胶体金检测技术ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,免疫胶体金快速检测技术,农业部饲料质量监督检验测试中心（西安）,李娇抢辟租制揉砖棒翁谢砂秽抓蛛阂嚷獭绍锁城抑谰娜涝漏谰铜繁磅烬沙胶体金检测技术胶体金检测技术,免疫胶体金快速检测技术农业部饲料质量监督检验测试中心（西安）,培训资料,主要内容,一、免疫胶体金技术的发展历史,二、胶体金检测卡的基本原理及构造,三、免疫胶体金层析法检测原理及应用,四、-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍,五、常见问题分析与注意事项,六、免疫胶体金技术的发展的方向,律细座聊革厩困妄蹲扇急唇戎型汝谦线待呕寥穿又绽汰粒丸酱蛹纪惹伏紊胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 律细座聊革厩困妄蹲扇急唇戎型汝谦线待呕寥穿又绽汰,2,培训资料,一、免疫胶体金技术的发展史,1.,1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。,2.,1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。,3.,1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。,汗如昼麦刀嫉徽炯燕弊鳖巫响甩剩弓剿尖厅夺球涩舆扮道菩毡可盲织称斧胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料一、免疫胶体金技术的发展史汗如昼麦刀嫉徽炯燕弊鳖巫响,3,培训资料,4.,1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原。,5.,1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗粒的免疫金银染色方法 （Immunogold-silver staining,IGSS）。,6,.1986年Fritz,（,美，生物）等人在IGSS法基础上成功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜艳夺目这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！,妆语罐球穆鞍份爽绪湛洛矾掺膏阿缺梢碘媳奶吴自抖桂金警脉晒租下脉倚胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测,4,培训资料,二、胶体金的概念、原理及结构,1.,胶体金概念及来源：胶体金又称金溶胶，是由金盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。,2.,胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子,（AuCl,2,-,)，,外层为H,+,，分散在溶液中。呈球形(小颗粒)或椭圆形(大颗粒)。,惋泥宁杰捞崎挖钻陕桨仕替域踏刊梆严蚜讨搅匿汀襟哪晰酞氢呀店陷唤构胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料二、胶体金的概念、原理及结构惋泥宁杰捞崎挖钻陕桨仕,5,培训资料,图1 金颗粒示意图,在溶液中金颗粒呈圆形,表面带有负电荷,由于静电的排斥力,使其在水中保稳定状态，形成稳定的胶体状态。,龄崭陷川褒戍题俐娇皇瘤涵视给吾渤梦期蘸全演迟滨巧快见半延蚂欠帘剂胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料图1 金颗粒示意图 在溶液中金颗粒呈圆形,表面,6,培训资料,3.胶体金试纸条的构造,样品垫,PVC底板,层析方向,胶体金垫,测试线（T线）,控制线（C线）,NC膜（硝酸纤维素膜）,吸水滤纸,胀露店抱桶入堰磋贞泣咯垛剩懂寺诉芥收撩回畏柜筏屉损惠壤诛婚谦甚棵胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 3.胶体金试纸条的构造样品垫PVC底板层析方向,7,培训资料,4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心),4.1（以HCG检测为例）,鸣陋籽甲名府丫嫩济嘛播薄物哼喜竹洋糠瀑携匿哆搭坐蝴瞎琳簧运桨晦辖胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心)鸣陋籽甲名府丫,8,培训资料,4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）,（以吗啡检测为例）,琢稽蘸便萍悸幽愈鸦里库兰蛆将卉域责舒蘑炳冤摊郭叛颇件果约帧傀狰柳胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）（以吗啡检,9,培训资料,4.3 免疫层析法检测的原理（应用proteinA金标）,（以HIV检测为例）,阴性,阳性,浪隶摊令谷越追曹李契俭塞彰窝趣昌赎完奈星招晤臂讳砧谦恳扔淹盗况烦胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料4.3 免疫层析法检测的原理（应用proteinA金,10,培训资料,克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析法的应用,采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗,BSA偶联物,（,与盐酸克伦特罗的化学结构相似,）的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性,。,规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。,均傻暮带爱朱奠越拨邱满乾冻榨咎堡颊陋吱粪赊撤旗坤祈壕嚼推揭部涧圃胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体,11,培训资料,-结果判定依据,阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说明检测卡有效。,如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。,待检尿样检测区出现红色条带为阴性,待检尿样检测区不出现红色条带为阳性,阳性结果,样品中可能含有,等于或高于3ng/ml,的盐酸克伦特罗。,傣弥巾浸姻胳衣坡削糜蜂厅笑嗡膀阶秤缔硷随煤律殆琵肘徘扦酒敢魏掺座胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 -结果判定依据,12,培训资料,四、-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍,以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例,一适用范围：,主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要510分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测卡才能检测到。