自身免疫性疾病及其免疫检测检验系课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2015-6-24,北京大学人民医院,#,2024/11/19,北京大学人民医院,1,自身免疫性疾病及其免疫检测,第二十三章,2023/10/4北京大学人民医院1自身免疫性疾病及其,2024/11/19,北京大学人民医院,2,第一节 常见自身免疫性疾病简介,第二节,常用,自身抗体检验项目及临床意义,第三节,自身抗体,检测的常用方法及检测流程,第四节,自身免疫,性疾病相关的其它检验项目及其临床意义,2023/10/4北京大学人民医院2第一节 常见自身免疫性疾,2024/11/19,北京大学人民医院,3,患者郝,，女，,18,岁，学生，海滩上太阳光暴晒,4,天后，脸颊及鼻梁处出现大片红斑。一月来晨起时双侧指关节及髋关节有僵硬感，但随白天时间而有所减轻。,体检：体温,36.8,，脉搏,80,次,/,分，呼吸,18,次,/,分，,BP100/70mmHg,。一般状况良好。,脸颊及鼻梁处见大片红斑，表面有鳞屑。指、趾关节轻度肿胀。,2023/10/4北京大学人民医院3患者郝，女，18岁，,2024/11/19,北京大学人民医院,4,实验室检查：,血液一般检查：,RBC 4.210,12,/L,，,Hgb 130g/L,，,HCT 0.41,；,WBC 6.810,9,/L,；,PLT22010,9,/L,，血沉,4 6mm/1,小时末。,免疫学,检查：血清,ANA 11280,阳性，抗,dsDNA,抗体,1320,阳性，抗心磷指抗体（,-,），,C3 0.73 g/L,，直接或间接,Coombs,试验（,-,）。,尿液检查：阴性。,2023/10/4北京大学人民医院4实验室检查：,2024/11/19,北京大学人民医院,5,经,抗疟药物治疗和避免阳光照射后，病情好转，但一个月后，指关节及,髋关节疼痛,加剧，寒颤并连续,2,晚发烧,39,。耳后、颈部淋巴结肿大，体重也逐渐下降。,检查：脸部,红斑已消退，但手指、脚趾关节近端肿大,。,实验室检查：,dsDNA,抗体,12560,阳性，,C3,水平进一步下降。经用强的松及非固醇类消炎药治疗后好转，此后一个月复查,C3,水平恢复正常。,2023/10/4北京大学人民医院5 经抗疟药物治,2024/11/19,北京大学人民医院,6,思考题：,1,该病初步诊断是什么？,2,为何经常检测血清,C3,水平？,3,尿液常规检查阴性，说明什么？,4,如果患者血清,IgG,水平高达,18.2 g/L,，如何解释？,5,如果对耳后和颈部肿大的淋巴结进行活检，结果又会怎样？,2023/10/4北京大学人民医院6思考题：,2024/11/19,北京大学人民医院,7,概述,自身免疫耐受（,autoimmune-tolerance,）,:,正常情况下，机体免疫系统能识别,“,自我,”,，对自身组织成分不发生免疫应答反应，或仅产生微弱的免疫应答，此为自身免疫耐受。,自身免疫(,autoimmunity):,是指机体免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的,现象。,自身抗体(,autoantibody):,针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体。,自身免疫性疾病,(autoimmune disease，AID),因自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾,病。,2023/10/4北京大学人民医院7概述自身免疫耐受（aut,2024/11/19,北京大学人民医院,8,系统性自身免疫病,(systemic autoimmune disease),或器官非特异性或全身性自身免疫病,器官特异性自身免疫病,(organ-specific autoimmune disease),或局限性自身免疫病,按疾病累及的系统区分,按器官特异性分为两类,结缔组织疾病 神经肌肉疾病 内分泌性疾病,消化系统疾病 泌尿系统疾病 血液系统疾病,生殖系统疾病 皮肤组织疾病 循环系统疾病,一 、自身免疫,性疾病的概念与分类,2023/10/4北京大学人民医院8系统性自身免疫病 (sy,2024/11/19,北京大学人民医院,9,器官特异性 非器官特异性,桥本甲状腺炎 扩张性心肌炎 自身免疫性溶血性贫血 系统性红斑狼疮,原发性粘液水肿 恶性贫血 特发性血小板减少性紫癜 干燥综合征,甲状腺机能亢进 自身免疫性胃炎 特发性粒细胞减少症 类风湿关节炎,Addisino,病 自身免疫性肝炎 绝经过早（少数病例） 硬皮病,1,型糖尿病 原发性胆汁性肝硬化 男性不育（少数病例） 多发性肌炎,/,皮肌炎,重症肌无力 原发性硬化性胆管炎 交感性眼炎 混合性结缔组织病,多发性硬化症 溃疡性结肠炎 晶状体源性葡萄膜炎 系统性血管炎,脱髓鞘疾病 克罗恩病 抗磷脂综合征 寻常型天疱疮,自身免疫性肾小球肾炎,肺肾出血综合征,自身免疫病的“病谱”,2023/10/4北京大学人民医院9 器,2024/11/19,北京大学人民医院,10,表,1,常见自身免疫病分类,_,类别 病 名 自 身 抗 原,_,器官特异性,慢性甲状腺炎 甲状腺球蛋白,微粒体,甲亢 甲状腺,细胞表面,TSH,受体,阿狄森氏病,肾上腺皮质细胞,青少年,型胰岛素依赖性糖尿病 胰岛细胞,萎缩性胃炎,胃壁细胞,溃疡性结肠炎,结肠上皮细胞,原发性,胆汁性肝硬化 胆小管细胞,线粒体,重症肌无力,乙酰胆碱受体,_,2023/10/4北京大学人民医院10 表1 常见自身免,2024/11/19,北京大学人民医院,11,自身免疫性溶血性贫血,RBC,特发性血小板减少性紫癜 