HCV-抗体检测介绍解析ppt课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,Anti-HCV,检测的挑战和应对,Anti-HCV 检测的挑战和应对,丙型肝炎,面临的挑战,全球性的公共卫生的问题,肝脏疾病的最重要的原因,全球性流行性疾病,不确定的传播方式,输血，不洁注射，母婴传播，医源性感染，性传播等,30%,感染者感染途径不明,“隐匿”的杀手,50-90%,感染者无症状,30%,感染者,ALT,正常,通常在筛查中发现,进行性疾病,55-85%,的感染者会发展为慢性感染,丙型肝炎 面临的挑战全球性的公共卫生的问题,HCV,病毒学特征,黄病毒属,1,有衣壳蛋白包裹,2,已知,6,种基因型，,80,个亚型,3,病毒基因组具有高度变异性,3,形成不同基因构成的病毒亚群或准种,1,4,增殖速度：,10,12,个,/,天,2,1.Purcell R.NIH Consensus Conference on Hepatitis C.1997,;,2.Neumann A,et al.Science 1998;282:103,;3,.Lauer G 345:41,;,4,.Hoofnagle J.NIH Consensus Conference on Hepatitis C.1997,衣壳,RNA,基因组,病毒颗粒 核心蛋白,HCV病毒学特征黄病毒属11.Purcell R.NIH,中国丙肝临床报告病例逐年递增,中国卫生部公告,.,庄辉,.2012,世界肝炎日全国丙肝专题会议,.,中国目前约有,1000,万例丙肝感染者,中国丙肝临床报告病例逐年递增 中国卫生部公告.庄辉.20,临床报告病例仅是总体患者的冰山一角,中国目前约有,1000,万例,HCV,感染者,中国卫生部公告,.,庄辉,.2012,世界肝炎日全国丙肝专题会议,.,超过,90%,的,HCV,感染者尚未被发现,历年报告临床病例总和,100,万例,临床报告病例仅是总体患者的冰山一角中国目前约有1000万例H,HCV,特征决定,准确的检测是疾病管理最重要防线,病毒基因组具有高度变异性,目前尚无预防性疫苗,HCV,在体外持久的稳定性,丙肝患者体液污染的器械具有很强的传染性,对于,Anti-HCV,筛查阳性者应及早确诊、规范治疗,HCV特征决定准确的检测是疾病管理最重要防线病毒基因组具有,HCV,感染诊断实验的选择,方法,筛查,确诊,疗程,疗效的评估,持久性应答预测,ALT,Anti-HCV,RIBA,HCV,RNA,HCV,基因分型,HCV感染诊断实验的选择方法筛查确诊疗程疗效的评估持久性应,Anti-HCV,是,HCV,感染筛查的指标,80%,急性感染进展为慢性感染,Anti-HCV是HCV感染筛查的指标 80%急性感染进展为,Anti-HCV,的漏检和假阳性,是困扰实验室问题之一,Anti-HCV 的漏检和假阳性是困扰实验室问题之一,Anti-HCV,确认阳性*,+,-,Anti-HCV,+,9999,(TP),9900(FP),PPV=9999/(9999+9900),=50.25%,-,1,(FN),980100,(TN),NPV=989,010/(1+989,010)=99.9999%,感染者,10,000,未感染,990,000,灵敏度,=99.99%,特异性,=,99%,prevalence=1%,在低感染人群，假阳性不可忽略,1%,的感染率，如特异性,99%,，,PPV,只有,50%,Anti-HCV 确认阳性*+-Anti-HCV+999,抗-,HCV,筛查检测,报告,阴性,或,根据,S/Co,比值判定为阳性,所有阳性结果,高,S/Co,比值阳性*,报告,低,S/Co,比值阳性*,RIBA HCV,检测,或,阳,性,报告,阴,性,报告,不,确,定,报告,阳性,阴,性,RIBA HCV,检测,HCV RNA,的,NAT,检测,阳,性,报告,阴,性,报告,不,确,定,报告,报告,美国,CDC Anti,-,HCV,实验室检测结果报告导则,1,1,，,Miriam J.Alter et al-Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus,抗-HCV筛查检测报告阴性或根据S/Co比值判定,RIBA,（以,Chiron,为例）,两个以上条带（,1+,）为阳性,RIBA（以 Chiron为例）两个以上条带（1+）为阳,Anti-HCV,检测灵敏度也是不能忽略,（70天）,DNA,阳性,3,rd,gen,1,st,gen,2,nd,gen,不同的,3rd,试剂,Anti-HCV检测灵敏度也是不能忽略,第三代试剂之间也有明显差异,2006 Hep/Retro Symposium III Washington D.C.,24-26 September 2006,第三代试剂之间也有明显差异,Anti-HCV,有反应性进一步结果解释,Anti-HCV,有反应性,RIBA,（,+,）,Anti-HCV,有反应性,HCV RNA,（,+,）,Anti-HCV,确认阳性,Anti-HCV,确认阴性,CDC,，,Guidelines for Laboratory Testing and Result,Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus,2003,Anti-HCV,有反应性,RIBA,（,-,）；,Anti-HCV,有反应性,HCV RNA(-,）,/RIBA,（,-,）,HCV RNA,（,-,）,/RIBA IND,视为低风险,Anti-HCV有反应性进一步结果解释Anti-HCV 有反,Anti-HCV,有反应性进一步结果解释,HCV,有反应性,RNA,(-),仍需要进行,RIBA,确认，尤其是低流行区域,根据流行率 