中医药干预载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化机制研究ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,相关课题获得的基金资助,国家自然科学基金（30472275）,高等学校博士学科点专项科研基（20060441002）,中国博士后科学基金（20070410622）,相关课题获得的基金资助国家自然科学基金（30472275）,1,重视对动脉粥样硬化泡沫化细胞形成的干预研究,中医药干预载脂蛋白E基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化及其机制研究,本研究成果的临床应用,提 纲,重视对动脉粥样硬化泡沫化细胞形成的干预研究中医药干预载脂蛋白,2,第一部分,重视对动脉粥样硬化泡沫化细胞形成的干预研究,第一部分重视对动脉粥样硬化泡沫化细胞形成的干预研究,3,背 景,动脉粥样硬化（As）,心脑血管疾病共同的病理基础,国内外心脑血管领域探讨的热点和重点,背 景动脉粥样硬化（As）心脑血管疾病共同的病理基础国内外,4,泡沫细胞的生物学特征,泡沫细胞是As斑块内特征性病理细胞,是As的早期标志,在形态学上，细胞浆内脂质成分明显增多，并聚集成滴，镜下可见胞浆呈泡沫样改变；,细胞内总胆固醇增加，且胆固醇酯占总胆固醇的一半以上。,泡沫细胞的生物学特征泡沫细胞是As斑块内特征性病理细胞,5,两种来源的泡沫细胞,As泡沫化细胞,单核巨噬细胞泡沫化,平滑肌细胞泡沫化,As斑块内特征性病理细胞,As的早期标志,主要产生于,As损伤的早期,是,中后期As病变,的主要病理细胞成分,两种来源的泡沫细胞As泡沫化细胞单核巨噬细胞泡沫化平滑肌细胞,6,炎症介质与泡沫细胞形成,内源性炎症介质氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及外源性炎症介质脂多糖（LPS）均能促进、诱导泡沫细胞的形成。,炎症介质与泡沫细胞形成内源性炎症介质氧化低密度脂蛋白（ox-,7,抑制泡沫细胞形成是阻止As发生发展的重要途径,大量泡沫细胞堆积形成脂质条纹乃至脂质斑块；,斑块的进一步破裂、出血及血栓形成会导致各种心脑血管事件的发生。,泡沫细胞形成是As发生发展的关键环节。,抑制泡沫细胞形成是阻止As发生及进一步发展的重要途经。,对泡沫细胞的早期积极干预是防治As及相关心脑血管疾病的重要途径。,抑制泡沫细胞形成是阻止As发生发展的重要途径大量泡沫细胞堆,8,前期研究的回顾,脂欣康干预SD大鼠血管平滑肌细胞泡沫化的研究,前期研究的回顾脂欣康干预SD大鼠血管平滑肌细胞泡沫化的研究,9,脂欣康胶囊,人参,皂苷,银杏叶提取物,三七总皂苷,牛磺酸,茶多酚,功效成分组方,中医药功效：益气活血解毒化浊,脂欣康胶囊人参皂苷银杏叶提取物三七总皂苷牛磺酸茶多酚功效成分,10,平滑肌细胞的培养与鉴定,VSMC的培养,鉴定,VSMC萌出,10x40,纯化VSMC,10x40,- smooth muscle actin,免疫荧光化学染色,显示肌丝,10x40,平滑肌细胞的培养与鉴定VSMC的培养VSMC萌出10x40,11,ox-LDL,诱导细胞泡沫化及鉴定,油红O染色观察,VSMC内脂质,10x40,平滑肌细胞泡沫化,平滑肌细胞,培养,ox-LDL,培养48h,油红O染色后，镜下可见细胞内有大小不等的脂滴，胞浆呈泡沫样改变，,高效液相色谱法检测，胆固醇酯占总胆固醇的60%以上，,表明平滑肌细胞泡沫化成功,ox-LDL诱导细胞泡沫化及鉴定油红O染色观察平滑肌细胞泡沫,12,分组及制备含药血清,20只200g左右雄性SD大鼠随机分为5组,脂欣康组,血脂康组,洛伐他汀组,罗格列酮组,生理盐水组,灌胃5天,取血，制备含药血清,分组及制备含药血清20只200g左右雄性SD大鼠随机分为5组,13,研究分组,A 脂欣康组,B 血脂康组,C 洛伐他汀,D 罗格列酮组,E 生理盐水组,F 空白对照组不加含药血清,分别加入含药血清,含药血清干预时间48小时,研究分组A 脂欣康组分别加入含药血清含药血清干预时间48,14,对泡沫细胞内总胆固醇含量的影响,各组平滑肌源性泡沫细胞内总胆固醇含量比较,高效液相色谱法,检测胆固醇含量,（高效液相色谱法,）,对泡沫细胞内总胆固醇含量的影响各组平滑肌源性泡沫细胞内总胆固,15,对泡沫细胞内胆固醇酯含量的影响,各组平滑肌源性泡沫细胞内胆固醇酯含量比较,高效液相色谱法,检测胆固醇酯含量,（高效液相色谱法,）,对泡沫细胞内胆固醇酯含量的影响各组平滑肌源性泡沫细胞内胆固醇,16,对总胆固醇与胆固醇酯比值的影响,空白对照组,生理盐水组,洛伐他汀组,罗格列酮组,血脂康组,脂欣康组,总胆固醇与胆固醇酯的比值,62.75%,63.46%,47.63%,42.25%,38.04%,37.13%,对总胆固醇与胆固醇酯比值的影响空白对照组生理盐水组洛伐他汀组,17,激光共聚焦显微镜,观察细胞内Ca,2+,浓度,光镜,观察,空白对照组,10x40,生理盐水组,10x40,洛伐他汀组,10x40,脂欣康组,10x40,血脂康组,10x40,罗格列酮组,10x40,激光共聚焦显微镜观察图像,激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+浓度光镜空白对照组生理盐水,18,对细胞内Ca,2+,浓度的影响,各组平滑肌源性泡沫化细胞内Ca,2+,浓度的平均荧光强度值,激光共聚焦显微镜检测,泡沫细胞内Ca,2+,浓度,（激光共聚焦显微镜）,对细胞内Ca2+浓度的影响 