遗传实验人外周血培养与染色体制备课件

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,一、实验目的：,1.,学习外周血淋巴细胞悬浮培养的原理和方法；,2.,利用培养后进行分裂的细胞制备人类染色体标本；,3.,利用人类染色体核型分析软件进行核型分析。,一、实验目的：1.学习外周血淋巴细胞悬浮培养的原理和方法；,1,二、实验原理：,1,、植物血凝素的作用,外周血中的淋巴细胞几乎都是处在,G,0,或,G,1,期，一般情况下是不分裂的。当在培养基中加入,植物血凝素,(PHA),时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，进而开始进行有丝分裂。,二、实验原理：1、植物血凝素的作用,2,2,、秋水仙素的作用：,秋水仙素,(colchicine),可以抑制细胞纺锤体的形成，使处在分裂的细胞停留在中期。因此利用秋水仙素处理可以获得许多同步的中期分裂细胞。,使用秋水仙素处理会引起染色体在一定程度上的收缩，因此在处理时间和浓度上要合适。,2、秋水仙素的作用：,3,3,、低渗的原理：,徐道觉等于,1952,年发现在固定细胞之前使用低渗液进行处理，可以使,细胞的核膜吸水膨胀，滴片后细胞破裂,，染色体分散开来，在显微镜下易于观察和统计，染色效果也明显提高。,这种技术被广泛采用后，使人类染色体分析技术得到了发展。,3、低渗的原理：,4,4,、核型和带型：,核型,(karyotype),：,是指染色体组在有丝分裂中期的表型,是染色体数目、大小、形态特征的总和。,在对染色体进行测量计算的基础上,进行分组、排队、配对,并进行形态分析的过程叫,核型分析,。,将一个染色体组的全部染色体逐条按其特征画下来，再按长短、形态等特征排列起来的图称为,核型模式图,，它代表一个物种的核型模式。,4、核型和带型：核型(karyotype)：,5,带型,（,banding pattern,）,即染色体带型。借助细胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。,常用的显带技术所显示的带有,Q,带、,G,带、,C,带、,R,带、,T,带,等。就每一种分带技术而言，每一染色体的带型是高度专一和恒定的。,带型（banding pattern）,6,三、实验用具及试剂：,实验仪器及用具：,恒温培养箱、离心机、恒温水浴箱、冰箱、显微镜、显微数码摄像系统、染色体分析仪；,培养瓶、注射器、微量移液器、枪头、吸管、离心管,(10ml),、载玻片、烧杯、量筒。,.,三、实验用具及试剂：实验仪器及用具：.,7,2.,实验试剂：,外周血淋巴细胞培养基,2%,碘酒,75%,酒精,20g/ml,秋水仙素,0.075 mol/L KCl,溶液,甲醇,冰醋酸,Giemsa,原液,1/15 mol/L,磷酸缓冲液,2.实验试剂：外周血淋巴细胞培养基,8,四、实验步骤：,1、,采血：,将皮肤常规消毒后静脉采血约 0.5 ml。,2、,种血及培养：,将采到的血样立即接种到培养瓶内，每个培养瓶接28或30滴（约0.5ml），轻轻摇匀后将培养瓶放在37温箱中培养72小时。培养过程中，每天应轻轻摇动两次培养瓶。,3、,秋水仙素处理：,在终止培养前,2-3,小时，向培养瓶中加 20g/ml的秋水仙素,3,滴，轻轻摇匀后继续培养到72小时。,四、实验步骤：1、采血：将皮肤常规消毒后静脉采血约 0.5,9,4,、制片：,（,1,）,离心：,从温箱中取出培养瓶，用吸管将培养液转入,10ml,的刻度离心管内。,2000,转,/,分，离心,10,分钟。,（,2,）,低渗：,弃去上清液。加入,37,预热的,0.075mol/L KCl,低渗液,8ml,，用吸管轻轻吹打匀，放在,37,恒温水浴中,40,分钟。,(,此时配固定液：甲醇,225ml+,冰醋酸,75ml)2000,转,/,分，离心,10,分钟。