血小板,非器官特异性,类风湿性关节炎,(RA),变性,IgG,RANA,干躁综合征,(SS) SSA,SSB,唾液腺管,系统性红斑狼疮,(SLE),胞核成分,(DNA,DNP,RNP,SM),胞浆成分,(,线粒体,微粒体,),RBC,血小板,混合结缔组织病,(MCTD),细胞核,(RNP),_,2023/10/4北京大学人民医院11,2024/11/19,北京大学人民医院,12,二、,常见的自身免疫性疾病,2023/10/4北京大学人民医院12二、常见的自身免疫性疾,2024/11/19,北京大学人民医院,13,特点,：,体内出现抗红细胞自身抗体,抗人球蛋白试验阳性；,红细胞寿命缩短；,AIHA,发病率,10/10,万，多见于中年女性；,继发性者多继发于淋巴系统恶性病、结缔组织病、感染和药物应用后；,引起,AIHA,的药物有,青霉素、奎尼丁、异烟肼、对氨基水杨酸、磺胺类、甲基多巴等,1,.,自身免疫性溶血性贫血,(,autoimmune hemolytic anemia,AIHA,）,2023/10/4北京大学人民医院13特点：1. 自身免疫性,2024/11/19,北京大学人民医院,14,抗红细胞抗体：,温抗体,IgG,，,37,可与,RBC,结合,;,不聚集,RBC,冷凝集素,IgG,，,低温时与,RBC,结合使其凝集,;,引起冷凝集素综合征,（,coldagglutinnin,syndrome,CAS,）,2023/10/4北京大学人民医院14 抗红细胞抗,2024/11/19,北京大学人民医院,15,2,、,免疫性血小板减少性紫癜,（,immunologic thrombocytopenic purpura,ITP,）,主要表现为皮肤粘膜紫癜，,pt,骨髓中巨核细胞可增多,女性多发，发病率,1/,万,患者有抗血小板抗体,使,pt,寿命缩短,2023/10/4北京大学人民医院15 2、免疫性血小板,2024/11/19,北京大学人民医院,16,3,、重症肌无力（,myasthenia gravis,MG,）,患者体内存在神经肌肉接头乙酰胆碱受体的自身抗体,该抗体结合到横纹肌细胞的乙酰胆碱受体,上使,之内化并降解,使肌细胞对运动神经元释放的乙酰胆碱的反应降低,引起骨骼肌运动无力,2023/10/4北京大学人民医院163、重症肌无力（ my,4.,毒性弥漫性甲状腺肿,(Graves disease),血清中有抗促甲状腺激素受体（,TSHR,）抗体。,刺激甲状腺激素持续分泌，造成甲状腺功能亢进。,2024/11/19,北京大学人民医院,17,4.毒性弥漫性甲状腺肿(Graves disease)202,5.,抗肾小球基底膜肾炎（,anti-glomerular basement membrane nephritis,，,anti-GBM nephritis,）,大部分为肺出血肾炎综合症,(Good pasture,综合症,),；,可检测到抗肾小球基底膜,型胶原抗体。,2024/11/19,北京大学人民医院,18,5.抗肾小球基底膜肾炎（anti-glomerular ba,2024/11/19,北京大学人民医院,19,6.,系统性红斑狼疮（,systemic lupus erythromatosus,，,SLE,）,累及多系统多器官的小血管及结缔组织病,年轻女性多发，渐进,患者体内有多种自身抗体自身抗原结合,IC,激活补体造成炎性损伤,ANA,（,+,）、,IgG,、,CIC,、补体,2023/10/4北京大学人民医院196.系统性红斑狼疮（s,2024/11/19,北京大学人民医院,20,7.,类风湿关节炎（,rheumatoid arthritis,，,RA,）,小关节发病,向心对称性发展,畸形常见,多发于青壮年，女多于男,炎症、感染,IgG,变性抗变性,IgG,抗体（即,RF,）与变性,IgG,结合,IC,沉积,激活,补体 免疫,损伤,可产生类风湿因子（,rheumatoid factor, RF,）、抗环瓜氨酸肽抗体、抗角蛋白抗体等多种自身抗体,2023/10/4北京大学人民医院207.类风湿关节炎（rh,2024/11/19,北京大学人民医院,21,8.,干燥综合征,(,Sjgren syndrome, SS,),SS,是一种明显侵犯外分泌腺的慢性自身免疫性炎症性疾病。唾液腺和泪腺最常被侵犯，从而产生口干和眼干，另外，皮肤、鼻、气管、支气管均可发生干燥；其他系统损害可表现为关节炎、肾结石、肾小管酸中毒、肺部炎症及纤维化、外周神经功能紊乱、精神异常、淋巴瘤等。,干燥综合征分为原发性和继发性两类，继发性,Ss,常并发于,RA,和,SLE,。,主要免疫学特征是：,(1)CD4+T,细胞核,B,细胞浸润唾液腺和泪腺。,(2),血清中存在抗核蛋白,SSA,和,SSB,抗体。,(3),呈,HLA,基因连锁遗传。,2023/10/4北京大学人民医院218.干燥综合征(Sj,9.,多发性肌炎及皮肌炎,多发性肌炎（,polymyositis, PM,）以损害肌肉为主要表现；,皮肌炎,（,dermatomyositis, DM,）,PM,同时有皮肤损害，则称为,DM,。,PM,及,DM,患者有多种自身抗体，其中,Jo-1,、,Mi,主要见于,PM,，,Ku,多见于,PM,与硬皮病的重叠。,2024/11/19,北京大学人民医院,22,9.多发性肌炎及皮肌炎2023/10/4北京大学人民医院22,10.,硬化症（,scleroderma,，,Scl,）,局限性硬化症,：病变仅累及皮肤而不伴有内脏损害，其特异性抗体为抗着丝点抗体；,系统性硬化症,：病变累及内脏器官，其特异性抗体为抗,Scl-70,抗体。,2024/11/19,北京大学人民医院,23,10.