白细胞计数和分类

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,诊断学-实验一,白细胞计数,实验一、白细胞计数,1.,原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。,2.,试剂器材,白细胞稀释液：冰乙酸,2.0ml,10g/L,亚甲蓝,3,滴,加蒸馏水 至,100ml,器材,改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、,1ML,刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。,毛细血管采血标准操作程序,操作步骤：,1,采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。,2,轻轻按摩采血部位。,3,用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。,4,紧捏刺血部位，使其自然充血。,5,用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度,2,3mm,，稍加挤压以血液流出为宜。,6,用干棉球擦去第一滴血。,7,按需要依次采血。,8,采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。,微量吸管的使用,1,将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；,2,拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；,3,将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；,4,用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；,5,将微量,吸管插入小试管底部，,三指轻微用力慢慢排出,血液，用上清液冲洗管内,余血,2-3,次，轻摇,试管,混匀；,6,拔出微量吸管弃入污物桶。,3.,操作步骤,（,1,）,加稀释液 用,移液管,向小试管内加入,0.38ml,白细胞稀释液,。,（,2,）采血、稀释用,微量吸管采血,20ul,，拭去管外余血，释放于小试 管,底部，用上部,稀释液洗净吸管内余血，,轻摇,试管,混匀，静置等其溶血。,（,3,）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。,（,4,）充计数池将小试管轻微振荡,2,min,，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白,细胞悬液，充入计数池内。,静置,2-3min,，使细胞沉于,计数池底面,。,（,5,）调试显微镜,将计数板放置载物台上，,选择（,4,）,低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至,低倍镜（,10,），,调节光亮,。,（,6,）,计数,低倍镜下计数四角,4,个大方格内白细胞总数，压线细胞,数上不数下，数左不数右,。,结果计算,白细胞总数,=4,大格白细胞数（,N,）,/410 20 10,6,=N,20 10,9,/L,用,.10,9,/L,（小数点后一位）表示,5,细胞计数原则,大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，,弓形移动,实验报告内容,原理,试剂器材,操作步骤,实验结果,讨论,诊断学 实验二,白细胞分类,1.,分类原理：白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类,100,个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比,2.,瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性,美兰（,M,+,）,和带负电的酸性,伊红（,E,-,）,离子。细胞的染色既有,物理的吸附作用,，又有,化学的亲和作用,。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。,3.,器材,光学显微镜,推片，载玻片,试剂,Wright,染液,Wright 1.0g,甲醇,600ml,磷酸盐缓冲液（,PH6.4,6.8,）,香柏油,标本来源,EDTA-K,2,抗凝全血,3,白细胞分类：,细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，,油镜,下分类计数。分类时要有,秩序,的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数,100,个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。,结果记录方式,：,Ne,正 一,Ly,正,Mo,正,Eo,正,Ba,正,中性粒细胞（,Ne,）,：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。,各类成熟白细胞的形态学：,嗜酸性粒细胞（,Eo,）,：,较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，,呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，,胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。,嗜碱性粒细胞（,Ba,）,：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。,淋巴细胞（,Ly,）,：胞体呈圆形，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。,单核细胞（,Mo,）,：在瑞氏染色涂片上为,12,20,m,，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。,正常成人外周血白细胞分类参考值：,Ne 50%,70%,Ly 20%,40%,Mo 3%,8%,Eo 0.5%,5%,Ba 0%,1%,实验报告,原理,方法,各类细胞百分比报告,讨论,