,（,3,）,预固定：,弃去上清液，在离心管中加入现配的预温的甲醇,-,冰醋酸,(3:1),固定液约,1ml,，轻轻混匀,室温固定,5,分钟。,4、制片：,10,（,4,）,再次离心,：,2000,转,/,分离心,10,分钟。,（,5,）,第一次固定,：弃上清液，加入固定液约,8ml,，立即用吸管吹打使之成细胞悬液，室温固定,20,分钟。,2000,转,/,分离心,10,分钟。,（,6,）,第二次固定,：同第一次固定。,（,7,）,弃上清液,，加入固定液,0.5ml,，用吸管吹打使均匀后制成细胞悬液。用封口膜封口，,4,保存备用。,遗传实验人外周血培养与染色体制备课件,11,【案例】,5、因为无论是瓜还是果，它在生长过程中，都离不开喷洒农药，而肥料和农药都含有对人体有害甚至有毒的物质。,(2)已经起泡的不要将泡弄破，以免感染，可在光溜溜周围用酒精涂擦，然后用布包上或干燥外露，不要随便上消炎粉、黄酱等，避免到医院时治疗时造成困难。,作为管理者，一个最重要的工作职责就是招聘新雇员。与候选人面对面的交流是检验他们的能力经历，为单位和空缺岗位物色合适人选的最佳时机。,岗位描述应将工作头衔和上下级关系包括在内。描述主要职责时，将期望新雇员取得的成绩具体化。描述日常工作时，尽量使用诸如“联络”或“发展”之类的动词，这样新雇员就会清楚自己需要做什么。,1.2.1界定职责,（4）出外是认识新朋友的好机会，新旧朋友多接触，就能锻煅自己的交际能力。,（5）在做跳马、跳箱等跨跃训练时，器械前要有跳板，器械后要有保护垫，同时要有老师和同学在器械旁站立保护。,一是我国国内目前的经济能力有限；,第八部分 饮食卫生安全,过程：.值日或大扫除时，不用扫除工具乱扔乱打。,做好充分的准备之后，销售人员就可以制定开发客户的方案。制定方案时，目标一定要明确，即明确要寻找的客户。,（,8,）,滴片：,在,30-40cm,高处将细胞悬液滴在预冷的载玻片上，注意动作应迅速，避免载片升温。,（,9,）,染色：,用,10%,吉姆萨染液扣染,30,分钟，染色结束后用清水将浮色冲去，干燥后即可进行镜检。,（,10,）,照相：,在显微镜下寻找分散较好的分裂相,(,核型,),，再置于显微照相仪下拍摄照片，并保存。,（,11,）,核型分析：,应用核型分析软件，进行染色体核型分析。,【案例】（8）滴片：在30-40cm高处将细胞悬液滴在预,12,遗传实验人外周血培养与染色体制备课件,13,核型分析仪及核型分析,核型分析仪及核型分析,14,五、注意事项,:,1,、秋水仙素处理时间过长，分裂细胞多，染色体短小；反之，则少而细长。都不宜观察形态及计数。故秋水仙素的浓度及时间要准确掌握。,2,、低渗使红细胞膜破裂，淋巴细胞膨胀，低渗处理浓度及时间要适当。且低渗后混匀细胞一定要轻，否则引起膜破裂、染色体散失。,3,、离心前配平，离心速度过高，细胞团不易打散；反之，细胞易丢失。,4,、固定液应在使用前临时配制。,5,、载玻片一定要洁净，否则染色体分散不好。,五、注意事项:1、秋水仙素处理时间过长，分裂细胞多,15,六、实验结果与分析：,染色体核型分析：人类每个体细胞有,46,条染色体，,22,对常染色体和一对性染色体，男性为,46,，,XY,；女性为,46,，,XX,。,六、实验结果与分析：染色体核型分析：人类每,16,A,组（,No.1,3,）：是最大的一组染色体，它们的着丝粒在中部或几乎在中部，为中部着丝粒染色体；,B,组（,N0.4,5,）：为两对大的亚中部着丝粒染色体，它们有明显的长臂和短臂；,C,组（,N0.6,12+X,）：为中等大小的亚中部着丝粒染色体，它们大小相差不多，,X,染色体大小介于期间，一般难以区分；,D,组（,N0.13,15,）：为中等大小的近端着丝粒染色体，它们的一个重要形态特征是随体，随体是一对着色很深的小球，处于短臂的末断，随体与短臂之间的区域很少着色；,人类染色体分组,A组（No.1 3）：是最大的一组染色体，它们的着丝粒在中,17,E,组（,N0.16,18,）：包括一对中着丝粒染色体（,16,）和两对亚中着丝粒染色体（,17,、,18,）；,F,组（,N0.19,20,）：为两对小的中部着丝粒染色体；,G,组（,N0.21,22+Y,）：为最小的一组近端着丝粒染色体，在,N0.21,22,的短臂上可见随体。