硬化症（scleroderma，Scl）2023/10,2024/11/19,北京大学人民医院,24,11,、,1,型糖尿病,（,type 1 diabetes,mellitus,T1DM,）,患者体内产生了针对胰岛,细胞的,CD8,+,CTL,产生免疫应答,损伤胰岛,细胞,使胰岛素分泌不足，引起糖尿病,2023/10/4北京大学人民医院2411、1型糖尿病,12.,自身免疫性肝病,原发性胆汁性肝硬化（,primary biliary cirrhosis, PBC,）,以肝内中小胆管损伤为主，实验室常检测到碱性磷酸酶升高和抗,线粒体抗体或其,M2,亚型阳性。,自身免疫性肝炎（,autoimmune hepatitis, AIH,）,是一种不明原因的慢性肝脏炎症损伤，由于治疗方法不同，须与病毒性肝炎等其他肝炎相鉴别，血清可检测到多种自身抗体阳性。,原发性硬化性胆管炎（,primary sclerosing cholangitis,PSC,）,以肝内大胆管或肝外胆管损伤为主，实验室缺乏特异性的自身抗体，血清中有时会出现不典型的抗中性粒细胞胞浆抗体。,2024/11/19,北京大学人民医院,25,12.自身免疫性肝病2023/10/4北京大学人民医院25,第二节,常用自身抗体检验项目及,临床意义,2024/11/19,北京大学人民医院,26,第二节 常用自身抗体检验项目及临床意义2023/10/4北,2024/11/19,北京大学人民医院,27,一,、抗核抗体的检测与,应用,二、抗双链,DNA,抗体的检测及应用,三、抗核小体抗体的检测和应用,四、,抗,ENA,抗体谱的检测与应用,五、,血管炎相关的自身抗体检测与应用,六、心磷脂抗体,的检测与应用,七、,RA,相关自身抗体的检测与应用,八、,自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用,九、,内分泌疾病相关自身抗体的检测与应用,十、,神经系统自身免疫性疾病相关自身抗体的检测与应用,十一、,胃肠道疾病相关自身抗体的检测与应用,2023/10/4北京大学人民医院27 一、抗核抗体的检,2024/11/19,北京大学人民医院,28,自身免疫性疾病的重要标志,高滴度存在于自身免疫性疾病患者,与疾病的活动性相关,参与免疫病理性损伤,自身抗体,的一般特点和临床价值,2023/10/4北京大学人民医院28自身免疫性疾病的重要标,2024/11/19,北京大学人民医院,29,大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体，特别是有些自身抗体的检测已纳入某些自身免疫性疾病的诊断标准中，,如：抗,SM,抗体,-SLE;,抗,CCP,抗体,-RA,等。,自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。,自身抗体,的一般特点和临床价值,2023/10/4北京大学人民医院29大多数自身免疫患者,2024/11/19,北京大学人民医院,30,标志抗体,相关疾病,dsDNA,SLE,Sm,SLE,SSB,SS,着丝点抗体,PSS（,局限型）,Scl-70,抗体,PSS（,弥漫型）,AKA,、抗,CCP,抗体,RA,Jo-1,抗体,PM/DM,（进行性系统性硬皮病）,高滴度,RNP,抗体,MCTD,肝肾微粒体抗体（,LKM-1）,型自身免疫性肝炎,平滑肌抗体（,SMA）,型自身免疫性肝炎,AMA（M2）,PBC,常见自身免疫性疾病的标志抗体,2023/10/4北京大学人民医院30标志抗体相关疾病dsD,2024/11/19,北京大学人民医院,31,抗核抗体（,ANA）,抗可提取性核抗原抗体（,ENA）,抗中性粒细胞胞浆抗体（,ANCA）,类风湿因子（,RF）,抗角蛋白抗体（,AKA）,抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,抗体）,抗心磷脂抗体（,ACLA,）,经常检测的自身抗体,2023/10/4北京大学人民医院31抗核抗体（ANA）经常,2024/11/19,北京大学人民医院,32,抗核抗体,:,:,以真核细胞（如,HEp-2,细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。,一、抗核抗体的检测与应用,2023/10/4北京大学人民医院32 抗核抗体:以真核,2024/11/19,北京大学人民医院,33,抗核抗体,谱,2023/10/4北京大学人民医院33抗核抗体谱,2024/11/19,北京大学人民医院,34,以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗,Sm、,抗,Sa,抗体等；,以相关疾病命名，如抗,Scl-70、,抗,SS-A、,抗,SS-B,抗体等；,以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；,以抗原的化学名称分类命名，如抗,DNA、,抗,RNP、,抗组蛋白抗体,抗核小体抗体等。,抗核抗体,谱,的分类和命名,2023/10/4北京大学人民医院34以首先检出该抗体的患者,2024/11/19,北京大学人民医院,35,间接免疫荧光法,（,indirect immunofluorescence, IIF）,酶免疫斑点法,ELISA,免疫印迹法,抗核抗体检测方法,2023/10/4北京大学人民医院35间接免疫荧光法抗核抗体,2024/11/19,北京大学人民医院,36,间接免疫荧光法示意图,HEp-2,细胞,肝组织切片,荧光标记抗体,病人血清（待检抗体）,2023/10/4北京大学人民医院36间接免疫荧光法示意图H,2024/11/19,北京大学人民医院,37,细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期,均质型 核糖体型 肌蛋白型 中心体型,斑点型 线粒体型 波形纤维蛋白型 纺缍体型,核仁型 高尔基体型 细胞角蛋白型 纺缍丝型,着丝点型 溶酶体型 原肌球蛋白型 中间体型,周边型 颗粒型 纽带蛋白型,PCNA,型,核点型(,dots),IIF,检测,ANA,荧光染色模型,2023/10/4北京大学人民医院37 细胞核,2024/11/19,北京大学人民医院,38,斑点型（,nRNP/Sm）,高滴度的抗,U1-nRNP,为,MCTD,的特征。