实训7紫外线变选育-淀粉酶高产菌株

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实训七 紫外线诱变选育,-,淀粉酶,高产菌株,微生物与发酵工艺,一、实验目的,1.学习菌种的物理因素诱变育种根本技术。,2.通过诱变技术筛选出高产-淀粉酶的菌株。,紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素，其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线灯，照射距离为20-30cm，照射时间依菌种而异，一般为1-3min，死亡率控制在50-80为宜。被照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯种的出现。同时，对于细菌细胞的生理状态那么要求培养至对数期为最好。,二、实验原理,本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌，通过透明圈法初筛，选择淀粉酶活力高的生产菌株。,二、实验原理,1.菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌,2.器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器含转子、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、1、5、10mL吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球,三、实验材料,3.,培养基和试剂,无菌水、,75%,酒精,0.5,碘液 碘片,1g,、碘化钾,2g,、蒸馏水,200mL,，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘片全部溶解后，加足水即可。,选择培养基 可溶性淀粉,2g,，牛肉膏,1g,，,NaCl 0.5g,，琼脂,2g,，蒸馏水,100mL,，,pH6.8,7.0,，,121,灭菌,20 min,。,肉汤培养基 牛肉膏,0.5g,，蛋白胨,1g,，,NaCl 0.5g,，蒸馏水,100mL,，,pH7.2,7.4,，,121,灭菌,20 min,。,三、实验材料,1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中，于37振荡培养12h，即为对数期的菌种。,2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中，以3000 r/min离心10min，弃去上清液。参加无菌水9mL，振荡洗涤，离心10min，弃去上清液。参加无菌水9mL，振荡均匀。,四、实验步骤,3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中内放一个磁力搅拌棒，置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下距离30cm照射0.5-1min。4.取诱变后菌悬液于选择培养基平板上，用涂布器涂匀。置37暗箱培养48h。5.在长出菌落的周围滴加碘液，观察并测定透明圈直径C和菌落直径H，挑选C/H值最大者接入斜面保藏。,四、实验步骤,1.,紫外线对人体的细胞，尤其是人的眼睛和皮肤有伤害，长时间与紫外线接触会造成灼伤。故操作时要戴防护眼镜，操作尽量控制在防护罩内。,2.,空气在紫外灯照射下，会产生臭氧，臭氧也有杀菌作用。臭氧过高，会引起人不舒服，同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的含量不能超过,0.1,-1,。,五、本卷须知,1.,利用紫外诱变育种，应注意哪些因素,?,2.,为什么诱变育种后要挑选,C/H,值最 大者接入斜面保藏,?,六、结果与讨论,