综合性血液病分子诊断体系课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,We,Promote the Applications & Innovations of Molecular Hematology,综合性血液病分子诊断体系,的建立和实践,刘红星,lhongxing,陆道培血液,肿瘤中心 分子诊断室,综合性血液病分子诊断体系的建立和实践刘红星 lhon,我们一直在进步,更强的团队力量,更好的硬件支持,更多的新项目,优化的项目设置,我们一直在进步更强的团队力量,血液病诊断和治疗已经进入分子生物学时代,分类标准：,1985 FAB WHO 2001 2008,1960,年,1973,年,1985,年,1995,年,1997,年,2001,年,2008,年,2011,年,鉴定,Ph,染色体,鉴定,t(9;22,),易位,鉴定,BCR-ABL1,STI571,临床试验,FDA,批准,Imatinib,BCR-ABL1,定量,标准化会议,19851988,年,Mullis,等发明,PCR,技术,HGP,，,1985,年提出，,1990,年启动,2000,年，人类基因组草图完成,2003,年，,HGP,完成，后基因组时代开始,第二代测序技术,荧光定量,PCR,技术,第一台毛细管基因测序仪,生物信息：,检测技术：,第二代测序临床应用,定量,PCR,临床应用,定性,PCR,临床应用,血液病诊断和治疗已经进入分子生物学时代分类标准：,基因组学的研究推动疾病分子标记,的发现和临床应用,97.3%,的,AML,患者携带其中一种或以上的基因突变,预后差：,FLT3-ITD,、,MLL-PTD,、,ASXL1,、,PHF6,预后好：,CEBPA,、,IDH2,、,NPM1,伴,IDH1/IDH2,突变,伴,DNMT3A,、,NPM1,突变、,MLL,易位患者，采用大剂量的柔红霉素治疗可提高生存率,Prognostic Relevance of Integrated Genetic Profiling in Acute Myeloid Leukemia,Jay P. Patel, et al., N Engl J Med 2012;366:1079-89,基因组学的研究推动疾病分子标记的发现和临床应用97.3%的,肿瘤的突变组,每一个肿瘤的发生都是一个基因团伙在犯罪,每一个肿瘤基因组都是不同的基因突变的组合,白血病分子诊断,只根据一种融合基因分类的患者仍有异质性,AML1-ETO,VS. AML1-ETO+KIT,突变,只检测一种突变也是不够的,NPM1 VS. FLT3,VS. NPM1+FLT3,新的突变出现提前可能预示临床进展,急变、耐药等,对肿瘤突变组的全面了解有助于指导个性化治疗,肿瘤的突变组每一个肿瘤的发生都是一个基因团伙在犯罪,分子诊断的发展趋势及挑战,Lucy A. Godley, DOI:0.1056/NEJMe1200409,分子诊断的发展趋势及挑战Lucy A. Godley, D,分子诊断临床应用遇到的问题,临床医师如何认识新的项目？,实验室如果向临床医师推荐新的项目？,如何提高突变的检测灵敏度？,如何降低检测费用？提高发现分子标记的速度？,分子诊断临床应用遇到的问题临床医师如何认识新的项目？