第四章 紫外可见分光光度法C 紫外可见分光光度法的应用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五节 紫外、可见分光光度法的应用,一、定性分析,二、有机化合物构型和构象确实定,三、定量分析,定性鉴别,纯度检查和杂质限量鉴定,单组分的定量方法,多组分的定量方法,一、定性分析,一定性鉴别,定性鉴别的依据吸收光谱的特征,吸收光谱的形状,吸收峰的数目,吸收峰的位置波长,吸收峰的强度,相应的吸光系数,续前,1比照吸收光谱的一致性,同一测定条件下，,与标准对照物谱图或标准谱图,进行对照比较,续前,2比照吸收光谱的特征值,续前,3比照吸光度或吸光系数的比值：,例：,二计算不饱和有机化合物 吸收波长的经验规那么,1、伍德沃德(Woodward)规那么,伍德沃德提出了计算共轭二烯、多烯烃及共轭烯酮类化合物,*跃迁最大吸收波长的经验规那么。见讲义69页到71页,2、斯科特(Scott)规那么,斯科特规那么类似于伍德沃德规那么，用来计算芳香族羰基的衍生,物，如苯甲醛、苯甲酸、苯甲酸酯等在乙醇中的max.见讲义71,页到72页。,二、有机化合物构型和构象确实定,采用紫外光谱，可以确定一些化合物的构型和构象。一般说来，顺式异构体的最大吸收波长比反式异构体小，因此可以用紫外光谱进行区别。,采用紫外光谱法，还可以测定某些化合物的互变异构现象。例如，乙酰乙酸乙酯有酮式和烯醇式间的互变异构。,紫外光谱也可以用于确定构象。例如-卤代环己酮有两种构象，一个C-X键为直立键、另一个为平伏键。,三、定量分析,一单组分的定量方法,1吸光系数法,2标准曲线法,3对照法：外标一点法,续前,1吸光系数法绝对法,练习,例：维生素,B,12,的水溶液在,361nm,处的百分吸光系数为,207,，用,1cm,比色池测得某维生素,B,12,溶液的吸光度是,0.414,，求该溶液的浓度。,解：,练习,例：精密称取,B,12,样品,25.0mg,，,用水溶液配成,100ml,。,精密吸取,10.00ml,，,又置,100ml,容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在,1cm,的吸收池中，于,361nm,处测定吸光度为,0.507,，求,B,12,的百分含量？,解：,练习,例：,解：,续前,2标准曲线法,芦丁含量测定,0.710mg/25mL,例如,续前,3对照法：外标一点法,注：当样品溶液与标准品溶液的,稀释倍数相同时,练习,例：维生素B12的含量测定,精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量该B12注射液的标示量为100g/mL。,解：,1对照法,练习,2吸光系数法,续前,二多组分的定量方法,三种情况：,1两组分吸收光谱不重叠互不干扰,两组分在各自max下不重叠分别按单组分定量,续前,2两组分吸收光谱局部重叠,1测A1b组分不干扰可按单组分定量测Ca,2测A2a组分干扰不能按单组分定量测Ca,续前,3两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定,1解线性方程组法,2等吸收双波长消去法,3系数倍率法,1解线性方程组法,步骤：,2等吸收双波长法,步骤：,消除,a,的影响测,b,续前,消去,b,的影响测,a,注：须满足两个根本条件,选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点,选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大,3系数倍率法,前提：干扰组分,b,不成峰形,无等吸收点,续前,步骤：,b,曲线上任找一点,1,另一点,2,优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号,K,倍，,提高了待测组分测定灵敏度,a,b,1,2,练习,解：,1、取咖啡酸，在165枯燥至恒重，精密称取10.00mg，加少量,乙醇溶解，转移至200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶,液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加,水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中，在323nm处测定吸,光度为0.463，该波长处的 ，求咖啡酸百分,含量。,练习,解：,2精密称取0.0500g样品，置于250mL容量瓶中，参加,0.02mol/L HCL溶解，稀释至刻度。准确吸取2mL，稀释至,100mL。以0.02mol/L HCL为空白,在263nm处用1cm吸收池,测定透光率为41.7%，其摩尔吸光系数为12000，被测物分,子量为100.0，试计算263nm处 和样品的百分含量。,见书后P215题17,四、其它方面的应用,相对分子质量的测定,氢键强度的测定,