抗,Sm,抗体对,SLE,具有高度特异性。,斑点型（,SSA/SSB）,抗,SSA,最常出现于,SS,及新生儿红斑狼疮 （100%）。抗,SSB,抗体几乎仅见于女性，可出现于,SS,和,SLE。,2023/10/4北京大学人民医院38斑点型（nRNP/Sm,2024/11/19,北京大学人民医院,39,ANA,：,核颗粒型,2023/10/4北京大学人民医院39ANA：核颗粒型,2024/11/19,北京大学人民医院,40,均质型,抗,dsDNA,抗体 抗组蛋白抗体(,histone),抗,ssDNA,抗体 抗核小体抗体(,nucleosome),2023/10/4北京大学人民医院40均质型 抗ds,2024/11/19,北京大学人民医院,41,ANA,：,核均质型,ANA,：,核均质型,2023/10/4北京大学人民医院41ANA：核均质型 AN,2024/11/19,北京大学人民医院,42,周边型,可见于胶原病、,PBC、CAH,等患者,2023/10/4北京大学人民医院42周边型 可见,2024/11/19,北京大学人民医院,43,ANA,：,核膜型,2023/10/4北京大学人民医院43ANA：核膜型,2024/11/19,北京大学人民医院,44,核点型,（,DOTS）,见于,SLE、SS、PBC、,风湿病,抗着丝点型,PSS,局限型标志抗体,2023/10/4北京大学人民医院44核点型（DOTS）,2024/11/19,北京大学人民医院,45,ANA,：,核点型,2023/10/4北京大学人民医院45ANA：核点型,2024/11/19,北京大学人民医院,46,ANA,：,着丝点,型,2023/10/4北京大学人民医院46ANA：着丝点型,2024/11/19,北京大学人民医院,47,ANA,：,核仁型,2023/10/4北京大学人民医院47ANA ：核仁型,2024/11/19,北京大学人民医院,48,ANA：,胞浆颗粒型,抗,Jo-1,抗体,抗核糖体,P,蛋白抗体,AMA,2023/10/4北京大学人民医院48ANA：胞浆颗粒型抗J,2024/11/19,北京大学人民医院,49,抗原纤维蛋白型,仅见于5%,10%的,PSS,，男性高于女性,抗,RNA,多聚酶,型抗体,仅见于硬皮病患者，阳性率为4%,2023/10/4北京大学人民医院49抗原纤维蛋白型 仅见于,2024/11/19,北京大学人民医院,50,抗,PM-Scl（PM-1）,抗体,见于重叠综合征（多发性肌炎,PM /,皮肌炎,DM /,弥漫性,PSS ）,2023/10/4北京大学人民医院50抗PM-Scl（PM-,2024/11/19,北京大学人民医院,51,抗,Scl-70,型,PSS,弥漫型的标志抗体,2023/10/4北京大学人民医院51抗Scl-70型 PS,2024/11/19,北京大学人民医院,52,增殖细胞核抗原型,（,PCNA）,SLE,特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关,2023/10/4北京大学人民医院52增殖细胞核抗原型,2024/11/19,北京大学人民医院,53,抗线粒体抗体,（,AMA）,SLE,标志抗体,原发性胆汁性肝硬化标志抗体,抗核糖体,P,蛋白（,rib-P）,抗体,2023/10/4北京大学人民医院53抗线粒体抗体（AMA）,2024/11/19,北京大学人民医院,54,抗,Jo-1,抗体,抗高尔基体抗体,多发性肌炎（,PM）,标志抗体,偶见于,SLE,和,SS,2023/10/4北京大学人民医院54抗Jo-1抗体抗高尔基,2024/11/19,北京大学人民医院,55,抗肌动蛋白抗体,见于自身免疫性慢性活动型肝炎,2023/10/4北京大学人民医院55抗肌动蛋白抗体见于自身,2024/11/19,北京大学人民医院,56,自身免疫性疾病,ANA,阳性率（%）,SLE,80,100,MCTD,95100,RA,20,40,PSS,8595,PM/DM,3050,SS,7080,溃疡性结肠炎,26,慢性活动性肝炎,3040,其它风湿病,2050,ANA,在自身免疫性疾病中的检出率,2023/10/4北京大学人民医院56自身免疫性疾病ANA阳,2024/11/19,北京大学人民医院,57,抗双链,DNA,抗体,抗,dsDNA,抗体与细胞核,DNA,（外围区）脱氧核糖磷酸框架结合。,抗,dsDNA,抗体是,SLE,患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。,二、抗,双链,DNA,抗体,2023/10/4北京大学人民医院57抗双链DNA抗体 抗d,2024/11/19,北京大学人民医院,58,检测方法及应用,间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗,dsDNA,抗体最常用的方法。,抗,dsDNA,抗体诊断,SLE,的特异性可达,95%,100%,，但其敏感性仅为,30%,50%,，因此抗,dsDNA,抗体阴性不能排除,SLE,的诊断。,检测方法及应用,2023/10/4北京大学人民医院58检测方法及应用间接免疫,2024/11/19,北京大学人民医院,59,抗,dsDNA,抗体,SLE,特异性抗体，与病情活动度相关。