,Y,染色体常呈现异固缩状态，着色更深，可以识别。,人类染色体核型分析结果,E组（N0.1618）：包括一对中着丝粒染色体（16）和两,18,重要参数：,（,1,）染色体的相对长度,（,2,）臂比率,（,3,）着丝点指数,重要参数：（1）染色体的相对长度,19,遗传实验人外周血培养与染色体制备课件,20,七、作业及思考题：,1,、将分散良好的标本进行显微照相；,2,、观察人类染色体的形态、结构特点；,3,、对比男性和女性的染色体标本，比较异同；,4,、总结做好本实验的关键因素。,七、作业及思考题：1、将分散良好的标本进行显微照相；,21,八、参考文献：,医学遗传学基础与临床,.,程在玉，伦玉兰,.,山东：青岛出版社，,1993.,遗传学实验教程,.,王建波，方呈祥等编,.,武汉：武汉出版社，,2004.,外周血培养染色体失败的原因分析,.,李庆，王秉仪，洪美玲等,.,解放军医学高等专科学校学报，,1999(1),：,72.,八、参考文献：医学遗传学基础与临床.程在玉，伦玉兰.山东：青,22,核型,核型,23,带型,带型,24,3、过渡：为了保证交通安全，除了以上这些必要的交通措施外。国家还制定了相关的法律规定，这就是中华人民共和国道路交通管理条例。,汽车销售流程、汽车销售业绩的好坏直接决定着企业的利益。面对激烈的市场竞争，销售人员东一榔头西一棒槌的不规范行为，会直接导致销售业绩不佳和客户的流失。其中很多客户是因为对企业的销售和服务不满意而流失的。,导水槽,2、师小结并补充相关知识。,1 同学们，知道地震是一种怎样的自然现象吗？指名学生简单的说说自己所了解的地震。,1.7.4确定面试名单,1.9.1选择面试地点,（1）上衣、裤子口袋里不要装钥匙、小刀等坚硬、尖锐锋利的物品。,2、用红药水涂伤口，用创口贴、干净的布或手绢敷盖，防止伤口感染。,(3)经口引起中毒者，在昏迷不清醒时不得引吐，如神志清醒者，应及早引吐、洗胃、导泄或对症使用解毒剂。,非正式面试：围着一张大圆桌面试创造一种随和的氛围。,返回,3、过渡：为了保证交通安全，除了以上这些必要的交通措施外。国,25,正常男性核型,G,A,B,C,D,E,F,返回,正常男性核型GABCDEF返回,26,二、实验原理：,1,、植物血凝素的作用,外周血中的淋巴细胞几乎都是处在,G,0,或,G,1,期，一般情况下是不分裂的。当在培养基中加入,植物血凝素,(PHA),时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，进而开始进行有丝分裂。,二、实验原理：1、植物血凝素的作用,27,带型,（,banding pattern,）,即染色体带型。借助细胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。,常用的显带技术所显示的带有,Q,带、,G,带、,C,带、,R,带、,T,带,等。就每一种分带技术而言，每一染色体的带型是高度专一和恒定的。,带型（banding pattern）,28,四、实验步骤：,1、,采血：,将皮肤常规消毒后静脉采血约 0.5 ml。,2、,种血及培养：,将采到的血样立即接种到培养瓶内，每个培养瓶接28或30滴（约0.5ml），轻轻摇匀后将培养瓶放在37温箱中培养72小时。培养过程中，每天应轻轻摇动两次培养瓶。,3、,秋水仙素处理：,在终止培养前,2-3,小时，向培养瓶中加 20g/ml的秋水仙素,3,滴，轻轻摇匀后继续培养到72小时。,四、实验步骤：1、采血：将皮肤常规消毒后静脉采血约 0.5,29,4,、制片：,（,1,）,离心：,从温箱中取出培养瓶，用吸管将培养液转入,10ml,的刻度离心管内