各组平滑肌源性泡沫化细胞内Ca2,19,对VSMC源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响,光镜,观察,空白对照组,10x40,生理盐水组,10x40,洛伐他汀组,10x40,脂欣康组,10x40,血脂康组,10x40,罗格列酮组,10x40,原位杂交法,检测B类清道夫受体CD36 mRNA表达,（原位杂交法）,对VSMC源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响光镜空白对,20,对VSMC源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响,各组平滑肌源性泡沫细胞内CD36mRNA表达比较,B类清道夫受体,白细胞分化抗原36配体（CD36）,（原位杂交法）,对VSMC源性泡沫细胞内CD36mRNA表达的影响各组平滑肌,21,小 结,脂欣康具有与洛伐他汀等相似的显著降低总胆固醇及胆固醇酯含量的作用，并且胆固醇酯与总胆固醇的比值均降至50%以下；,脂欣康具有与洛伐他汀相似的抑制平滑肌源性泡沫细胞内CD36 mRNA表达的作用，并且优于洛伐他汀；,脂欣康可显著降低平滑肌源性泡沫细胞内的Ca,2+,浓度，优于洛伐他汀及血脂康。,小 结脂欣康具有与洛伐他汀等相似的显著降低总胆固醇及胆固醇,22,小 结,脂欣康与血脂康均显著抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化，从而抗As斑块形成，并有助于稳定斑块。,其作用机制：,调脂、改善脂质代谢,降低细胞内钙负荷,抑制细胞内CD36 mRNA的表达,小 结脂欣康与血脂康均显著抑制ox-LDL诱导的VSMC泡,23,中医药对As泡沫化细胞干预研究,其它学者研究工作,抗氧化,As泡沫化细胞,调节血脂,抑制炎症介质,减少细胞外基质降解,刺梨汁,大黄醇提液,甲基莲心碱,漏芦,马齿苋,三七总皂苷,扇贝裙边糖胺聚糖,小檗碱,益气活血化痰法等,继续挖掘能够干预As泡沫化细胞的中药并对其作用机制进行深入研究，对于防治As具有重要的意义。,激活过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）,中医药对As泡沫化细胞干预研究其它学者研究工作抗氧化As泡沫,24,第二部分,中医药干预载脂蛋白E基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化及其机制研究,第二部分中医药干预载脂蛋白E基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化及,25,Apo,E基因敲除小鼠AS模型,ApoE基因敲除小鼠于1992年培育成功,自然发生,渐进发展,病理形态典型,病变接近于人类,研究As的较理,想动物模型,ApoE基因敲除小鼠AS模型ApoE基因敲除小鼠于1992年,26,Apo,E基因敲除小鼠AS模型,本科研团队的研究,研究进程,2000年开始，在国内外率先应用ApoE基因敲除小鼠开展心血管病与老年病中西医结合基础研究。,2002年开始，发表系列论文。,2002年，山东生物医学工程（第4期）：载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用；,2003年，中西医结合心脑血管病杂志（第8期）：中西药物对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的干预作用；,2003年，中国动脉硬化杂志（第5期）：血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响,ApoE基因敲除小鼠AS模型本科研团队的研究研究进程2000,27,ApoE基因敲除小鼠,巨噬细胞源性泡沫细胞模型,ApoE在体内胆固醇转运过程中作为脂蛋白配体发挥作用，,当ApoE缺乏时，由其诱导的胆固醇外流受阻，,ApoE基因敲除小鼠,巨噬细胞转化为泡沫细胞过程中，胆固醇酯蓄积更加明显，更容易形成As病变，是作为体外培养巨噬细胞源性泡沫细胞模型进行干预研究的较理想选择。,ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞模型ApoE在体内,28,中医药干预ApoE基因敲除小鼠,腹腔巨噬细胞泡沫化及机制,本科研团队的研究,研究内容,ApoE基因敲除小鼠,腹腔巨噬细胞体外培养泡沫化,干预PPAR、CD36、ABCA1信号通路,抑制TLR4表达及炎症反应,拮抗细胞内钙离子水平,降低胆固醇浓度,脉心康胶囊,降脂红曲,虎杖、山楂,及其配伍,中医药干预ApoE基因敲除小鼠本科研团队的研究研究内容Apo,29,一、脉心康干预ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化及其机制研究,方药组成：,人参,银杏叶,降脂红曲,绿茶,功效成分组方,人参,皂苷,银杏叶提取物,降脂红曲超微粉,茶多酚,中医药功效：益气活血解毒化浊,脉心康胶囊,一、脉心康干预ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞泡沫化及其机制研究,30,研究分组,脉心康组,洛伐他汀组,罗格列酮组,生理盐水组,空白对照组不加含药血清,分别加入含药血清,含药血清干预时间72小时,研究分组脉心康组分别加入含药血清含药血清干预时间72小时,31,（激光共聚焦显微镜）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性,泡沫细胞内钙离子浓度的影响,（激光共聚焦显微镜）脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性,32,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPAR蛋白表达的调控作用,（免疫组化法 ，,PPAR,蛋白表达）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPAR,33,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白表达的调控作用,（免疫组化法 ， ABCA1蛋白表达）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1,34,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞CD36蛋白表达的调控作用,（流式细胞术 ， CD36蛋白表达）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞CD36蛋,35,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPARmRNA表达的调控作用,（原位杂交法， PPAR mRNA表达）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPAR,36,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA表达的调控作用,（原位杂交法，,ABCA1,mRNA表达）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1,37,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞CD36mRNA表达的调控作用,（原位杂交法， CD36 mRNA表达）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞CD36m,38,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞培养液TNF-的影响,（ELISA法，TNF-）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞培养液TN,39,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞培养液IL-1的影响,（ELISA法， IL-1 ）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞培养液IL,40,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内总胆固醇的影响,（高效液相色谱法，总胆固醇 ）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内总胆固醇,41,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇酯的影响,（高效液相色谱法,，胆固醇酯）,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇酯,42,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇酯/总胆固醇比值的影响,脉心康对ApoE基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇酯/,43,结 