绿脓杆菌终结课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,化装品中铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa的检测,概述,随着人们生活水平提高，化装品成为美化人民生活的必需品。然而化装品的生产流程以及适宜微生物生长的一些生境特征，如含有水分，蛋白质，氨基酸，pH等，均易造成化装品的污染。某些病原微生物的污染可对人体健康造成危害，同时微生物污染会影响化装品的质量，因此对化装品进行微生物检验具有十分重要的意义。,我国?化装品卫生标准?对化装品的微生物学质量规定如下：,1.眼部化装品及口唇等黏膜用化装品以及婴儿、儿童用化装品菌落总量500cfu/ml(g),2.其他化装品菌落总数1000cfu/ml(g),3.每克或者每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌,4.霉菌和酵母菌总数1000cfu/ml(g),铜绿假单胞菌具有十分重要的卫生学意义： 其在自然界分布甚广，空气、水和土壤中均存在，对外界抵抗力较其他细菌强，适宜在潮湿环境中生长，水分含量较多的化装品易受其污染。该菌为条件致病菌，能引起人眼、耳、鼻、喉、皮肤的化脓性感染特别是烧伤、烫伤、眼部疾病患者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症。因此，对化装品中铜绿假单胞菌的检验非常有必要。,铜绿假单胞菌生物学特性,1.形态染色 革兰氏阴性杆菌，有荚膜，单端有1到3根鞭毛,2.培养特征 需氧及兼性厌氧的，在普通培养基上生长良好，菌落大小不一，平均直径2mm3mm，扁平，边缘不整齐，且常呈相互融合状态。在42条件下可以生长，可与类似菌区别。,3.氧化酶阳性，能产生绿脓菌素，此外还能液化明胶，复原硝酸盐产生氮气。,本次实验检测方法采用GB 7918. 487 化装品微生物标准检验方法 绿脓杆菌。2007年1月1日开始执行的?化装品卫生标准?也有介绍。,实验目的,1.掌握化装品中微生物检测的意义。,2.掌握铜绿假单胞菌的鉴定及生化特征。,3.了解化装品中铜绿假单胞菌检测的根本过程及几种培养基的配置方法。,实验原理,铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶复原硝酸盐为亚硝酸盐产生氮气，421条件下能生长。,检测流程,化装品的前处理,接样于营养肉汤增菌，37，12h，140rpm培养,别离培养，挑取培养物接于十六烷基三甲基溴化铵平 板， 37，18-24h,染色镜检,生化试验,配十六烷基三甲基溴化铵培养基选择性培养基，大肠杆菌不能生长，革兰氏阳性菌生长完全受到抑制,配绿脓菌素测定用培养基，明胶培养基，硝酸盐蛋白胨水培养基，普通琼脂培养基,特征性检验,氧化酶 绿脓菌素 硝酸盐复原 明胶液化 42 生长,试验 试验 产气试验 试验 试验,取菌+ 1滴 接菌，37 接菌 接菌 接菌,二甲基对 24h +氯仿 37 24h 37 24h 42 24h,苯二胺 移出+盐酸,紫红色+ 紫红色+ 有气体+ 溶解成液状+ 生长+,不变色- 不变色- 无气体- 未溶解- 不生长-,样品采集,所采集的样品应具有代表性，一般视每批化装品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml。包装量小的样品，取样可以酌减。,样品前处理及本卷须知,1.亲水性样品水包油型 可直接用灭菌生理盐水稀释。取10ml或10g样品加到90ml生理盐水中，制成1:10的稀释液。,2.疏水性样品油包水型 先在样品中参加液体石蜡混匀，再加吐温80使之均质化，最后加灭菌生理盐水稀释。制成1:10的稀释液。,3.要中和化装品中防腐剂的抑菌作用，培养基要提供高营养的成分。,第一局部实验：别离培养,从增菌培养液中挑取培养物，划线接种于十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置37培养1824h，进行别离培养。,第二局部实验染色镜检及五项指标试验,一、革兰氏染色实验,选择可疑菌落，革兰染色，在油镜下观察细菌的形态以及菌体的颜色。,铜绿假单胞菌镜下形态图示：,假设镜检为革兰染色阴性杆菌者那么进行氧化酶实验,二、氧化酶试验,原理：有氧呼吸过程中，氧化酶oxidase在电子传送系统扮演重要角色，其可藉氧分子将已复原的细胞色素reducedcytochrome氧化，产生水或过氧化氢。好氧菌与部份兼性厌氧菌及微好氧菌均具氧化酶的作用，本实验有助于区分奈瑟氏菌属Neisseria、假单胞杆菌属Pseudomonas与肠道杆菌科Enterobacteriaceae前两者为氧化酶阳性(oxidasepositive)，而后者为氧化酶阴性oxidasenegative。,方法： 取菌于白色滤纸片+1滴1%二甲基对苯二胺,1530s,变红色+ 不变色-,假设为+那么进一步进行绿脓菌素实验,三、绿脓菌素实验：,方法：23个可疑菌落绿脓菌素培养基37 24h 35mL氯仿振荡 提取液呈蓝色取液体于一新试管+1mL1mol/L盐酸,结果判断： 上层盐酸内变为红色为+，不变色那么为-。,假设为-那么仍需进行以下三个实验排除,四、硝酸盐复原产气实验,方法： 可疑菌落硝酸盐蛋白胨水 37 24h 小倒管内有气体产生为+，否那么-。,五、明胶液化实验,方法： 可疑菌落穿刺接种于明胶培养基 37 24h 取出放冰箱1030min，明胶呈溶解状为+，不溶解那么为-。,六、,42,生长实验,方法：,挑取可疑菌落普通琼脂斜面,42 24h,铜绿假单胞菌生长，而近似的荧光假单胞菌不能生长 。,第三局部实验检验结果报告,结果判断,氧化酶+绿脓菌素+ 可报告检出,典型或,可疑菌落,革兰氏,阴性杆菌 氧化酶+绿脓菌素-,明胶液化+ 可报告检出,硝酸产气+,42 生长+,