化学发光法检测传染病课件

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,化学发光法检测传染病,更灵敏、更特异、更准确,化学发光法检测传染病 更灵敏、更特异、更准确,放免,酶联免疫,化学发光,荧光免疫,60,年代,70,年代,80,年代,90,年代,免疫标记技术发展,国产,进口,酶促化学发光,直接化学发光,放免酶联免疫化学发光荧光免疫60年代70年代80年代90年代,化学发光技术的优势与应用前景,.,敏感,度高，(10,-21,mol/L),超过酶免，荧光免疫等方法,.,精密,度，,准确,度超过放免，酶免，荧光免疫等方法,.,试剂,稳定,，,无放射性,，,污染,或,生物毒性,；,.,测定耗时短，方便,快速,提供结果报告；,.,测定,项目齐全,；,已发展成,全自动,的测定系统。,化学发光技术的优势与应用前景.敏感度高，(1,包被微粒子,包被磁珠,包被微孔,包被试管,包被技术的发展,-,磁微粒子,包被微粒子包被磁珠包被微孔包被试管包被技术的发展-磁微粒,包被磁微粒 标记异鲁米诺,Eg:,双抗夹心法分析模式,磁微粒子上包被的抗体与待检测抗原及异鲁米诺标记抗体结合,提升检测功能灵敏度,增加检测线性范围,比吖啶酯更稳定,延长试剂效期,包被磁微粒 标记异鲁米诺Eg:双抗夹心法分析模式,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,*,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,微粒包被,液相反应,*YYYYYYYYYYYYYYYYYYYY,磁微粒、直接化学发光反应,反应充分,速度更快,酶标板，板式,磁微粒，纳米级，均相,磁微粒、直接化学发光反应酶标板，板式磁微粒，纳米级，均相,CLIA,板式载量,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,磁微粒子,直接化学法,Ag/Ab,酶标板,发光板,Ag/Ab,微粒子化学发光法抗体载量优势,CLIA板式载量YYYYYYYYY磁微粒子酶标板微粒子化学发,分配样品,磁颗粒,和试剂,孵育,使反应物,结合,在磁场中,清洗去除,未结合物质,加入,激发液,产生,信号,信号,检测,微粒子化学发光原理,分配样品,孵育加入信号微粒子化学发光原理,磁性微粒子及其分离技术,磁性微粒子技术的优点：,快速分离结合相与游离相,提高与,Ag,或,Ab,包被亲和力,提高接触表面积/反应容量比例，实现微量分析,不需要抗体分离步骤，杜绝干扰与交叉反应,允许共价耦合反应，因此可以检测大/小分子的各种物质成分,能应用各种分析设计与反应模式，扩大应用范围,如：夹心法，竟争法，抗体检测法等,利于检测自动化与微量分析,磁性微粒子及其分离技术磁性微粒子技术的优点：,磁微粒子直接化学发光是,最新一代免疫检测新技术,具有,液相、快速、灵敏、准确,的特点,通过多中心的临床评估，基本上验证了,LICA,在乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、肿瘤标志物、甲状腺功能等项目的临床可用性,多家临床试验显示产品的质量不亚于进口的雅培、罗氏和西门子等厂家的产品媲美。,磁微粒子直接化学发光是最新一代免疫检测新技术,AutolumiS2000,微粒子化学发光仪,AutolumiS2000微粒子化学发光仪,化学发光法检测传染病课件,全自动化学发光免疫分析系统开发及其产业化，在,2011,年,12,月通过国家科学技术委员会的鉴定，鉴定委员会认为：,该项目具有创新性和自主知识产权，整体达到国际先进水平。