,2023/10/4北京大学人民医院59抗dsDNA抗体SL,2024/11/19,北京大学人民医院,60,抗dsDNA,抗体,金标准：,IIF（,绿蝇短膜虫）,2023/10/4北京大学人民医院60抗dsDNA抗体金标,2024/11/19,北京大学人民医院,61,三、抗,核小体抗体,核小体（,nucleosome,）,是真核生物细胞核染色质的基本单位 。凋亡细胞是核小体的重要来源，当,SLE,患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在患者体内大量存积，激活,B,细胞产生,抗核小体抗体（,Antinucleosome antibody ,AnuA,）。,2023/10/4北京大学人民医院61三、抗核小体抗体,2024/11/19,北京大学人民医院,62,检测及应用,AnuA,的检测通常采用,ELISA,检测法。,AnuA,具有同抗,ds-DNA,抗体相同的诊断特异性，可达到,95%,，在系统性硬化（,SSc,）病中可有,20%,50%,低浓度阳性率，其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性。,AnuA,的表达与,SLE,病情活动分数相关。,检测及应用,2023/10/4北京大学人民医院62检测及应用AnuA的检,2024/11/19,北京大学人民医院,63,抗,ENA,抗体谱,:,可提取核抗原抗体的总称,临床常检测的抗,ENA,抗体谱主要包括：,抗,Sm,抗,U1-RNP,抗,SSA,抗,SSB,抗,Jo-1,抗,Scl-70,抗,rib-P,蛋白,四、,抗,ENA,抗体谱的检测与应用,2023/10/4北京大学人民医院63,2024/11/19,北京大学人民医院,64,抗可提取,性,核抗原（,ENA,）抗体,2023/10/4北京大学人民医院64抗可提取性核抗原（EN,2024/11/19,北京大学人民医院,65,双向免疫扩散（,ID）,对流免疫电泳（,CIE）,免疫印迹法（,Western-blot）,ELISA,酶免疫斑点法,ENA,检测方法,2023/10/4北京大学人民医院65 双向免疫扩散（ID,2024/11/19,北京大学人民医院,66,免疫印迹法,SDS-PAGE,电泳,转移电泳,酶免疫检测,免疫印迹法,2023/10/4北京大学人民医院66免疫印迹法,2024/11/19,北京大学人民医院,67,2023/10/4北京大学人民医院67,2024/11/19,北京大学人民医院,68,抗可提取,性,核抗原（,ENA,）抗体,抗,Sm,抗体：,SLE,标记性抗体（,20%,30%,）,抗,nRNP,抗体,：,MCTD 95%,100%,（高滴度）,抗,SSA,抗体：,PSS 60%,75%,，其它,CTD,抗,SSB,抗体：,PSS 10%,40%,，其它,CTD,抗,Scl-70,抗体：,SSc 25%,75%,标记性抗体,抗,Jo-1,抗体：,PM/DM 25%,，标记性抗体,抗,rRNP,抗体：,SLE,特异性抗体（,10%,30%,）,2023/10/4北京大学人民医院68 抗可提取性核抗原（E,2024/11/19,北京大学人民医院,69,抗中性粒细胞胞浆抗体,（,anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies,ANCA）,是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。,五、,血管炎相关的,自身抗体,检测,与应用,2023/10/4北京大学人民医院69抗中性粒细胞胞浆抗体（,2024/11/19,北京大学人民医院,70,荧光染色型,靶抗原,胞浆型,(cANCA),蛋白酶3（,PR3）,杀菌/通透性增高蛋白（,BPI）,核周型,(pANCA),髓过氧化物酶（,MPO）,组织蛋白酶,G（Cath-G）,乳铁蛋白（,LF）,白细胞弹性蛋白酶（,HLE）,非典型型,(aANCA),兼有两种特性,ANCA,荧光染色型与靶抗原,2023/10/4北京大学人民医院70 荧光染色,2024/11/19,北京大学人民医院,71,ANCA ANCA = Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies,中性粒细胞,cANCA,（ 胞浆型）,pANCA,（ 核周型）,2023/10/4北京大学人民医院71ANCA ANCA,2024/11/19,北京大学人民医院,72,周边,型抗中性粒细胞胞浆,抗体,主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）,2023/10/4北京大学人民医院72主要见于炎症性肠病（溃,2024/11/19,北京大学人民医院,73,胞,浆型抗中性粒细胞胞浆,抗体,主要见于,Wegener,s,肉芽肿及微小多动脉炎,2023/10/4北京大学人民医院73主要见于Wegener,2024/11/19,北京大学人民医院,74,ANCA,临床应用,髓过氧化物酶（,MPO）,与显微镜下多血管炎、坏死性新,月体型肾小球肾炎,、,过敏性肉芽肿性血管炎相关,杀菌/通透性增高蛋白（,BPI）,主要见于肺部炎症性疾病,并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系,蛋白酶3（,PR3）,与,Wegener,s,肉芽肿（,WG）,密切相关。,仅,cANCA,诊断,WG,的特异性大于90%，联合,PR3,可超过95%， 活动期几乎100%阳性。