不溶,性的有色产物沉积在抗原抗体反应原位,并借此确,定该抗原的性质、存在的部位和含量。,令显色反应:,令酶+底物=不溶性的色素,标记酶:辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷酸酶(ALP),葡萄糖氧化酶(GOD),-D-半乳糖苷酶.,令免疫酶组织化学方法最终的生成物是带有酶标记,8,1辣根过氧化物酶HRP,显色:产物棕褐色,HRP与底物过氧化氢和DAB作用产物棕褐色,有嗜锇性,DAB性质:,电子供体,较敏感,室温时较稳定,显色后切片可长期,保存。可致癌,可将DAB制成10倍浓度储存液,分装后-20,贮存,注意事项:孵育时间和配置方式易产生背景着色,浓缩的DAB按照说明书;注意校正蒸馏水的PH值;,粉剂DAB溶解时滤去不溶性颗粒;,现用现配保存时可产生氧化物沉积在切片上,形成斑点。,临用前加H2O2,1辣根过氧化物酶HRP,9,1辣根过氧化物酶HRP:,3344 49,1辣根过氧化物酶HRP:,10,2碱性磷酸酶ALP,显色:产物蓝色或红色,令以磷酸萘酚ASMX为底物,被ALP水解后生成萘酚,AS-MX,再与孵育液内的坚牢蓝B盐或坚牢红TR盐等,偶联生成不溶性染料(坚牢蓝或坚牢红)而成,令优点:细胞和组织内的内源性碱性磷酸酶很容易被,抑制和破坏,而不会产生内源性酶显色,从而提高,特异性。,令缺点:显色弥散,不如过氧化物酶系统的清晰和明,确,2碱性磷酸酶ALP,11,免疫酶组织化学技术ppt课件,12,免疫酶组织化学技术ppt课件,13,免疫酶组织化学技术ppt课件,14,免