的确认流程,流行率,20%,先,RNA,，后,RIBA,最经济,流行率,10-25%,两者方案，费用相当,CDC,，,Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus,2003,Anti-HCV有反应性进一步结果解释HCV 有反应性,临床需要高性能的检测试剂,假阳性,不必要的补充确认检测,不必要的就诊和心理伤害,医疗纠纷,假阴性,传播扩散风险,医疗安全风险,延误病情,临床需要高性能的检测试剂假阳性假阴性,C,E1,E2,NS2,NS3,NS4,NS5A,NS5B,5UTR,结构蛋白,非结构蛋白,3UTR,a),b),对于,HCV,病毒认知的深入使检测试,剂性能逐渐提高,聚合酶抑制剂,NS5A,抑制剂,蛋白酶抑制剂,新,药,物,诊断试剂,Core,蛋白和,NS3,蛋白的免疫原性最强，是抗体检测最重要组份；,CE1E2NS2NS3NS4NS5ANS5B5UTR结构蛋,第三代,Anti-HCV,检测试剂,精选抗原靶位，提升检测性能,NS3/Core,抗体出现最早,NS3,抗原在早期诊断和提高灵敏度上都均有重要价值，提高,NS3,抗原的配比,Core,抗原中的,N,端保守区域易产生交叉反应，适度减少,Core,抗原的配比,随着重组技术的进展，使原料抗原的活性更强,各种抗原的配比调整,第三代,Anti-HCV,的平均窗口期是,6-8,周；,NS3,和,Core,抗体要早于,NS4,和,NS5,抗体数周时间,第三代试剂中加入,Core,，,NS3,，,NS4,（部分厂家加入,NS5),抗原。,第三代Anti-HCV 检测试剂精选抗原靶位，提升检测性能,影响试剂性能的主要因素,各种抗原的配比平衡,增加,NS3,抗原，同时减少核心区抗原,益处：,提升灵敏度,减少了非特异性反应,挑战：,“度”的把握,掌握不好，容易漏检,抗原的选择和生产工艺,HCV,病毒缺乏有效体外培养系统，难以从病毒中分离出天然抗原；生产的抗原材料与天然抗原的接近度越高，试剂性能越好。,NS3,是构像依赖性抗原，需要使用重组抗原,不同批次间抗原的均一性非常重要；,NS4/Core,抗原通常使用合成多肽抗原；,影响试剂性能的主要因素 各种抗原的配比平衡增加NS3抗,了解试剂性能，,是放心应用的前提！,了解试剂性能，是放心应用的前提！,Elecsys Anti-HCV II,双抗原夹心法，,18,分钟,Elecsys Anti-HCV II双抗原夹心法，18,Elecsys Anti-HCV II,全面升级,viral(+)RNA genome,viral polyprotein,C,E1,E2,NS1,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A,NS5B,structural proteins,non-structural proteins,合成肽,合成肽,重组抗原,New!,新的试剂缓冲液,减少干扰,增强试剂的稳定性,应用,Core,，,NS3,，,NS4,抗原片段,不再应用,NS5,（对于灵敏度提升有限但是会降低检测特异性）,Elecsys Anti-HCV II 全面升级 vir,Elecsys,Anti-HCV II,多中心评估,评估单位,评估内容,1,st,:,多中心研究,北京大学人民医院,（,Elecsys/Vitros/Architect,）,上海交通大学新华医院,（,Elecsys/Vitros,）,四川大学华西医院,(Elecsys/Lizvon/Intec),2,nd,:,特殊样本的评估,卫生部临检中心,（,多种方法,）,灵敏度,血清转换盘样本,日常检测阳性样本,临检中心早期感染样本,特异性,实验室常规检测样本,确认方法,：,MIKROGEN,RIBA HCV,CHIRON,RIBA HCV 3.0,Cobas,Taqman HCV RNA,Elecsys Anti-HCV II多中心评估评估单位评,应用血清转换盘评估灵敏度,Elecsys,Anti-HCV II,灵敏度最高,应用血清转换盘评估灵敏度Elecsys Anti-HCV,血清转换盘是客观评价早期感染灵敏度的标准,血清转换盘是客观评价早期感染灵敏度的标准,常规样本的评估,北京大学人民医院,(n=830),样本数,N=830,Elecsys,Anti-HCV II,Vitros,Anti-HCV,Architect,Anti-HCV,阳性,真阳性,17,17,17,16,假阴性,0,0,1,阴性,真阴性,813,809,805,805,假阳性,4,8,8,统计,灵敏度,100%,100%,94%,特异性,*,99.50%,99.02%,99.02%,阳性率,2%,*,RIBA,不确定,+RNA(-),结果解释为阴性,常规样本的评估北京大学人民医院(n=830)样本数E,常规样本的评估,上海交通大学新华医院（,n=495),样本数,N=495,Elecsys,Anti-HCV II,Vitros,Anti-HCV,阳性,真阳性,1,1,1,假阴性,0,0,阴性,真阴性,494,494,492,假阳性,0,2,统计,灵敏度,100%,100%,特异性*,100%,99.60%,阳性率,0.2%,*没有,HCV RNA,结果,排除,RIBA,不确定样本,常规样本的评估上海交通大学新华医院（n=495)样本数,常规样本的评估,四川大学华西医院,(n=1044),样本数,N=1044,Elecsys,Anti-HCV II,Elecsys,Anti-HCV,Intec,Anti-HCV,Lizvon,Anti-HCV,阳性,真阳性,8,8,8,7,7,假阴性,8,8,1,1,阴性,真阴性,1036,1034,1022,1036,1034,假阳性,2,14,0,