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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物与免疫学试验（二）,实验内容,1,、录像：免疫标记技术,2,、介绍：血清学反应,3,、示教：单扩、双扩、火箭电泳、,对流免疫电泳、淋转、,E,花环,4,、操作：玻片凝集,血清学反应,抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，在外界条件影响下呈现肉眼可见的反应。实验所用抗体通常存在于血清中，故名。,特异性,可逆性,结合物的可见性与,带现象,前带现象：抗体过剩 后带现象：抗原过剩 比例适当：较大的晶格状,免疫复合物,特点,（,抗原抗体反应的特点）,抗原抗体反应的影响因素,浓度与比例,电解质,温度,酸碱度,血清学反应的种类,1,）凝集反应（,agglutination,）,2,）沉淀反应（,precipitation,）,3,）,补体结合试验（,complement fixation test,CFT,）,4,）,中和反应（,neutralization,）,5,）免疫标记技术,抗原的分类与抗原抗体反应的分类,颗粒性抗原,凝集反应,可溶性抗原,沉淀反应,（一）凝集反应,颗粒性抗原,可溶性抗原载体（与免疫无关）,直接凝集反应：玻片法：定性，测抗原,试管法（肥达试验）：半定量，测抗体,间接凝集反应,间接凝集抑制试验,（二）沉淀反应,概念：可溶性抗原,+,抗体 沉淀物,单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验,抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）,双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、,抗原定性试验等,抗原、抗体同时扩散（自由、定向）,单向,琼脂,扩散,单向琼脂扩散试验,是一种定量试验。,将一定量,已知,抗体混于琼脂中,，制板，,在适当位置打孔,，,将抗原加入孔中扩散,，,与板中抗体相遇,，,在比例合,适,处呈现白色沉淀环,，,环的直径与抗原,含量,成正比,。,主要用于,测定,血清各种,Ig,和补体成分的含量,单向定量免疫电泳,（,火箭电泳,）,将一定量,已知,抗体混于琼脂中,，制板，,在,板,的一端打一排小孔,，,加入待检样品,，,置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰,，,状如火箭,，,称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。,敏感度与单扩相仿,，,但需时较短。,双向,琼脂,扩散,在,琼脂板上打孔,，,抗原和抗体分别加到相应孔中,，二者自由,向四周扩散,，,在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统,，,可出现多条沉淀线。,可用,于,分析和鉴定标本中多种抗原成分,对流免疫电泳,打孔：,金属打孔器打两排孔,，,抗原孔与抗体孔间距离为,4,毫米,至,5,毫米。,加样,：,抗血清加于抗体孔内,；待测抗原、,阳性,、,阴性对照,抗原,分,别,加于抗原孔内,电泳,：,将琼脂,板,置电泳槽,，,抗原孔置阴极端,，抗体孔置阳极端,。,板,两端分别用湿纱布与缓冲液相连,，,通电,3,0,分钟。,结果：,在相应抗原、抗体孔间,出现,沉淀线。,（三）补体结合试验,方法：,待检系统：,Ag,（未知）,+,Ab,（已知）,+,补体,指示系统：绵羊红细胞（,Ag,）溶血素（,Ab,）,结果：溶血,阴性,不溶血,阳性,（四）中和反应（,neutralization,）,病毒中和试验,毒素中和试验,（五）免疫标记技术,将已知抗体或抗原标记显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。,常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金等,淋巴细胞转化试验,转化百分率正常值为,70%,左右,分裂相：即染色体型,母细胞：大,4-5,倍；核质疏松，有,1-3,个核仁；核周透明区；胞浆有空泡,过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡,小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少,E,玫瑰花环试验,T,细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成,E,玫瑰花环，由此可区分,T,淋巴细胞与,B,淋巴细胞。,直接凝集反应,玻片凝集,材料：玻片,1,张,/1,人，,1,号、,2,号菌落，生理盐水，诊断血清，接种环,方法：取生理盐水,3,4,环，菌落,1,2,环，后加血清,2,环,轻摇玻片，,1,2,分钟后观察,结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应,*,玻片扔在后面的玻片缸里,生理盐水,1,号菌落,生理盐水,+1,号菌落诊断血清,实验报告,六张图：单扩、火箭电泳、双扩、,对流免疫电泳、淋转、,E,花环,原理及结果：玻片凝集（结果可用图示）,
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