,组织蛋白酶,G (Cath-G),白细胞弹性蛋白酶(,HLE),乳铁蛋白(,LF),可,见于,SLE、IBD、PBC、PSC,等,2023/10/4北京大学人民医院74 ANCA临床应用,2024/11/19,北京大学人民医院,75,抗内皮细胞抗体（,AECA,）检测方法：,主要采用,IIF,，一般以人脐静脉内皮细胞作为检测基质，,也可采用,RIA,、,ELISA,、免疫印迹法、免疫沉淀实验进行检查。,2023/10/4北京大学人民医院75抗内皮细胞抗体（AEC,2024/11/19,北京大学人民医院,76,AECA,阳性主要见于以下疾病：,原发性血管炎，如,WG,、显微镜下多动脉炎（,MPA,）、,Churg-Strauss,综合征（,CSS,）、特发性视网膜血管炎、白塞病（,BD,）、,Takayasu,动脉炎（,TA,）、巨细胞动脉炎（,GCA,）和,Henoch-Shoenlein purpura(HSP),；,继发于全身性,AID,的血管炎（,SLE,、,RA,、,APS,、,SSc,、,PM-DM,和,MCTD,）；,器官移植；,其他疾病：,Huremic Emolytic syndrome,、,HIT,、多发性硬化症、先兆子痫、慢性哮喘、,DM1,、炎症性肠病、突发性感觉神经性听力损伤和某些传染病。,AECA,临床意义,2023/10/4北京大学人民医院76AECA阳性主要见于以,2024/11/19,北京大学人民医院,77,六、心磷脂抗体,的检测与应用,抗心磷脂抗体,(anticardiolipin antibodies,ACLA),ACLA,能够干扰磷脂依赖性凝血过程,对抗凝作用的蛋白有抑制作用,;,抑制内皮细胞释放前列腺素,;,通过多种免疫损伤机制破坏内皮细胞与血小板。,ACLA,与多种疾病的发生有密切关系。,2023/10/4北京大学人民医院77六、心磷脂抗体的检测与,2024/11/19,北京大学人民医院,78,与,ACLA,相关的疾病主要有,:,1),血栓形成, 7),一过性脑缺血,2),血小板减少症,; 8),心肌坏死,3),习惯性流产,; 9),特发性血栓栓塞性肺静,脉高压,4),溶血性贫血,; 10)SLE,及各种结缔组织病,5),肢端顽固性溃疡,6),中风,检测方法,:ELISA,2023/10/4北京大学人民医院78与ACLA相关的疾病主,2024/11/19,北京大学人民医院,79,RA,早期诊断相关自身抗体,抗角质层蛋白抗体（,AKA,）：,1979,年,Young,等报告,靶抗原：,filaggrin,（,40KD,）,抗核周因子（,APF):1964,年,Nienhuis,等报告,靶抗原：,profilaggrin,（,37-41KD,）及其降解产物,抗聚,角蛋白微丝蛋白抗体（,AFA,）：,1993,年,Simon,等报告,靶抗原：,filaggrin,（,40KD,）,抗,Sa,抗体：,1994,年,Despres,等报告,靶抗原,:50/55KD,非酰基多肽，半抗原-瓜氨酸,抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,抗体）：,1998 Schellekens,七、,RA,相关自身抗体的检测与应用,2023/10/4北京大学人民医院79RA早期诊断相关自身抗,2024/11/19,北京大学人民医院,80,（一）,类风湿因子,（,rheumatoid factor,RF,）,为抗变性,IgG Fc,的自身抗体，主要是,IgM,型。,致病机理：,RF,与体内变性,IgG,结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。,2023/10/4北京大学人民医院80 （一）类风湿因子（r,2024/11/19,北京大学人民医院,81,1. 胶乳颗粒凝集实验,定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定,IgM-RF,2. 速率散射比浊法（,ARRAY、IMAGE）,定量、准确、快速，测定,IgM-RF,3. ELISA,定量、准确，可测定不同类型的,RF,检测方法,2023/10/4北京大学人民医院811. 胶乳颗粒凝集实验,2024/11/19,北京大学人民医院,82,（1）RF,在,RA、SLE、PSS,等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。,疾病,阳性率（%）,RA,79,SLE,30,SS,95,Sclerosis,80,PM,80,MCTD,25,临床应用,2023/10/4北京大学人民医院82 （1）RF在RA、S,2024/11/19,北京大学人民医院,83,（2）RF,滴度与,RA,患者临床表现呈正相关，,IgM-RF,效价80,IU/ml,并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。（3）,IgG-RF,与,RA,患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随,IgM-RF,同时出现，在正常人及非,RA,患者中很难检出。（4）,IgA-RF,与,RA,患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。,2023/10/4北京大学人民医院83（2）RF滴度与RA患,2024/11/19,北京大学人民医院,84,AKA,主要见于,RA,，阳性率36%,59%，特异性95%,99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的,RA,类型。