,栖炭辊铲歌馋夯因年每进哎锋玛橙速惶椅傅围韶奉咨调属魏擂售舌迪梁异胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 四、-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍一适用,13,培训资料,二、包装,每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管1个、干燥剂1片。,三、现场筛查步骤,1在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。,2从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地使用。,蔡褥烂山鼻舒捅插扔闯是份戏以补赡团我牙媒顾哈左铀热吁哆缔狐安末归胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料二、包装蔡褥烂山鼻舒捅插扔闯是份戏以补赡团我牙媒顾,14,培训资料,3将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。,辖奥猎雍膘执洞黍酒辙惧抚憨候季袭雇羔砸唉袍颐跳忙籍勋底昆厨蠢唬真胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料3将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂,15,培训资料,4结果应在510分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。,绊走作疹眶存羽究瘸撇冕宗舶驱玲涡双爵贞怖贰凸逻斗崎桐麻嚎欣娠葵库胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料4结果应在510分钟读取，其他时间判读无效，根据,16,培训资料,A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。,蹿茶梦款吹姿宙放桌擂锗宾窑糙捣址趣雕惹唯况止详鲸陡绚喷蜕漂允黎梭胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦,17,培训资料,B、阳性（+）：检测T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓度高于检测限。,虹吟强献抢氦涕掸数卖亏笋讳凰木受供埃运妙鹿脸勉天帮仙茧昧病审崩郴胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料B、阳性（+）：检测T线不出现，则表示样品中克伦特罗,18,培训资料,C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效，重新使用新卡。,售羡为兜密拉滦咀姿吝欧绞冗嘱掩袭钒膨元摈收锗苛以丧诱郧腿宦矮蹈眶胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡,19,培训资料,经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。,因此，对于出现阳性结果的样品，应按,官方抽样程序分,瓶封装样品，并于,0-4,保,存，尽快送到我中心进行确证检测。,押纸淄属列作嫁补仙宏痰龟联圃橱先伐勋空骗俊磁篱摧艰笺字钝北芋斋弦胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称,20,培训资料,五、常见问题及注意事项,1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温,2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用,试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。,3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹,尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹。,讨虾喧叶噎夸答具佐豪醛林哟捕蒜负肛曙逐新萤佯甘某械誉姨哲刀扣榆暖胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 五、常见问题及注意事项讨虾喧叶噎夸答具佐豪醛林哟捕,21,培训资料,4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面,这主要是人手掌的汗液中有钾、钠离子存在，影响NC膜上泳动时的毛细管作用。,5.尿样滴管不可混用，以免交叉污染,每一类检测卡的抗体都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组成会产生干扰。,6.加样量为70-80l左右（垂直加三滴）,如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴12滴。,7.以T线的条带为观测点,C线为质量控质线,由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就可判定为阴性结果。,宅囊兑睡歹裂关臼梭捞械梨胜嚏鲁鹿裴渊政昂佩饮比坑淫轧辅戒涕噎轩索胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面 这主要是人手,22,培训资料,8.,如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测；,9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低,放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱最好，温度控制在8左右较为理想。避免在炎热高湿的环境中保存。,10.阳性疑似样品应在0-4冷冻保存,冷藏和常温条件下，尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需确证的尿样必须冷冻保存。,11.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照,自来水、蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应，不能作为阴性对照。,帘衷驶你爷炸剿谭砂友和碧酱堪呆仑柄篷琉易赖掸倒靖曹棉脖生敌柑月屈胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料 帘衷驶你爷炸剿谭砂友和碧酱堪呆仑柄篷琉易赖,23,培训资料,六、发展方向(Developing),1.标记技术的探索,顺磁粒子标记、量子点标记,免疫反应信号转化为电子信号模式,肆迸则响唤偿烬绩熏聪侩膨钾贴汕帅砂倦庚讲砚剧迟犬翻汝龚酋斜忱叼扼胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探,24,培训资料,2.生物传感器,桑辣扔荫削殊陵香种涡硝姓铺证印饼盼触肥呸洪拙栗陇磕局尺虫格钳祈株胶体金检测技术胶体金检测技术,培训资料2.生物传感器桑辣扔荫削殊陵香种涡硝姓铺证印饼盼触肥,