,综合性血液病分子诊断体系,融合基因筛查,定量监测,MRD,耐药、疾病进展监测,基因突变筛查,定量监测,MRD,原癌基因表达谱定量监测,个体差异相关的药物代谢、药物不良反应等,其它项目：移植后嵌合状态；,IG,、,TCR,克隆性；,BCR-ABL1,变异分析等,孟德尔遗传病：先天性免疫缺陷、范可尼贫血等,综合性血液病分子诊断体系融合基因筛查定量监测MRD耐药、疾病,“活在当下”与“追本溯源”,用初治时的石蜡、形态涂片标本进行基因突变筛查,从实验方案和流程设计上加快报告速度,新技术的应用和技术创新,融合基因和基因突变筛查,针对性监测,降低总体检测费用，争取宝贵时间,内容将不断增加，价格一般不再调整,综合性血液病分子诊断体系,“活在当下”与“追本溯源”综合性血液病分子诊断体系,高通量基因测序的应用,降低单位检测成本,肿瘤,“突变组”分析,变为可能,深度测序,突变,MRD,监测,IG,、,TCR,免疫组库分析,高通量基因测序的应用降低单位检测成本,白血病融合基因和基因突变检测,白血病融合基因和基因突变检测,V2.3,版,31,种融合基因筛查,V2.3版31种融合基因筛查,新的融合基因筛查项目,AML,融合基因筛查（,13,种）,AML1-EAP(1),；,AML1-ETO(1),；,AML1-MDS1(2),；,CBFB,-,MYH11(8),；,DEK-CAN(1),；,NPM-ALK(1),；,NPM-MLF1(1),；,NPM-RARA,(2),；,PLZF-RARA,(2),；,PML-RARA,(5),；,SET-CAN(1),；,TEL-ABL1(2),；,TLS-ERG(5),ALL,融合基因筛查（,10,种）,BCR-ABL1(6),；,E2A-HLF(3),；,E2A-PBX1(2),；,NPM-ALK(1),；,NPM-MLF1(1),；,SET-CAN(1),；,SIL-TAL1(1),；,TEL-ABL1(2),；,TEL-AML1(2),；,TLS-ERG(5),MPN,融合基因筛查（,23,种）,AML1-MDS1(2),；,BCR-ABL1(6),；,FIP1L1-PDGFRA(5),；,TEL-ABL1(2),；,18,种,PDGFRB fusion gene,；,TLS-ERG(5),MLL,融合基因筛查,(11,种,),MLL-PTD,；,MLL-AF1p(4),；,MLL-AF1q(4),；,MLL-AF4(12),；,MLL-AF6(4),；,MLL-AF9(8),；,MLL-AF10(18),；,MLL-AF17(1),；,MLL-AFX(4),；,MLL-ELL(8),；,MLL-ENL(4),新的融合基因筛查项目AML融合基因筛查（13种）,融合基因筛查的特点和意义,从分子水平快速鉴定患者基因异常,节省时间和总体费用,大多数情况下，某一患者只有一种融合基因阳性,提供按,WHO2008,标准分类的依据,预后判断和指导用药,提供灵敏的,MRD,监测指标,融合基因筛查的特点和意义从分子水平快速鉴定患者基因异常,病例：,格列卫治疗,FIP1L1-PDGFRA,白血病,男，,43,岁，贫血，血小板低，嗜酸粒细胞增多,31,种融合基因筛查：,FIP1L1-PDGFRA,阳性,格列,卫每周,200mg,每周,100mg,治疗,血象很快转为,正常,FIP1L1-PDGFRA,定量逐渐降低,20090728 32.56%,20091021 5.83%,20100426 0.0089,%,病例：格列卫治疗FIP1L1-PDGFRA白血病男，43岁，,基因突变筛查项目,AML,基因突变筛查（,11,种）,CEBPA,；,DNMT3A,；,FLT3-ITD/TKD,；,IDH1,；,IDH2,；,KIT,；,KRAS,；,NPM1,；,NRAS,；,TET2,；,WT1,ALL,基因突变筛查（,11,种）,FBXW7,；,FLT3,；,KRAS,；,IKZF1,；,JAK1,；,JAK2,；,NOTCH1,；,NRAS,；,PAX5,；,PHF6,；,MLL-PTD,MPN,基因突变筛查（,7,种）,IDH1,；,IDH2,；,JAK2,；,KIT,