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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1.,植物组织培养原理：,植物细胞的全能性,植物体细胞杂交原理：,细胞膜的流动性和植物细胞的全能性,2.,动物细胞工程常用的技术手段？,动物细胞培养（,基础,）,动物细胞核移植,动物细胞融合,生产单克隆抗体等,3.,动物细胞培养的条件,（1）无菌（,在培养液中添加一定量的抗生素,）,无毒（定期更换培养液，以清除代谢产物）,（2）营养（通常需加入,动物血清、血浆,）,（3）温度（,36.5,0.5,）和PH（,7.27.4,）,（4）气体环境（O,2,促进细胞有氧呼吸；CO,2,维持培养液的PH）,4.,单克隆抗体制备用到两次筛选,在,选择培养基,上,筛选出杂交瘤细胞,利用特定抗原，,筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞,（原理：,抗原,-,抗体杂交,）,杂交瘤细胞的特点：,既能无限增殖，又能产生所需的特异性抗体。,单克隆抗体的优点：,特异性强、灵敏度高、可以大量制备。,瞬,时,记,忆,1.植物组织培养原理：植物细胞的全能性瞬,培养基的分类,1.,物理性质,：,植物,固体培养基、半固体培养基（琼脂）,动物,液体培养基,2.,化学成分：,天然培养基（成分与含量均不确定）,馒头,合成培养基（成分及含量均按一定的配比合成）,3.,特殊功能,：,选择培养基,（选择杂交瘤细胞、选择成功导入目的基,因的受体细胞）,鉴别培养基,（大肠杆菌的伊红美蓝培养基,金属光泽）,植物：分化培养基,P35,培养基的分类1.物理性质：植物：分化培养基P35,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬液,10,代细胞,50,代细胞,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,原代培养,胰蛋白酶,剪碎,过程：,遗传物质未改变,遗传物质已改变,1.,细胞贴壁,接触抑制,2.,保持正常,的二倍体,核型,理解：,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬液10代细胞50代细胞传,1、,无菌、无毒的环境,（添加一定量的,抗生素,，定期更换培养液）,2、,营养,（,葡萄糖、氨基酸、无机盐、,微量元素、促生长因子,动物血清、血浆,等。,）,3、,温度和PH,36.5,+,0.5度；PH为7.2-7.4。,4、,气体环境：,O,2,和CO,2,（95%空气和5%CO,2,作用？,）,补充合成培养基中缺乏的物质,动物细胞培养条件,维持培养液的,PH,1、无菌、无毒的环境补充合成培养基中缺乏的物质动物细胞培养条,动物细胞培养技术的应用,大规模培养动物细胞,生产生物制品,基因工程中的,受体细胞,检测,有毒物质,用于生理、病理、药理等方面的研究 为治疗和预防疾病提供理论依据,许多,致畸、致癌物质,加入培养基后，培养细胞会发生染色体结构及数目的变异，根据,变异细胞占全部培养细胞的百分数,，可以判断某种物质的毒性，快速而灵敏,。,病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体,利用动物细胞培养技术中的,细胞贴壁生长和接触抑制的特点,，可用烧伤病人自己的健康皮肤细胞培养出大量的自身薄层皮肤细胞，以供植皮所需。,动物细胞培养技术的应用大规模培养动物细胞生产生物制品基因,比较项目,植物组织培养,动物细胞培养,原理,植物细胞的全能性,细胞增殖,培养基性质,固体培养基,液体培养基,培养基,特有成分,蔗糖 植物激素,葡萄糖 动物血清血浆,培养结果,植物体,细胞群,培养目的,快速繁殖、培育无病毒植株等,获得细胞或细胞产物,取材,离体的植物组织、器官、细胞,动物胚胎或幼龄动物,的器官组织,其他条件,均为无菌操作，需要适宜的温度，,PH,等条件,植物组织培养和动物细胞培养的比较,比较项目植物组织培养动物细胞培养原理植物细胞的全能性细胞增殖,母绵羊,乳腺细胞,细胞核,细胞核移植,融合后的细胞,早期胚胎,卵裂,C,母绵羊子宫,胚胎移植,多莉羊,分娩,妊娠,1.