论,以ox-LDL诱导24小时、48小时、,72小时,后，镜下观察可见巨噬细胞泡沫化程度随时间逐渐加重,脉心康含药血清干预后，细胞内胆固醇酯、总胆固醇含量及其比值均显著降低,细胞内钙离子水平显著降低,PPAR、ABCA1蛋白及mRNA表达均显著增加,CD36蛋白及mRNA表达显著减少,细胞培养液中TNF-,、IL-1含量显著降低,结 论以ox-LDL诱导24小时、48小时、72小时后，,44,结 论,脉心康干预巨噬细胞泡沫化的机制，与以下几方面有关：,抑制胆固醇积聚,拮抗细胞内钙超载,激活PPAR信号通路,抑制炎症反应,结 论脉心康干预巨噬细胞泡沫化的机制，与以下几方面有关：,45,ApoE（-/-）小鼠,腹腔巨噬细胞培养,分为B-G组与ox-LDL+LPS,共孵育，并分别加药干预,B,虎,杖,苷,C,山,楂,提,取,物,D,虎杖,苷山,楂提,取物,组,E,洛,伐,他,汀,组,F,罗,格,列,酮,组,G,模,型,组,A,空,白,对,照,分别观察0、24、48h,三个不同时相的,以下指标变化,Western,blot,ELISA,TLR4,NF-,B,TNF-,IL-1,数据整理、统计分析,二、解毒活血配伍干预ApoE基因敲除,小鼠巨噬细胞泡沫化及机制研究,ApoE（-/-）小鼠腹腔巨噬细胞培养分为B-G组与ox-L,46,巨噬细胞泡沫化,以,ox-LDL,与,LPS,联合诱导ApoE基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化,联合诱导24小时及,48小时,显微镜下观察可见巨噬细胞均泡沫化,泡沫化程度随时间逐渐加重,且以ox-LDL与LPS联合诱导组较单纯以ox-LDL诱导组泡沫化程度更明显,透射电镜下观察可见细胞内部结构呈不同程度破坏,巨噬细胞泡沫化以ox-LDL与LPS联合诱导ApoE基因敲除,47,48小时空白组、模型组、解毒活血配伍组细胞电镜图片（,6000),空白组,模型组,解毒活血配伍组,透射电镜观察结果,48小时空白组、模型组、解毒活血配伍组细胞电镜图片（600,48,不同时相各组巨噬细胞内钙离子浓度的变化,#,#,#,*,*,#,#,*,*,*,*,*,*,*,*,*,（激光共聚焦显微镜）,不同时相各组巨噬细胞内钙离子浓度的变化 #*#*,49,不同时相各组巨噬细胞内总胆固醇含量,#,#,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,不同时相各组巨噬细胞内总胆固醇含量#*,50,不同时相各组巨噬细胞内游离胆固醇含量,*,*,*,*,*,*,*,*,不同时相各组巨噬细胞内游离胆固醇含量*,51,不同时相各组巨噬细胞内胆固醇酯含量,*,*,*,#,#,#,#,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,不同时相各组巨噬细胞内胆固醇酯含量*#*,52,不同时相各组巨噬细胞内PPARmRNA相对表达量,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,#,#,#,#,#,#,（RT-PCR法）,不同时相各组巨噬细胞内PPARmRNA相对表达量*,53,不同时相各组巨噬细胞内ABCA1mRNA相对表达量,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,#,#,#,#,#,#,（RT-PCR法）,不同时相各组巨噬细胞内ABCA1mRNA相对表达量*,54,不同时相各组巨噬细胞内CD36mRNA相对表达量,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,#,#,#,#,#,#,（RT-PCR法）,不同时相各组巨噬细胞内CD36mRNA相对表达量*,55,不同时相各组巨噬细胞内TLR4蛋白相对表达量,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,#,#,#,#,#,#,（Western blot法）,不同时相各组巨噬细胞内TLR4蛋白相对表达量 *,56,不同时相各组巨噬细胞内NF-B蛋白相对表达量,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,#,#,#,#,#,#,#,（Western blot法）,不同时相各组巨噬细胞内NF-B蛋白相对表达量*,57,不同时相各组巨噬细胞内TNF-含量,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,#,#,#,#,#,（ELISA法）,不同时相各组巨噬细胞内TNF-含量*,58,不同时相各组巨噬细胞内IL-1含量,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,*,#,#,#,#,#,（ELISA法）,不同时相各组巨噬细胞内IL-1含量*,59,结 果,虎杖苷、山楂提取物及两者配伍干预后：,明显减轻细胞内部结构破坏程度,显著上调细胞内PPAR、ABCA1的mRNA表达,下调CD36的mRNA表达,降低Toll样受体4（TLR4）、核因子-,B（NF-,B）、IL-1及TNF-,的表达,减少细胞内游离钙离子浓度,降低细胞内胆固醇酯、总胆固醇含量及其比值,两者配伍干预巨噬细胞泡沫化在部分指标方面明显优于单用虎杖苷或山楂提取物,结 果虎杖苷、山楂提取物及两者配伍干预后：,60,结 论,虎杖苷、山楂提取物及其配伍通过保护细胞超微结构,激活PPAR相关信号通络、抑制TLR4相关信号通路及炎症反应,拮抗细胞内钙超载,促进细胞内胆固醇外流等途径,抑制巨噬细胞泡沫化过程，延缓As的发生发展。