,（二）抗角蛋白抗体,（AKA）,2023/10/4北京大学人民医院84AKA主要见于RA，阳,2024/11/19,北京大学人民医院,85,常用方法,：,ELISA,临床意义,：,RA,特异性自身抗体，敏感性,65%,85%,，特异性为,94%,98%,；高浓度抗,CCP,抗体是,RA,发生关节侵蚀的危险因子之一，定量检测有助于判断预后。,（三）抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,抗体）,2023/10/4北京大学人民医院85常用方法：ELISA（,2024/11/19,北京大学人民医院,86,自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎,自身免疫性肝炎,(AIH),原发性胆汁性肝硬化 (,PBC),原发性硬化性胆管炎,(PSC),重叠综合征,八、,自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用,2023/10/4北京大学人民医院86自身免疫性肝病是与自身,2024/11/19,北京大学人民医院,87,在多,种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中，自身抗体在发病机制中起重要作用,自身免疫性肝病具有相对特异性自身抗体谱,自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别诊断具有重要意义,自身免疫性肝病与自身抗体,2023/10/4北京大学人民医院87 在多种累及肝胆疾,抗平滑肌抗体,(anti-smooth muscle antibody, ASMA),抗肝肾微粒体,（,anti-LKM-1 antibody,，,LKM-1,）,抗,肝细胞胞浆抗体,1,型,（,LC-1,）,抗可溶性肝抗原,/,肝胰抗原抗体（,anti-soluble liver antigen/liver pancreatic antibody, SLA/LP,）,抗线粒体抗体（,anti-mitochondria antibodies,AMA,）,及其,M2,型,抗,sp100,抗体；,抗,PML,抗体,抗,gp210,抗体,抗,p62,抗体,抗,着丝粒蛋白,B,抗体,抗,Lamin,蛋白抗体,2024/11/19,北京大学人民医院,88,抗平滑肌抗体(anti-smooth muscle anti,2024/11/19,北京大学人民医院,89,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,疾病类型 相关自身抗体,自身免疫性肝炎（,AIH ）,型,AIH ANA/ASMA,型,AIH anti-LKM-1 anti-LC-1,型,AIH anti-SLA,(,可溶性肝抗原,),原发性胆汁性肝硬化（,PBC）,AMA (M2/M4/M8/M9 ),anti-gp210， sp100,ACA,原发性硬化性胆管炎（,PSC）,pANCA,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,2023/10/4北京大学人民医院89自身免疫性肝病及其自身,2024/11/19,北京大学人民医院,90,抗线粒体抗体,2023/10/4北京大学人民医院90抗线粒体抗体,2024/11/19,北京大学人民医院,91,抗平滑肌抗体,抗,LKM-1,抗体,2023/10/4北京大学人民医院91抗平滑肌抗体抗LKM-,2024/11/19,北京大学人民医院,92,（一）桥本甲状腺炎相关自身抗体,抗甲状腺球蛋白抗体,(TG Ab),抗甲状腺过氧化物酶抗体（,TPO Ab,）,抗促甲状腺素受体抗体（,TSH-R Ab,）,（二）糖尿病相关自身抗体,胰岛细胞抗体,胰岛素抗体,谷氨酸脱羧酶抗体,九、,内分泌疾病相关自身抗体的检测与应用,2023/10/4北京大学人民医院92（一）桥本甲状腺炎相关,2024/11/19,北京大学人民医院,93,抗甲状腺抗原抗体（猴甲状腺）,抗,TPO,抗体,抗,TG,抗体,2023/10/4北京大学人民医院93抗甲状腺抗原抗体（猴甲,抗乙酰胆碱受体,(anti-acetylchocine receptor, AchR),抗体：,常用,ELISA,进行检测。该抗体是重症肌无力的标志性抗体，约,90%MG,患者阳性，其滴度与病情轻重无相关性。,抗骨骼肌抗体,(anti-skeletal muscle antidobies,，,StrAb),：,多见于,60,岁以上及成年后发病的重症肌无力患者，较少见于,20,岁以下的重症肌无力患者。对成年重症肌无力患者是否并发胸腺瘤有很好的鉴别诊断价值。,抗神经元核抗体,1,型,(anti-neuronal nuclear antibodies,type1),：,又称,Hu,抗体，主要见于类瘤性感觉神经病及类瘤性脑脊髓炎，多为小细胞肺癌，也可合并有成神经细胞瘤、前列腺癌、肉瘤等，还可见于类瘤性斜视眼阵挛,/,肌阵挛。,2024/11/19,北京大学人民医院,94,十、神经系统自身免疫性疾病相关自身抗体的检测及其临床意义,抗乙酰胆碱受体(anti-acetylchocine rec,抗神经元核抗体,2,型,(anti-neuronal nuclear antibodies,type2),：,又称,Ri,抗体，主要见于大脑、脑干、脊髓功能紊乱，较少见于感觉运动神经病；也为乳腺癌或小细胞肺癌的标志之一。,抗普肯耶细胞抗体,(anti-Purkinje cell antibodies,PCA-1),：,又称,Yo,抗体，多见于女性，通常为高滴度（,1:1000,以上），脑脊液滴度常高于血清,；,对诊断副瘤性小脑变性合并卵巢及乳腺癌高度特异,；,如已知为癌症患者，又出现小脑功能紊乱症状，测到高滴度,Yo,抗体将证实为类瘤性小脑疾患，肿瘤去除后，抗体滴度会降低甚至消失。