小鼠骨髓细胞染色体标本的观察

,#,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第1页,一、试验目标,经过小白鼠骨髓细胞染色体制备，初,步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体,方法,2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动,物染色体数目及特点,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第2页,二、试验原理,骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞，从这些分裂细胞,中，可观察处处于分裂中期染色体，能对一个动物染色体,形态特征、数目进行准确观察和分析。,因为小鼠四肢骨内骨髓细胞中造血干细胞是生成各种,血细胞和原始细胞，含有高度分裂能力，本试验采取这一,材料，经过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染,色体标本，可观察到许多处于分裂中期染色体，能够进行,染色体组型分析。,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第3页,首先,为了取得较多中期分裂相骨髓细胞,必须给动,物注射一定剂量秋水仙素。秋水仙素对分裂期纺锤丝,形成含有破坏作用，当动物被注射适量秋水仙素后,处于,分裂增殖中骨髓细胞因为纺锤丝不能形成,中期染色体不,能正常趋向两极,因而大量,细胞处于观察染色体形态最正确,分裂中期,。其次,为了能够清楚观察染色体形态，取,出骨髓细胞要经过低渗(KCl溶液)处理使细胞膨胀、染色,体适当分散。固定(甲醇:冰醋酸)使染色体保持完好形,态。染色(Giemsa液)使染色体易分辨、观察。,二、试验原理(,continued),小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第4页,1.,材料,：,小白鼠,2.,试剂：,0.01,秋水仙素,0.4%,氯化钾,(KCl),固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa,染液,0.01,M,磷酸缓冲液(,pH 6.8)，2%,柠檬酸钠。,3.,器材：,离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、,小镊,子、,注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻,片和盖玻片,、染色缸、玻片盒,三、,试验用具,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第5页,四、试验步骤,1.,预处理：,试验前,2.5-3,小时，按每克体重注射,0.02ml,，,给小白鼠腹腔注射秋水仙素。,2.,断颈处死,动物,.,3.,剥取,股骨,和胫骨,，剔去肌肉组织，剪去两端股,骨头,4.,冲洗,骨髓：吸收,2%,柠檬酸钠,注射器针头插入骨,一端,重复冲洗骨髓,取,6,ml,至,离心管中,.,1000rpm,离心,5min,弃上清,.,5.,低渗,：加入,6mL 0.4%KCl,溶液,37,o,C,低渗,2,0,分钟，,中间（约,1,0,分钟）,用吸管吹打二次,，使细胞分,散，悬浮于溶液中。,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第6页,6.,离心：,1000rpm,离心,5,分钟后弃去上清液，,7.,固定,I,：,加,6,ml,固定液并用吸管轻轻吹匀，,室温下静,置,2,0,分钟，,每,1,0,分钟时吹打一次。,8.,离心：,1000rpm,离心,6,分钟，弃上清液。,9.,固定,II,：,同固定,I,。,10.,离心：,同,8,离心后,加,1mL,固定液，吸管吹打成,细胞悬液。,11.,滴片：,用吸管吸收细胞悬液，滴在预冷载玻,片上，室温晾干,12.,染色,：,10%Giemsa,染液染色,30,分钟,四、试验步骤(,continued),小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第7页,在显微镜下观察,Giemsa,染色之后染色体,片,(,染色体呈紫红色,),，找出分散适度中期染色,体图象,观察,小白鼠,染色体形态，统计,其,染色,体数目。,制得好标本应是细胞多、颜色为紫红色。,此时间期细胞因为低渗和固定处理，细胞膜和质,已被去掉，镜下看到仅为膨胀后呈圆形细胞,核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细,胞膜包裹，染色体之间无重合，易分辨，臂长,度适中。但最主要是分裂相要多。,五、试验结果,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第8页,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第9页,年,11,月,（生技,101,班）,年,11,月,（生技,101,班）,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第10页,几个动物染色体形态特征,动物名称,染色体数,染色体类型,x,染色体形态,y,染色体形态,青蛙,26,中央、亚中央着丝粒染色体,中央着丝粒染色体，介于,6,7,号,中央着丝粒染色体，介于,8,9,号,小白鼠,40,全部为近端着丝粒染色体,大小介于,5,6,号,大小介于,19,20,号,大白鼠,42,中央、亚中央近端着丝粒染色体,近端着丝粒染色体，介于,4,5,号,近端着丝粒染色体，介于,18,19,号,家兔,44,中央、亚中央近端着丝粒染色体,亚中央着丝粒染色体，介于,5,6,号,近端着丝粒染色体，介于,19,20,号,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第11页,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第12页,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第13页,六,、注意事项,低渗与离心等步骤操作要轻。,观察细胞标准为：,1.,细胞完整，轮廓清楚，染色体分布在同一水平面上,2.,染色体形态和分布良好。,3.,最好无重合，即使有个别重合，也要能明确辩认，,以免差错。,4.,所观察细胞处于同一有丝分裂阶段，即染色体螺,旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察细胞,周围，没有离散单个或多个染色体存在，以免影,响计数。,小鼠骨髓细胞染色体标本的观察,第14页,