,结 论虎杖苷、山楂提取物及其配伍通过保护细胞超微结构,61,其他学者的相关研究,张代娟等,取ApoE基因敲除小鼠胸主动脉，进行平滑肌细胞、内皮细胞以及巨噬细胞培养，以LPS诱导细胞泡沫化，以青心酮进行干预，,发现青心酮能够明显降低血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞的TLR4蛋白含量，,在一定程度上减少As病灶的形成，,推测青心酮可能通过TLR4信号转导途径发挥抗As作用。,其他学者的相关研究 张代娟等,62,第三部分,本研究成果的临床应用,第三部分本研究成果的临床应用,63,益气活血解毒化浊复方制剂的临床应用,脂欣康胶囊,脉心康胶囊,益气活血解毒化浊复方制剂的临床应用脂欣康胶囊,64,脂欣康胶囊脉心康胶囊,高脂血症,动脉粥样硬化（颈动脉粥样硬化）,延缓斑块发展,减轻斑块,稳定斑块,冠心病不稳定性心绞痛,脂欣康胶囊脉心康胶囊高脂血症,65,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块,66,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值,活血化瘀,As的炎症理论,毒邪,清热解毒,As的主要治法,活血解毒,本科研团队的研究,理论探讨,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值活血化瘀,67,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值,本科研团队的研究,研究假说,不稳定心绞痛具有,毒邪,致病的特点，,毒损心络,为其重要病机，,解毒,为其重要治法。,“,毒、瘀,致易损斑块”和“,解毒活血,法稳定易损斑块”。,清热解毒与活血化瘀配伍,可望进一步提高对相关疾病的疗效。,2002年,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值本科研团,68,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值,本科研团队的研究,研究内容,虎杖+山楂,大黄+红曲,虎杖+芎芍胶囊,解毒与活血配伍的创新药对,临床研究,实验研究,高脂血症,颈动脉粥样硬化斑块,不稳定心绞痛,As斑块,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值本科研团,69,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值,本科研团队的研究,研究结果,解毒与活血配伍优于单纯解毒或活血,作用机理,抗炎及其调控途径,稳定基质,调脂,降低细胞内钙超载,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值本科研团,70,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值,其它学者研究工作,周明学等的研究也表明，,活血解毒,中药有效部位(虎杖提取物、大黄醇提物)对ApoE基因敲除小鼠As斑块炎症反应的影响,优于单纯活血,(三七总皂苷),或解毒,(黄连提取物)。,解毒与活血配伍抗动脉粥样硬化稳定斑块的意义与临床价值其它学者,71,“虎杖山楂”药对的临床应用,降低血脂,抗动脉粥样硬化,稳定斑块,减轻脂肪肝,“虎杖山楂”药对的临床应用降低血脂,72,结 语,中医药以其多靶点干预的优势，对As泡沫化细胞的干预作用正逐渐受到关注。,目前该领域的中医药研究仍存在一定的局限性，较多采用普通鼠或细胞株的单核/巨噬细胞源性泡沫细胞模型；对ApoE基因敲除小鼠As模型泡沫化细胞的干预及机制研究还较少。重视和加强后者的研究，有重要价值和良好的临床应用前景。,继续挖掘能够干预As泡沫化细胞的中药并对其作用机制进行深入研究，对于防治As具有重要的意义。,结 语中医药以其多靶点干预的优势，对As泡沫化细胞的干,73,中西医结合事业如旭日东升,（新浪博客,.sina/zhangwengao,）,（新浪微博,weibo/1345244940,）,中西医结合事业如旭日东升（新浪博客.sina/zhangwe,74,热烈祝贺,第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛,第二届黄河心血管病防治论坛,圆满成功！,谢谢,热烈祝贺谢谢,75,