阪琦肠杆菌与婴儿乳粉安全课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,11/24/2024,阪琦肠杆菌与婴儿乳,粉安全,9/3/2023阪琦肠杆菌与婴儿乳,1,主 要 内 容,D,B,C,A,相关安全事件,生物学特性,检测方法,控制措施,阪琦杆菌,主 要 内 容DBCA相关安全事件生物学特性检测方法控制措施,2,阪琦杆菌安全事件,1961年,Franklin等,首次,报道了2例由阪崎肠杆菌引起的,脑膜炎,病例,。,1988年,相关研究人员从35个国家收集了141种婴儿配方粉，分离到20株阪崎肠杆菌，阳性率为14.2%,。,2001年,福建省一消费者投诉,买,的一箱进口利乐包纯牛奶中有一罐已明显膨胀，,经检验,证实是由阪崎肠杆菌在牛奶中生长所致,。,阪琦杆菌安全事件1961年 Franklin等首次报,3,2.2.2,单因素实验,美国惠氏（中国）有限公司生产的爱儿乐妈妈、爱儿素婴儿豆基配方粉因阪崎肠杆菌超标被限令召回。,2002 年,阪琦杆菌安全事件,2003 年,美国一家国际乳业巨头公司主动召回一批检出极微量阪崎肠杆菌的罐装早产儿特殊配方奶粉。,2004 年,美国美赞臣奶粉因阪崎肠杆菌超标被判为,不合格产品进行销毁，并对消费者进行赔偿。,2.2.2 单因素实验 美国惠氏（中国）有限公司,4,阪琦杆菌生物学特性,阪崎肠杆菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰阴性无芽孢杆菌。一直被称为黄色阴沟肠杆菌，直到 1980 年才更名为阪崎肠杆菌。该菌是肠道正常菌丛中的一种，在一定条件下可引起人和动物致病，所以称为“,条件致病菌,”。,与其他食源性致病微生物相比，阪崎肠杆菌并不能,感染大多数人群，发病率也不高，但对于特殊人群却,有着较高的,致死率,，并且该菌的生存环境及,致病机制,并,不是十分清楚。因此对于该菌的预防和检测尤为重要,。,阪琦杆菌生物学特性 阪崎肠杆菌是人和动物肠道内寄生的一,5,阪琦杆菌生物学特性,阪崎肠杆菌缺少,磷酰胺酶,，多数A-葡萄糖苷酶活性为阳性。可作为快速区分阪崎肠杆菌和其它肠杆菌的可靠方法。,生,化,反应,增值能力,生物毒性,阪崎肠杆菌是一种少见的新生儿脑膜炎的病原,菌，某些,阪崎肠杆菌可能产生一种毒力因子,类肠毒素样化合物,，,一些菌株可产生细胞毒效应,。,喜冷怕热,，用 60的温度 3 分钟即可杀灭，建议 70的开水冲调婴儿配方奶粉,，,但能耐受一定程度的渗透压和干燥。,对阪崎肠杆菌进行危险性评估发现,与本底相比,25,放置6 h该菌的相对危险性可增加30倍;25,放置10 h可增加,30000,倍,。,抵抗,能力,阪琦杆菌生物学特性阪崎肠杆菌缺少磷酰胺酶，多数A-葡萄糖苷酶,6,阪琦肠杆菌的检测,传统分离检测,分子,检测,阪琦肠,杆菌检测,依赖于生化和形态学特点,，,操作繁琐、耗时长、不易分辨,结果等缺点,。,具有方法,灵敏、特异性高，检测时间短,等优点,。,阪琦肠杆菌的检测传统分离检测分子 阪琦肠 依赖于生化,7,LAMP,环介导恒,温,扩增,LAMP,环介导恒,温扩增,阪琦杆菌的分子检测方法,荧光,定量PCR,探针法,普通PCR,分子检测,LAMPLAMP阪琦杆菌的分子检测方法荧光定量PCR探针法普,8,普通PCR法,1,单重 PCR,1.1 rRNA 基因,在,保守的rRNA,基因中找到特异性的序列，借助PCR 等分子生物学方法进行特异性检测。,1.2 外膜蛋白A基因,过克隆和鉴定阪崎肠杆菌的,外膜蛋白A基,(ompA)针对该基因建立了PCR检测方法,。