,全自动化学发光免疫分析系统开发及其产业化，在2,1）,磁性微粒子技术：,便于分离，反应均匀，提高灵敏度,2）,泉涌内外壁清洗技术：,最小的交叉污染率,3）,试剂盒盖设计：,减少人工操作误差和交叉污染，避免试剂挥发影响结果准确性,4）,试剂冷藏系统：,保证在仪器操作的过程中试剂能够一直保持稳定,5）,磁性分离技术：,保证了清洗效率，对于灵敏度要求极高的标记免疫分析是十分关键的,专利，独有技术,1）磁性微粒子技术：专利，独有技术,AutolumiS2000,免疫项目,甲状腺功能,甲状腺素,三碘甲状腺原氨酸,游离甲状腺素,游离三碘甲状腺原氨酸,促甲状腺素,性腺激素,人绒毛膜促性腺激素,催乳素,雌二醇,卵泡刺激素,黄体生成素,孕酮,睾酮,肿瘤标志物,甲胎蛋白,癌胚抗原,前列腺特异性抗原,游离前列腺特异性抗原,糖类抗原125,糖类抗原15-3,糖类抗原19-9,2微球蛋白,铁蛋白,神经元特异性烯醇化酶,人钙结合蛋白,肿瘤相关抗原72-4,鳞状上皮癌相关抗原,细胞角蛋白CYFRA 21-1,心血管及心肌标志物,N末端脑钠肽,肌钙蛋白,肌酸激酶同工酶,C反应蛋白,心肌脂肪酸结合蛋白,脂蛋白相关磷脂酶A2,髓过氧化物酶,肌红蛋白,肝纤维化四项,透明质酸,型前胶原N端肽,型胶原蛋白,层粘连带白,传染病,乙型肝炎病毒前S1抗原,乙型肝炎病毒e抗体,乙型肝炎病毒e抗原,乙型肝炎病毒核心抗体,乙型肝炎病毒表面抗体,乙型肝炎病毒表面抗原,丙型肝炎抗体（HCV）,梅毒抗体（TP）,人类免疫缺陷病毒抗体,糖代谢类,胰岛素,C,-肽,AutolumiS2000 免疫项目甲状腺功能肿瘤标志物心血,全自动、管式、直接化学发光法,-,特异性强、性能稳定,超长时间无人值守,（,1,）试剂区,15,个试剂位，,（,2,）样本区,12,12=144,个样本位,（,3,）码垛区一次性装载,720,个反应杯,测试中可随时添加，随时替换,AutolumiS2000,微粒子化学发光仪,全自动、管式、直接化学发光法AutolumiS2000微粒子,AutolumiS2000,微粒子化学发光仪,真正的,急诊功能,，急诊样本，随到随测。,测试速度高达,220,测试,/,小时,原试管上样,，无需倒管。,全封闭反应舱,，有效减少外界环境干扰和污染,全中文软件，图标式界面，,操作更简便,综合,测试成本低,AutolumiS2000微粒子化学发光仪真正的急诊功能，急,管式、微粒子包被技术，反应速度更快，结果更准确。,ELISA,法检测乙肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照,2010,年,药典,规定反应时间至少要,2,小时,30,分钟；而全自动微粒子化学发光试剂则不到,30,分钟即可完成。,稳定性更好,特异性更好,AutolumiS2000,微粒子化学发光仪,大部分国际一流厂家也都采用直接发光法：,罗 氏,西门子,雅 培,.,管式、微粒子包被技术，反应速度更快，结果更准确。Autol,传染病试剂传统酶免法和微粒子化学发光法对比,方法学,项目,传统酶免法,微粒子发光法,分析敏感度,特异性,精密度,分析敏感度,特异性,精密度,HBsAg,adr 0.1IU/mL,adw 0.1IU/mL,ay,0.2IU/mL,(-/-)20/20,(+/+)3/3,13.21%,adr 0.1IU/mL,adw 0.1IU/mL,ay,0.2IU/mL,(-/-)20/20,(+/+)3/3,8.03%,HBsAb,10 mIU/mL,(-/-)20/20,12.05%,10 mIU/mL,(-/-)20/20,7.45%,HBeAg,1,#,1:64,2,#,1:128,3,#,1:32,(-/-)15/15,(+/+)9/10,12.04%,1,#,1:64,2,#,1:128,3,#,1:32,(-/-)15/15,(+/+)10/10,8.03%,HBeAb,1,#,1:32,2,#,1:64,3,#,1:64,(-/-)15/15,(+/+)9/10,12.31%,1,#,1:32,2,#,1:64,3,#,1:64,(-/-)15/15,(+/+)10/10,8.20%,HBcAb,1,#,1:128,2,#,1:128,3,#,1:256,(-/-)15/15,(+/+)14/15,14.03%,1,#,1:128,2,#,1