,2024/11/19,北京大学人民医院,95,抗神经元核抗体2型(anti-neuronal nuclea,2024/11/19,北京大学人民医院,96,炎症性肠病相关自身抗体,抗胰腺腺泡抗体,抗酿酒酵母抗体,抗小肠杯状细胞抗体,pANCA,萎缩性胃炎及恶性贫血相关自身抗体,抗胃壁细胞抗体,抗内因子抗体,十一,、,胃肠道疾病相关自身抗体的检测与应用,2023/10/4北京大学人民医院96炎症性肠病相关自身抗体,2024/11/19,北京大学人民医院,97,炎症性肠病包括溃疡性结肠炎（,ulcerative colitis,UC,）和克罗恩病（,Crohns disease,CD,）。,萎缩性胃炎及恶性贫血,2023/10/4北京大学人民医院97炎症性肠病包括溃疡性结,2024/11/19,北京大学人民医院,98,第三节,自身抗体检测的常用方法,及检测流程,2023/10/4北京大学人民医院98第三节 自身抗体检测的,2024/11/19,北京大学人民医院,99,95%,99%,可排除,SLE,（） SLE,治疗缓解,病情特重（大量,IC,沉积消耗抗体）,（）,低滴度 常见于,RA,等其它自身免疫性疾病,高滴度可作为诊断,SLE,的依据,ENA,抗体谱检测,（）,不能排除,抗,dsDNA,、,Sm,、,rib,抗体,（）,可帮助诊断,ANA,初筛,（,IIF,）,一、,实验室方法的选择,2023/10/4北京大学人民医院99,2024/11/19,北京大学人民医院,100,筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合,选择相关的自身抗体检测项目,切忌盲目的全面检测,实验中应同步设置阳性和阴性对照,二、自身抗体检测的一般原则,2023/10/4北京大学人民医院100 筛查性试验与确诊,2024/11/19,北京大学人民医院,101,三、,自身抗体检测结果的解释,1.,掌握不同抗体检测的灵敏度和特异性；联合检测,2.ANA,阳性不仅见于自身免疫病，也可以见于健康人、老年人、感染、肿瘤等患者。,3.,某些自身抗体出现于临床症状之前，应定期复查，监测病情,4.IIF,检测自身抗体，报告荧光模型要慎重、客观,5.,不同方法有各自的灵敏度和特异性，同一项目用不同方法检测，会有差异,2023/10/4北京大学人民医院101三、自身抗体检测结,2024/11/19,北京大学人民医院,102,在自身免疫病患者体内，因有多种自身抗原的存在，自身抗体的种类也可有交叉重叠现象，故实验中检测出多种自身抗体阳性时还必须结合临床症状进行综合分析。,第四节,自身免疫性疾病相关的其它检验项目及其临床意义,2023/10/4北京大学人民医院102 在自身免疫病患,2024/11/19,北京大学人民医院,103,自身抗体免疫球蛋白,II,型及,III,型自身免疫病消耗补体补体 监测病情,一、免疫球蛋白及补体检测及临床意义,2023/10/4北京大学人民医院103自身抗体免疫,2024/11/19,北京大学人民医院,104,淋巴细胞数量及功能反应患者体内免疫细胞状态,二、淋巴细胞检测及临床意义,2023/10/4北京大学人民医院104淋巴细胞数量及功能,2024/11/19,北京大学人民医院,105,细胞因子介导和调节免疫应答及炎症反应或应用治疗监测病情或指导治疗,三、细胞因子检测及临床意义,2023/10/4北京大学人民医院105 细胞因子介导,2024/11/19,北京大学人民医院,106,CIC,与多种自身免疫病相关,辅助诊断疾病,四、循环,免疫复合物,检测及临床意义,2023/10/4北京大学人民医院106 CIC与多种自身,2024/11/19,北京大学人民医院,107,患者郝,，女，,18,岁，学生，海滩上太阳光暴晒,4,天后，脸颊及鼻梁处出现大片红斑。一月来晨起时双侧指关节及髋关节有僵硬感，但随白天时间而有所减轻。,体检：体温,36.8,，脉搏,80,次,/,分，呼吸,18,次,/,分，,BP100/70mmHg,。一般状况良好。,脸颊及鼻梁处见大片红斑，表面有鳞屑。指、趾关节轻度肿胀。,2023/10/4北京大学人民医院107患者郝，女，18,2024/11/19,北京大学人民医院,108,实验室检查：,血液一般检查：,RBC 4.210,12,/L,，,Hgb 130g/L,，,HCT 0.41,；,WBC 6.810,9,/L,；,PLT22010,9,/L,，血沉,4 6mm/1,小时末。,免疫学检查：血清,ANA 11280,阳性，抗,dsDNA,抗体,1320,阳性，抗心磷指抗体（,-,），,C3 0.73 g/L,，直接或间接,Coombs,试验（,-,）。,尿液检查：阴性。,2023/10/4北京大学人民医院108实验室检查：,2024/11/19,北京大学人民医院,109,经抗疟药物治疗和避免阳光照射后，病情好转，但一个月后，指关节及髋关节的疼痛加剧，寒颤并连续,2,晚发烧,39,。耳后、颈部淋巴结肿大，体重也逐渐下降。检查，脸部红斑已消退，但手指、脚趾关节近端肿大。实验室检查,dsDNA,抗体,12560,阳性，,C3,水平进一步下降。经用强的松及非固醇类消炎药治疗后好转，此后一个月复查,C3,水平恢复正常。,2023/10/4北京大学人民医院109 经抗疟药物治疗和避,2024/11/19,北京大学人民医院,110,思考题：,1,该病初步诊断是什么？,2,为何经常检测血清,C3,水平？,3,尿液常规检查阴性，说明什么？,4,如果患者血清,IgG,水平高达,18.2 g/L,，如何解释？,5,如果对耳后和颈部肿大的淋巴结进行活检，结果又会怎样？,2023/10/4北京大学人民医院110思考题：,2024/11/19,北京大学人民医院,