,1.3-葡萄糖苷酶基因,克隆了阪崎肠杆菌,葡萄糖苷酶基因,簇，建立了针对-葡萄糖苷酶活性基因的特异性PCR 鉴定系统,。,普通PCR法1 单重 PCR1.1 rRNA 基因 在保,9,普通PCR法,2 双重PCR法,多重 PCR 检测就是将,两对或者两对以上的引物,在同一个反应管里进行扩增，达到同时检测多个目的 DNA片段的目的。,相比较单重 PCR 的检测方法，双重PCR 检测单一病原菌灵敏度也有所降低，但具有,更,高的特异性，减少了假阳性,。,多重PCR 的检测应用包括单一病原菌的检测和多种病原菌的同时检测,。,普通PCR法2 双重PCR法 多重 PCR 检测就是将两,10,荧光定量PCR,定量PCR不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规 PCR 相比，它具有,特异性更强、自动化程度高,等优点，已在食源性病原菌的检测中广泛应用,。,许,多研究者针对阪崎肠杆菌多个靶基因进行了荧光定量PCR 检测研究,。,荧光定量PCR 定量PCR不仅实现了PCR从定性到定,11,环介导,恒温,扩增（LAMP）,LAMP 法是 2000 年新出现的核酸扩增方法,，,LAMP法针对靶基因的 6 个区域设计 4 种特异的引物，利用一种,链置换 DNA 聚合酶,在恒温条件保温几十分钟，即可完成扩增反应，具有高特异性和等温快速扩增的特点。,用LAMP方法分别扩增阪崎肠杆菌标准株，3 株参考株及13 种近源菌株，结果显示很好的特异性。最低检测限可达到0.3pg基因组DNA，灵敏度是对照的普通 PCR 方法,的,1000,倍。,环介导恒温扩增（LAMP）LAMP 法是 2000,12,探针方法,1 荧光原位杂交(FISH)技术,FISH是将,细胞原位杂交,技术和,荧光技术,有机结合而形成的技术,。,检测结果具有很好的特异性和很高的灵敏性，婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌经过8h 的增菌后，灵敏度为1CFU/10g。,与普通PCR的检测方法对比两者都具有很好的特异性。但相比较PCR方法荧光原位杂交,不需要DNA提取,的步骤，方法更为快捷，而且该方法原则上只能检测到,活的,菌体,探针方法1 荧光原位杂交(FISH)技术 FISH是将,13,探针方法,2 基因芯片,基因芯片又称为 DNA 芯片、DNA 微矩阵，该检测技术具,有高通量、操作简便快速、特异性强，敏感性高,等优点。,利用基因芯片技术，选择 ITS 序列作为目的片断进行扩增，根据 6 株阪崎肠杆菌的 ITS 测序序列及 GenBank 序列信息，设计两对引物和 10 条探针。,选用 23 株阪崎肠杆菌和 65 株其他菌进行特异性检测，没出现假阴性和假阳性。经过选择性富集，检测的灵敏为1.3CFU/100g。,探针方法2 基因芯片 基因芯片又称为 DNA 芯,14,11/24/2024,检测方法总结,建立,高特异性、高灵敏性、高稳定性和低成本,的克罗诺杆菌种属分子检测方法有待于进一步的研究。,基于DNA 的PCR 扩增的检测技术在检测活细胞 DNA,中面临着挑战，该技术在实际应用中受到了一定的限制。,但由于该,菌遗传的,多样性,和分类的,复杂性,，各菌株DNA 序列之间可能存在较大的差异，找到所有菌株共有的,保守序列,并建立合适的分子检测方法是不易的，这也是针对不同靶,基因的同种检测方法检测特异性存在差异的原因。,9/3/2023检测方法总结 建立高特异性、高,15,控制措施,化