:128,3,#,1:256,(-/-)15/15,(+/+)15/15,10.34%,HCV,L1,、,L2,阳性，,L3,阴性，,L4,阴性,(-/-)29/30,(+/+)29/30,10.05%,L1,、,L2,阳性,L3,阳性，,L4,阴性,(-/-)30/30,(+/+)30/30,7%,HIV,S1,S2,阴性,S3,S4,S5,S6,阳性,(-/-)18/20,(+/+)20/20,14.34%,S1,阴性,S2,S3,S4,S5,S6,阳性,(-/-)20/20,(+/+)20/20,10%,TP,L1,、,L2,阳性，,L3,阴性，,L4,阴性,(-/-)20/20,(+/+)10/10,11.26%,L1,、,L2,阳性,L3,阳性，,L4,阴性,(-/-)20/20,(+/+)10/10,7.98%,传染病试剂传统酶免法和微粒子化学发光法对比方法学传统酶免法微,参比试剂：雅培,I2000,乙肝,灵敏度,特异性,符合率,HBsAg,97.92%,100%,99.78%,Anti-HBs,95.98%,97.38%,96.69%,HBeAg,95.24%,100%,99.59%,Anti-HBe,90.77%,97.21%,95.36%,Anti-HBc,91.54%,98.9%,94.48%,试剂性能多中心临床评估（乙肝）,参比试剂：雅培I2000乙肝灵敏度特异性符合率HBsAg9,免疫测定试剂的关键点,作为免疫反应，抗原抗体的选择是整个免疫分析特异性和总体表现的关键,如何选择好一个抗体(单克隆或多克隆)去检测一个被检物质，而不与非常相似结构的其它代谢产物有交叉反应,或着是一些没有临床意义的分解产物等，这是分析设计的重点中之重点。,批内、批间的分析重现性,。,免疫测定试剂的关键点作为免疫反应，抗原抗体的选择是整个免疫分,AFP,HBsAg,4.50%,1.79%,4.91%,2.14%,HCV,1,2,3,4,5,Mean,SD,CV,批内,86.11,86.36,88.40,87.90,86.43,86.27,1.55,1.79%,批间,74.59,73.63,69.64,71.90,71.96,71.01,3.20,4.50%,HBsAg,1,2,3,4,5,Mean,SD,CV,批内,72.59,71.25,76.50,75.05,78.03,76.61,1.64,2.14%,批间,0.22,0.22,0.23,0.22,0.23,0.23,0.01,4.91%,批内,批间,微粒子化学发光试剂的精密度,AFPHBsAg4.50%1.79%4.91%2.14%HC,相关性,相关系数,线性系数,HIV,显著相关,0.99,0.98,HCV,显著相关,0.93,0.99,参比试剂：雅培,试剂性能多中心临床评估,相关性相关系数线性系数HIV显著相关0.990.98HCV显,相关性,相关系数,线性系数,HIV,显著相关,0.97,0.92,HBsAg,显著相关,0.96,0.95,N=500,，,参比试剂：雅培,I2000,试剂性能多中心临床评估,相关性相关系数线性系数HIV显著相关0.970.92HBsA,丙型肝炎抗体诊断试剂,丙肝病毒复杂的基因结构：,决定了抗体谱的差异，从而为丙肝抗体检测敏感度的提高带来了困难。,丙型肝炎抗体诊断试剂丙肝病毒复杂的基因结构：,丙肝诊断试剂目前存在的问题,1、灰区标本的困惑,2、阳性标本的漏检,丙肝诊断试剂目前存在的问题1、灰区标本的困惑,问题形成的技术原因,-,灰区的形成,1,、重组抗原的原因,（,1,）融合蛋白,（,2,）大肠杆菌杂蛋白,2,、第二抗体的非特异反应,（,1,）酶标抗体对固相载体的直接吸附,酶标二抗对于丙肝抗体是非特异的，和各种人,IgG,均能反应结合。,（,2,）个别标本中,IgG,浓度过高,多聚体的混合：,E-E,、,E-Ab,、,E-Ab-E,、,E-Ab-E-Ab,，既引起本底背景，又阻遏抗原抗体反应,问题形成的技术原因-灰区的形成1、重组抗原的原因,问题形成的技术原因,-