；,MPL,；,SH2B3(LNK),；,TET2,MDS,基因突变筛查（,8,种）,DNMT3A,；,IDH1,；,IDH2,；,JAK2,；,MPL,；,SF3B1,；,SRSF2,；,TET2,基因突变筛查项目AML基因突变筛查（11种）,基因突变筛查的特点和意义,同一患者可能同时存在多种基因突变,可与融合基因或其它基因突变同时存在,同一患者的同一基因可能存在不同的突变,克隆性判断；诊断分型；预后判断；个体化用药,基因突变在疾病发展过程中可能会变化,FLT3,、,IKZF1,等，与疾病进展有关,目前大多数基因突变作为,MRD,监测指标有困难,用高通量测序进行深度测序分析可帮助实现,可以用初诊时的石蜡、涂片标本回顾性分析,基因突变筛查的特点和意义同一患者可能同时存在多种基因突变,KIT,基因突变,主要见于,伴,inv(16,) /CBFB-MYH11,融合基因,的,M4,和,伴,t(8;21,)/,AML1-ETO,的,M2,伴,KIT,突变的患者预后相对较差,伴,KIT,突变的患者用格列卫治疗有一定效果,KIT基因突变主要见于伴inv(16) /CBFB-MYH1,IKZF1,基因突变,主要见于,ALL,约,20%,儿童,B-ALL,；,30%,成人,B-ALL,；,5%,T-ALL,约,63.0,83.7%,的,BCR-ABL1,阳性,B-ALL,约,20%,染色体核型正常的,B-,ALL,患者,MLL,融合基因阳性的,ALL,患者常伴,IKZF1,突变,B-ALL,患者独立的预后不良因素,CML,患者急淋变时约,86%,发生,IKZF1,突变,建议,CML,患者复诊时检测，可提前预警急变,IKZF1基因突变主要见于ALL,病例,男，,30,岁，形态学为,M1,型，柔红霉素,+,阿糖胞苷化疗一疗程后,NPM1,突变阳性,42.15%,FLT3,突变阳性,31,种融合基因阴性，,HOX11,表达阳性,病例男，30岁，形态学为M1型，柔红霉素+阿糖胞苷化疗一疗程,血液系统遗传病分子诊断,血液系统遗传病分子诊断,血液系统遗传病检测项目,噬血细胞综合征相关基因突变,PRF1,、,UNC13D,、,STXBP2,、,STX11,SH2D1A,、,XIAP,范可尼贫血基因突变,FANCA 60%,、,FANCC,15%,、,FANCG,10%,WAS,综合征,遗传性铁粒幼细胞性贫血,血液系统遗传病检测项目噬血细胞综合征相关基因突变,噬血细胞综合征相关基因突变,和疱疹病毒检查结果,基因突变谱型,疱疹病毒感染谱型,噬血细胞综合征相关基因突变和疱疹病毒检查结果基因突变谱型疱,先天遗传因素和疾病表型关系,先天遗传因素由弱到强的一组病因相关的症候群？,FHL,，,XLP,CAEBV,EBV,相关,淋巴瘤,IM,先天遗传因素和疾病表型关系先天遗传因素由弱到强的一组病因相关,范可尼贫血突变检测,部分患者可无显著的先天畸形,部分患者可染色体断裂实验阴性而基因突变阳性，不能相互替代,可提供范可尼贫血与继发再障鉴别诊断的依据,范可尼贫血突变检测部分患者可无显著的先天畸形,范可尼贫血基因突变患者示例,女，,6,岁，患者骨髓造血衰竭、发育迟缓、身材矮小、皮肤黑、两眼间距宽、多指。,染色体断裂实验及彗星电泳实验结果阳性。,c.989_995delACAGCCC/p. H330LfsX2,c.3971CT/p.P1324L,范可尼贫血基因突变患者示例女，6岁，患者骨髓造血衰竭、发育迟,致谢,分子诊断室：,王芳、滕文、王岩、牛倩、王旭、郭磊、王昊、樊江燕、管少帅、王绵绵、尹青,检验科其它实验室和临床协作,其它协作医院,Email: lhongxing,新浪微博：解码生命,-,刘红星,致谢分子诊断室：Email: lhongxinggmail,