无性生殖,卵母细胞,母绵羊,细胞质,重组胚胎,动物体细胞核移植,教材,P48,流程图,2.显微操作去核,3.减数第二次分裂中期,4.用体细胞核移植得到的动物称为克隆动物,动物细胞核的全能性,供体,受体,母绵羊乳腺细胞细胞核细胞核移植融合后的细胞早期胚胎卵裂C母,1.,原理：,动物细胞核的全能性,2.,受体细胞：去核的卵母细胞（减数第二次分裂中期）,3.,克隆动物的,主要,遗传性状来自供体,思考,:,1.,克隆动物产生主要应用的技术手段,?,核移植、早期胚胎培养（动物细胞培养）、胚胎移植,2.,取卵母细胞作受体细胞的原因？,3.,卵母细胞为何去核？,为使重组胚胎或动物的主要遗传物质全部来自有重要利用价值的动物,动物体细胞核移植,（,1,）卵细胞大，容易操作,（,2,）营养物质丰富，为早期胚胎培养提供充足的营养,。,（,3,）含有促进细胞核全能性表达的物质。,1.原理：动物细胞核的全能性为使重组胚胎或动物的主要遗传物质,克隆动物的研究意义,-,P49,1.,改良动物品种,促进优良畜群繁育,2.,保护濒危动物,增加存活数量,3,.,克隆动物作为生物反应器,生产医用蛋白,4,.,治疗人类疾病,作为供体，进行器官移植,体细胞核移植技术存在的问题,1,.,许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。,2,.,成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。,克隆动物的研究意义-P491.改良动物品种促进优良畜,动物细胞融合,VS,植物体细胞杂交,不需要处理,基因工程：,动植物病毒：载体,细胞工程：,灭活的病毒：促融剂,动物细胞融合 VS 植物体细胞杂交不需要处理基因工程：细胞工,抗原,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,细胞融合、筛选,克隆化培养,筛选,提取,腹腔（腹水）,体外培养,体内培养,单克隆抗体制备过程,浆细胞,特异性抗体阳性检验,脾脏,抗原骨髓瘤细胞杂交瘤细胞细胞融合、筛选克隆化培养筛选提取,单克隆抗体的制备过程,提示：,1.,第一次筛选：杂交瘤细胞；,第二次筛选：能产生,所需特异性抗体,的杂交瘤细胞。,2.,用到技术：动物细胞培养、动物细胞融合,3.,“,单,”,：特异性的,B,淋巴细胞；,“,克隆,”,：无性繁殖,浆细胞,单克隆抗体的制备过程 提示：浆细胞,单克隆抗体的制备过程,（,1,、,3,、,2,、,3,）,1,：,注射,特定抗原,3:,在考虑细胞两两融合的情况下，有,三种杂交细胞,，,其中只有一种是杂交瘤细胞。,2,：,两次筛选,在选择培养基上筛选出,杂交瘤细胞,利用特定抗原，进行多次抗体检测筛选，筛选出能,产生所需抗体的杂交瘤细胞,（原理：特定的抗原,抗体结合）,3,：,三次培养,：,在选择培养基上筛选时，即是培养的过程,在进行多次,抗体检测,之前都需要,克隆化培养,筛选好的杂交瘤细胞进行体内或体外大规模培养。,单克隆抗体的制备过程（1、3、2、3）1：注射特定抗原3:,单克隆抗体的应用：,单克隆抗体优点,：,特异性强,、,灵敏度高,、,大量制备,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与,特异性结合,优点：,准确、高效、简易、快速,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,单克隆抗体的应用：单克隆抗体优点：特异性强、灵敏度高、大量制,
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